检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2023年第5期43卷 724-732页

作者：张智玉曹军梁俊波中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的探讨胆管类器官(ICO)分化模型用作肝脏发育模型的应用潜力。方法结合CRISPR/Cas9基因编辑技术和ICO分化模型,使用分别在扩增培养基、分化培养基及敲除肝细胞核因子4α(Hnf4α)后在分化培养基培养的类器官的全转录组测序数据分析ICO... 详细信息

目的探讨胆管类器官(ICO)分化模型用作肝脏发育模型的应用潜力。方法结合CRISPR/Cas9基因编辑技术和ICO分化模型,使用分别在扩增培养基、分化培养基及敲除肝细胞核因子4α(Hnf4α)后在分化培养基培养的类器官的全转录组测序数据分析ICO的转分化过程,使用公共测序数据集分析胎肝发育过程中的分化,并从基因表达的变化趋势、生物学功能,以Hnf4α为例的regulon调控关系这三个方面对两种分化过程进行比较。结果ICO转分化过程中基因表达的变化趋势与胎肝发育总体一致;转分化过程中表达上调的差异基因主要富集在与肝实质细胞生物学功能密切相关的代谢相关通路;ICO转分化过程中Hnf4α的下游靶基因与胎肝发育部分相似。结论ICO转分化模型可以部分模拟胎肝发育中的分化过程。

关键词：胆管类器官转录组测序分化肝细胞核因子4α(Hnf4α)

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专业短视频应用于微生物学课程思政教育的探索

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2023年第6期 13-16页

作者：杨银管远志北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所病原生物学系北京100005

探讨合理的微生物学课程思政及效果评价方法。方法临床医学八年制 2019 级学生共 75 人,向学生提供六份传染病防控视频,由学生利用课余时间观看并撰写观后感。结果所有学生都观看了至少 3 个视频并提交了观后感,其中显示印象最深刻... 详细信息

探讨合理的微生物学课程思政及效果评价方法。方法临床医学八年制 2019 级学生共 75 人,向学生提供六份传染病防控视频,由学生利用课余时间观看并撰写观后感。结果所有学生都观看了至少 3 个视频并提交了观后感,其中显示印象最深刻的内容依次为:“医疗卫生及科研工作者的优良品质/严谨科研精神和专业能力等”、 “政府的果断决策/强大的综合国力/民众的积极配合在传染病防控中发挥重要的作用”、 “预防医学/公共卫生的重要性”,占总人数的比例分别为 94.67%、88.00%和 76.00%。结论向学生提供此类视频并由学生自由选择、观看,结合专业知识及传染病防控实践融入思政教育的方法学生接受程度较高,主动性较强,取得了很好的效果,有一定的推广价值。

关键词：课程思政医学微生物学传染病防控视频自主学习

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γ-氨基丁酸促进水疱性口炎病毒感染小鼠巨噬细胞

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基础医学与临床 2023年第6期43卷 936-940页

作者：赵璐刘洋中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的探究代谢物γ-氨基丁酸(GABA)对病毒感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞的影响。方法用0、10、30、50和70 mmol/L GABA或PBS处理RAW264.7细胞系10 h,CCK-8法检测细胞活性,用此剂量GABA预处理RAW264.7细胞系,2 h后用表达绿色... 详细信息

目的探究代谢物γ-氨基丁酸(GABA)对病毒感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞的影响。方法用0、10、30、50和70 mmol/L GABA或PBS处理RAW264.7细胞系10 h,CCK-8法检测细胞活性,用此剂量GABA预处理RAW264.7细胞系,2 h后用表达绿色荧光蛋白的重组水疱性口炎病毒(GFP-VSV)或VSV感染8 h,荧光显微镜观察细胞内GFP-VSV的含量;流式细胞术检测细胞内GFP-VSV的水平;RT-qPCR检测VSV RNA及细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平。用0、10、30、50和70 mmol/L GABA预处理小鼠原代腹腔巨噬细胞,2 h后用VSV感染8 h,RT-qPCR检测VSV RNA水平。结果10、30、50和70 mmol/L的GABA对RAW264.7细胞系的活性没有影响,且此剂量的GABA能提高RAW264.7细胞系内GFP-VSV的蛋白水平、VSV RNA水平和细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平(P<0.05),也能提高小鼠原代腹腔巨噬细胞内VSV RNA水平(P<0.05),且均呈剂量依赖性。结论代谢物GABA能以剂量依赖的方式促进VSV感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞,同时细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平也升高。

关键词：病毒感染巨噬细胞 γ-氨基丁酸水疱性口炎病毒

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利用不同方法将小分子NADPH转染进入细胞的比较

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基础医学与临床 2024年第5期44卷 613-618页

作者：李皓玥杜文静李薇中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、细胞生物学系、重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005

目的利用非代谢途径直接将外源小分子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)转染进入细胞内的方法。方法对比3种不同转染试剂(X-tremeGENE TM HP DNA、Lipofectamine TM RNAiMAX和Lipofectamine TM 2000)将NADPH转染到人骨肉瘤细胞系U2OS和... 详细信息

目的利用非代谢途径直接将外源小分子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)转染进入细胞内的方法。方法对比3种不同转染试剂(X-tremeGENE TM HP DNA、Lipofectamine TM RNAiMAX和Lipofectamine TM 2000)将NADPH转染到人骨肉瘤细胞系U2OS和小鼠胚胎成纤维细胞系3T3L1中的效果,并通过油红O染色比较它们对脂肪细胞分化的影响。结果用X-tremeGENE HP DNA转染试剂转染NADPH可以有效提高细胞内NADPH水平(P<0.001)。随着NADPH转染浓度(10μmol/L NADPH与10μL转染试剂)的增加,细胞中的NADPH水平呈剂量依赖性增加。此外使用3种转染试剂在3T3L1前脂肪细胞中转染NADPH,只有使用X-tremeGENE HP DNA转染试剂转染NADPH的脂肪细胞分化更明显(P<0.001)。结论X-tremeGENE HP DNA转染试剂能够成功地将外源NADPH转染进入细胞内,并促进3T3L1脂肪细胞的分化和脂质积累。

关键词：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) 转染细胞培养脂肪细胞分化

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细菌有转录因子吗?——“转录因子”概念的形成和发展浅析

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第6期37卷 691-696页

作者：杨克恭中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院生物化学与分子生物学系北京100005

围绕“细菌是否有转录因子(transcription factors,TFs)”这个问题,近20多年来在国内外学术界存在明显分歧。传统观点认为,细菌没有TFs,调节细菌基因转录起始的是转录激活蛋白和阻遏蛋白,TFs仅仅结合于真核基因启动子。这种观点的典型... 详细信息

围绕“细菌是否有转录因子(transcription factors,TFs)”这个问题,近20多年来在国内外学术界存在明显分歧。传统观点认为,细菌没有TFs,调节细菌基因转录起始的是转录激活蛋白和阻遏蛋白,TFs仅仅结合于真核基因启动子。这种观点的典型代表是某些国际学术权威主编的生物化学和分子生物学类主流原版教材。然而,新观点认为,细菌的结合DNA的转录激活蛋白和阻遏蛋白就是TFs,其含量和重要性不亚于真核。虽然新观点在国际学术期刊发表的学术论文中早已司空见惯,但迄今国内外许多学者仍然心存疑虑。“转录因子”这一概念像许多分子生物学术语一样,伴随学科发展不断更新,从狭义到广义。初期人们曾以为TFs仅仅是真核基因转录起始所必需的,细菌不需要TFs,当时将细菌排除在其适用范围以外可以理解。40年来丰富的科研成果已经证明,大量的转录激活蛋白和阻遏蛋白结合于启动子以外的顺式调控元件,其中既包括真核生物的增强子、沉默子和绝缘子,也有细菌的多种正、负调控元件,这些转录调节蛋白符合转录因子的所有基本特征,是名副其实的“转录因子”。所以,新观点具有科学性和合理性,应该为学术界广泛接受和采用。将来“转录因子”的概念是否会进一步扩大,纳入HAT等染色质修饰蛋白和ncRNAs,甚至拓展到转录的“延伸因子”和“终止因子”,我们对此应该秉持开放态度。

关键词：转录因子细菌学术之争

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H1N1流感病毒HA蛋白疫苗构建策略的筛选

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基础医学与临床 2022年第12期42卷 1885-1890页

作者：郑宁晨杨姣姣张婷王志荣许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系北京100005

目的筛选并确立流感病毒H1N1 A/Nebraska/14/2019血凝素(HA)的最佳蛋白疫苗策略。方法分别构建HA全长、HA胞外区C端不同的突变体及共表达HA/M1的重组杆状病毒,感染昆虫细胞表达80 h后,收取培养上清,Western blot鉴定重组抗原的表达,同... 详细信息

目的筛选并确立流感病毒H1N1 A/Nebraska/14/2019血凝素(HA)的最佳蛋白疫苗策略。方法分别构建HA全长、HA胞外区C端不同的突变体及共表达HA/M1的重组杆状病毒,感染昆虫细胞表达80 h后,收取培养上清,Western blot鉴定重组抗原的表达,同时采用血凝试验间接分析其免疫原性。然后大量表达HA/M1蛋白,Core700纯化后分析蛋白颗粒的理化性质、血凝活性及稳定性。结果2种HA胞外区的C端突变体虽均以三聚体形式表达,但表达上清无血凝活性;HA全长三聚体具有较好的血凝活性,但为膜蛋白,纯化难度大。HA/M1共表达上清具有血凝活性,HA/M1表达上清经Core700纯化,透射电子显微镜分析显示为80 nm~150 nm病毒样颗粒(VLP)。HA-M1-VLP的血凝效价高达26,动态光散射显示HA-M1-VLP在4℃保存3个月性质稳定。结论HA-M1-VLP易于表达纯化、稳定性好,且血凝活性高,可用于流感病毒H1N1蛋白疫苗的研究。

关键词： H1N1 血凝素(HA) 基质蛋白(M1) 病毒样颗粒(VLP)

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EV71外壳蛋白表位肽多克隆抗血清的制备及鉴定

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基础医学与临床 2022年第11期42卷 1661-1666页

作者：李晨张婷王志荣许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系北京100005

目的制备肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白表位肽多克隆抗血清。方法利用5种B细胞表位预测软件对EV71外壳蛋白进行分析,设计针对病毒蛋白(VP)的4种表位肽,即VP1(aa.204-223)、VP2(aa.133-163)、VP3(aa.139-148+aa.173-191)和VP4(aa.1-23),化学合成后与钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联得到相应肽。然后,分别联合MF59/CpGC274佐剂皮下免疫BALB/c小鼠6次,间隔2周,采集血清,用ELISA和Western blot对其抗体活性进行分析。结果4种抗血清均可有效结合EV71病毒和其变性病毒,VP2抗血清与变性病毒的结合活性较高,其余3种与病毒及变性病毒的结合力相当;而且4种抗血清均可与病毒样颗粒(VLP)及变性VLP结合。VP1和VP2抗血清分别与EV71 VLP中的组成蛋白VP1和VP0(VP2和VP4前体蛋白)结合,其中VP2抗血清的结合活性最好,VP1抗血清次之;同时,VP1和VP2抗血清还可与EV71病毒特异性高效结合,且VP2抗血清可同时结合EV71病毒的空心颗粒的VP0及实心颗粒的VP2。VP3和VP4抗血清与VLP和病毒未显示明显的结合活性。结论成功制备了4种EV71表位肽多克隆抗血清,为ELISA和Western blot提供检测工具,并可用于EV71疫苗质控(QC)研究。

关键词：肠道病毒71型疫苗外壳蛋白表位肽抗血清

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腹腔注射白消安对精原干细胞代谢特征的影响

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基础医学与临床 2024年第6期44卷 793-799页

作者：余志鑫邙新雨邹定峰缪时英宋伟李凯中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系、重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005

目的通过构建白消安处理的小鼠模型,探讨其对小鼠睾丸精原干细胞(SSCs)代谢的影响。方法采用8周龄C57BL/6J雄性小鼠,腹腔注射10 mg/kg白消安,于第0天、第5天和第10天取材,并通过免疫磁珠法分选出Thy1阳性细胞。随后对这些细胞进行了纯... 详细信息

目的通过构建白消安处理的小鼠模型,探讨其对小鼠睾丸精原干细胞(SSCs)代谢的影响。方法采用8周龄C57BL/6J雄性小鼠,腹腔注射10 mg/kg白消安,于第0天、第5天和第10天取材,并通过免疫磁珠法分选出Thy1阳性细胞。随后对这些细胞进行了纯度鉴定和代谢组学分析。结果实验发现白消安处理能明显降低小鼠睾丸质量(P<0.05),并损伤睾丸的组织结构。基于主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)模型显示,处理0 d、5 d和10 d的样本组间存在显著的代谢差异。共筛选鉴定出89种差异代谢物,包括谷胱甘肽(GSH)、牛磺酸、精氨酸、必需氨基酸(EAAs)和不饱和脂肪酸(UFAs)等,其重要相关代谢途径涉及甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等。结论白消安通过影响特定的代谢途径,产生明显的生殖毒性效应,导致小鼠睾丸质量下降和组织结构损伤。代谢组学分析其潜在的生殖毒性机制可能与脂质代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等代谢通路有关。

关键词：白消安生殖毒性代谢组学精原干细胞

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新型冠状病毒非结构蛋白14的表达及酶活性分析

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基础医学与临床 2023年第1期43卷 51-58页

作者：陈双徐婧雯丁开云刘建生彭小忠刘红旗昆明医科大学、基础医学院、免疫学系云南昆明650500 中国医学科学院、北京协和医学院、医学生物学研究所云南昆明650118 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法根据大肠埃希氏菌(***)的密码子偏好性,分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子,并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达;... 详细信息

目的获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法根据大肠埃希氏菌(***)的密码子偏好性,分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子,并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达;通过对表达量和可溶性的比较分析,选择一个表达效果最好的重组表达质粒并优化表达条件;目的蛋白经谷胱甘肽亲和柱纯化后,用半胱氨酸家族蛋白酶(3C)切除融合标签,再分别利用谷胱甘肽亲和柱和分子筛柱纯化蛋白质。最后通过尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对其活性进行鉴定。结果Nsp14的基因在大肠杆菌中表达存在较多的稀有密码子,其中部分稀有密码子呈现近距离分布和串联分布。pGEX6P1-GST-OPTI-Nsp14重组质粒在大肠杆菌中表达的可溶性效果最好,其最佳表达温度为30℃。经纯化后获得了较纯的不含标签的Nsp14,该蛋白具有核酸酶活性。结论本研究成功地表达和纯化出具有核酸酶活性的新冠病毒Nsp14,为进一步推进对新冠病毒Nsp14的结构和功能研究奠定了基础,为筛选靶向Nsp14的抗病毒治疗药物提供了有利的条件。

关键词：新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 非结构蛋白14(Nsp14) 原核表达蛋白质纯化核酸酶活性

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鉴定顺铂对人肝癌细胞系转录物组的影响

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基础医学与临床 2024年第3期44卷 352-360页

作者：郭鑫冀梦蝶王琦李雪媛陈阳中国医学科学院、北京协和医学院基础医学研究所、生物化学与分子生物学系、重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005

目的通过不同浓度顺铂(CDDP)处理人肝癌细胞系并进行转录物组测序分析,旨在揭示顺铂处理对肝癌细胞转录水平的影响。方法使用终浓度为0、20、50、100和200μmol/L的顺铂处理肝癌细胞系HepG2、Huh712 h后进行细胞活性检测、免疫荧光和转... 详细信息

目的通过不同浓度顺铂(CDDP)处理人肝癌细胞系并进行转录物组测序分析,旨在揭示顺铂处理对肝癌细胞转录水平的影响。方法使用终浓度为0、20、50、100和200μmol/L的顺铂处理肝癌细胞系HepG2、Huh712 h后进行细胞活性检测、免疫荧光和转录物组测序(RNA-seq),并进行差异表达(DEG)、KEGG及蛋白质相互作用网络分析。结果顺铂处理后HepG2、Huh7细胞活性下降,且DNA损伤增多,不同顺铂浓度处理下两种细胞系中共同上调的基因共有59个,共同下调的基因有81个。共同上调的基因主要富集在肿瘤发生发展相关通路,共同下调的81个基因主要富集在Rap1信号通路、Ras信号通路、调控干细胞多能性的信号通路、轴突的指导和黏附连接等相关通路。分析共同上下调基因的蛋白质相互作用网络中关键节点的生存预后,Jun原癌基因,AP-1转录因子(JUN)的高表达与患者生存期的延长呈显著相关,生长停滞DNA损伤可诱导蛋白α(GADD45A)的低表达与患者生存期的延长呈显著相关。结论揭示了肝癌细胞在顺铂处理下的共性转录物变化。JUN和GADD45A的表达差异可能是耐药机制的关键节点,也为临床治疗提供了重要的预后指标。

关键词：肝癌转录物组测序顺铂基因转录

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