检索结果-内蒙古大学图书馆

中华病理学杂志 2017年第1期46卷 43-48页

作者：卞晓翠杨振丽冯海凉赵晓梅顾蓓李姜孙昊刘玉琴北京协和医学院基础学院病理学系中国医学科学院基础医学研究所 100005 北京协和医学院基础学院细胞资源中心中国医学科学院基础医学研究所 100005

目的：建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株，验证细胞中Cas9的基因编辑活性，方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛... 详细信息

目的：建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株，验证细胞中Cas9的基因编辑活性，方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株；在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA，挑选单克隆，通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。

关键词：细胞系,肿瘤基因编辑

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微粒体谷胱甘肽S转移酶1过度表达促进肝癌发生发展

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基础医学与临床 2018年第7期38卷 950-956页

作者：蔡培黄富强赵齐周贤杨华瑜毛一雷张宏冰中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肝脏外科北京100730

目的探讨微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖、迁移和裸鼠成瘤中的作用。方法 Western blot检测人肝癌样品及肝癌细胞系中MGST1的表达;用慢病毒PLL3.7载体系统构建敲低MGST1的MHCC97H和HCCLM3细胞株及慢病... 详细信息

目的探讨微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖、迁移和裸鼠成瘤中的作用。方法 Western blot检测人肝癌样品及肝癌细胞系中MGST1的表达;用慢病毒PLL3.7载体系统构建敲低MGST1的MHCC97H和HCCLM3细胞株及慢病毒p CDH载体系统构建过表达MGST1的SK-Hep-1细胞株后,用克隆形成实验检测细胞增殖能力;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用皮下移植瘤实验检测MHCC97H细胞裸鼠成瘤能力。结果 71%(17/24)的肝癌组织中MGST1蛋白表达上调。敲低MGST1抑制MHCC97H和HCCLM3细胞的增殖、迁移能力(P<0.05);过表达MGST1促进SK-Hep-1细胞增殖、迁移(P<0.05);敲低MGST1的MHCC97H细胞裸鼠成瘤时间滞后(P<0.01),肿瘤体积减小(P<0.001),裸鼠生存期延长(P<0.001)。结论 MGST1过度表达促进肝癌发生发展,是治疗肝癌的一个新靶点。

关键词：肝癌 MGST1 裸鼠

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HSP90靶向抑制剂P7与多西紫杉醇联用对三阴性乳腺癌细胞的协同抗肿瘤作用

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基础医学与临床 2018年第5期38卷 659-663页

作者：范姝婕刘俊雅王俊刘娜斯黄薇杨楠刘雁勇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

目的探讨双功能小分子多肽LPLTPLP(P7)和化疗药物多西紫杉醇(DTX)联用对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231的影响。方法多肽P7与DTX两药联合处理三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231 48 h后,用SRB法检测细胞存活;用等效图解法分析其作用;用流式细... 详细信息

目的探讨双功能小分子多肽LPLTPLP(P7)和化疗药物多西紫杉醇(DTX)联用对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231的影响。方法多肽P7与DTX两药联合处理三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231 48 h后,用SRB法检测细胞存活;用等效图解法分析其作用;用流式细胞计量术检测多肽P7、化疗药DTX及两药联用后MDA-MB-231细胞凋亡率;用蛋白免疫印迹技术检测多肽P7、化疗药DTX及两药联用后MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 P7与DTX对细胞存活具有协同作用;联合用药组细胞凋亡率为60.6%,是DTX单药组凋亡率(34.5%)的1.8倍;P7与DTX联合用药干预48 h后,凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达量的比值显著下调。结论P7协同化疗药物DTX能显著提高细胞的凋亡率,其机制可能与两药联合后调控促凋亡蛋白Bax和凋亡蛋白Bcl-2表达相关。

关键词：三阴性乳腺癌细胞凋亡多西紫杉醇多肽协同作用

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八年制医学生对药理学概念图教学/学习法的实践感受及学习方式倾向性分析

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基础医学与临床 2018年第2期38卷 276-280页

作者：郭磊叶菜英张德昌中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

概念图教学/学习法是利用概念图这种可视化的语义网络,帮助学习者组织知识的新方法。在药理学课程的教学过程中,笔者将概念图分别用作"教"的工具和"学"的工具,此后就八年制医学生对药理学概念图教学/学习法的实践... 详细信息

概念图教学/学习法是利用概念图这种可视化的语义网络,帮助学习者组织知识的新方法。在药理学课程的教学过程中,笔者将概念图分别用作"教"的工具和"学"的工具,此后就八年制医学生对药理学概念图教学/学习法的实践感受进行了问卷调查,从中分析学生倾向采纳的教学/学习方式,希望对今后的教学产生指导意义,让药理学的教学内容和方式与医学生的知识需求和学习倾向更加匹配。

关键词：概念图药理学教学法学习法

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Hsp90在胰腺癌组织中表达升高及其临床病理意义

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基础医学与临床 2018年第4期38卷 497-501页

作者：刘俊雅范姝婕黄薇杨楠刘雁勇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

目的分析热休克蛋白90(Hsp90)在胰腺癌组织中的表达水平与肿瘤发生、发展和转移的关系及其对预后的影响。方法用市售组织芯片,通过免疫组化法测定2009年1月至2013年8月期间病理确诊为胰腺癌的63例患者癌标本和癌旁组织中的Hsp90表达,用A... 详细信息

目的分析热休克蛋白90(Hsp90)在胰腺癌组织中的表达水平与肿瘤发生、发展和转移的关系及其对预后的影响。方法用市售组织芯片,通过免疫组化法测定2009年1月至2013年8月期间病理确诊为胰腺癌的63例患者癌标本和癌旁组织中的Hsp90表达,用ANOVA或者t检验分析Hsp90表达水平与患者相关临床病理指标之间的关系。结果胰腺癌组织中Hsp90的表达量显著高于癌旁组织,与肿瘤的病理分级、淋巴结转移、临床分期、TNM分期有关(P<0.05)。结论胰腺癌组织中高表达Hsp90与胰腺癌的高侵袭、高转移能力密切相关,高表达的Hsp90可能作为胰腺癌的预后指标以提示患者预后差。

关键词：胰腺癌热休克蛋白Hsp90 免疫组化

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嵌合抗原受体修饰T细胞研究进展及肿瘤靶抗原的选择

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解剖学报 2017年第1期48卷 115-120页

作者：唐海军刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)是目前恶性肿瘤免疫治疗的一种新方法。CAR-T细胞对肿瘤的杀伤不依赖主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和突破宿主免疫耐受状态,因此,CAR-T细胞在治疗肿瘤方面具有独特的优势。CA... 详细信息

嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)是目前恶性肿瘤免疫治疗的一种新方法。CAR-T细胞对肿瘤的杀伤不依赖主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和突破宿主免疫耐受状态,因此,CAR-T细胞在治疗肿瘤方面具有独特的优势。CAR-T细胞的构建和选择合适的靶分子是CAR-T细胞免疫治疗的两个关键的问题,我们在文中将围绕这两个问题做一综述。

关键词：嵌合抗原受体肿瘤免疫治疗

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一个角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征家系的致病突变分析

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中华医学遗传学杂志 2017年第5期34卷 642-645页

作者：李璐璐李媛林蔚赵秀丽中国医学科学院基础医学研究所-北京协和医学院基础学院医学遗传学系北京100005

目的对1例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者进行GJB2基因的突变鉴定，并在此基础上完成家系突变验证和突变起源分析。方法通过酚氯仿法提取基因组DNA；应用PCR-Sanger测序鉴定先证者GJB2基因外显子及外显子／内含子衔接区序列；针对先证者... 详细信息

目的对1例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者进行GJB2基因的突变鉴定，并在此基础上完成家系突变验证和突变起源分析。方法通过酚氯仿法提取基因组DNA；应用PCR-Sanger测序鉴定先证者GJB2基因外显子及外显子／内含子衔接区序列；针对先证者携带的突变位点，应用PCR-高分辨熔解曲线（high resolution melting，HRM）方法进行家系突变验证；利用T-克隆测序技术进一步确定突变的亲本来源。结果在先证者GJB2基因的第2外显子检测到1个C．148G）A（***50Asn）杂合错义突变，HRM分析结果与测序结果一致；克隆测序显示患儿致病突变源自父亲生殖细胞突变。结论在t个中国人角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征家系检测到GJB2基因热点突变e．148G〉A，并针对该突变建立一种基于PCR-HRM技术快速攀定突变的方法；此方法方便、怏捷，可作为该病患者突变筛杏的优选方法。

关键词：角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征 GJBZ基因高分辨熔解曲线分析基因突变

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YAF2靶向cyclinD1表达促进肿瘤细胞增殖

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 764-770页

作者：侯丛丛马晓骊陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究YY1相关因子2(YAF2)在肿瘤细胞中上调细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的分子机制以及对肿瘤细胞增殖的影响。方法在肿瘤细胞中过表达和敲低YAF2,用Western blot和实时荧光定量PCR实验检测YAF2和cyclin D1的表达;利用双荧光素酶... 详细信息

目的研究YY1相关因子2(YAF2)在肿瘤细胞中上调细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的分子机制以及对肿瘤细胞增殖的影响。方法在肿瘤细胞中过表达和敲低YAF2,用Western blot和实时荧光定量PCR实验检测YAF2和cyclin D1的表达;利用双荧光素酶报告基因实验探究YAF2对cyclin D1启动子活性的影响;流式细胞计量术分析YAF2对细胞周期的影响与cyclin D1表达的关系;平板克隆形成实验检测YAF2和cyclin D1不同表达水平对细胞增殖的影响。结果 YAF2上调cyclin D1的mRNA(P<0.05)和蛋白水平;YAF2激活cyclin D1的启动子(P<0.05);敲低YAF2通过调节cyclin D1使G_0/G_1期细胞比例增加(P<0.0001),S期细胞比例减少(P<0.002);YAF2通过靶向cyclin D1促进细胞克隆形成(P<0.05)。结论在肿瘤细胞中,YAF2激活cyclin D1表达,促进肿瘤细胞周期进展和增殖。

关键词： YY1相关因子2 细胞周期蛋白D1 肿瘤细胞增殖

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SNP位点rs6858698对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响

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基础医学与临床 2018年第5期38卷 679-685页

作者：武佳玉刘松王晓月中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的探讨rs6858698位点的功能活性及其对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响。方法双荧光素酶报告基因系统检测含有rs6858698位点的DNA片段的调控活性。利用CRISPR/Cas9系统在HEK293T细胞内构建点突变的稳定细胞株。全转录组测序分析(RNA-s... 详细信息

目的探讨rs6858698位点的功能活性及其对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响。方法双荧光素酶报告基因系统检测含有rs6858698位点的DNA片段的调控活性。利用CRISPR/Cas9系统在HEK293T细胞内构建点突变的稳定细胞株。全转录组测序分析(RNA-seq)不同基因型的细胞株之间的基因表达差异情况。并用实时定量PCR(RT-q PCR)和CRISPR干扰实验(CRISPRi)对RNA-seq的结果进行验证。结果 rs6858698-C DNA片段的调控活性约是rs6858698-G DNA片段的调控活性的1.69倍。转录组测序分析在两种基因型的细胞中共鉴定出140个差异表达的基因(P<0.05),其中有87个基因表达下调,53个基因表达上调。差异表达基因主要富集在9个生物学过程。RT-q PCR和CRISPRi实验的验证结果与RNA-seq的结果一致。结论 SNP位点rs6858698具有调控功能,可以通过影响与表观修饰相关的基因的表达,进而影响个体对慢性淋巴细胞白血病的易感性。

关键词： rs6858698 CRISPR RNA-seq 慢性淋巴细胞白血病

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无创性免核酸提取的多重SNP基因分型技术

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基础医学与临床 2018年第11期38卷 1577-1582页

作者：赵烨赵亚玲周军郑直中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的介绍一种无创性免核酸提取的样品前处理方法,结合高通量基因分型技术,为大规模流行病学监测及遗传学分析提供新的技术手段。方法无需核酸提取,直接裂解唾液或口腔拭子样品,加入带有通用尾部序列的多个寡核苷酸特异探针,通过夹心杂... 详细信息

目的介绍一种无创性免核酸提取的样品前处理方法,结合高通量基因分型技术,为大规模流行病学监测及遗传学分析提供新的技术手段。方法无需核酸提取,直接裂解唾液或口腔拭子样品,加入带有通用尾部序列的多个寡核苷酸特异探针,通过夹心杂交将样品中的靶DNA捕获到96孔板中,利用基于延伸连接的多重探针扩增(MELPA)技术及核酸飞行质谱(MassARRAY)实现多重单碱基突变(SNP)检测。以具有抗疟药物(伯氨喹)诱导溶血风险的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的23个SNP突变检测作为应用对象,测试唾液样品的反应条件。通过与商业化SNP测定的基于核酸飞行质谱的多重SNP分型技术(iPLEX)进行比较,评估该方法的准确性,重复性和可靠性。结果本方法可成功的对G6PD的23个SNP进行分型,40μL唾液或1个口腔拭子样本足够进行2个检测。36 h内(手工操作时间约2 h)可完成384个样品检测分析。其检测结果与测序结果一致,重复性较好,可靠性高,准确度优于传统的以血液为样品的iPLEX方法。结论建立了适用于高通量的无创性免核酸提取的多重SNP基因分型技术,为大规模基因分型筛查提供了一个高效、准确的方法。

关键词：无创性样品核酸提取 SNP基因分型

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