检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 589-594页

作者：吴晓峰沙龙泽沙志强沈岩许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究癫痫发生不同时期生长相关蛋白-43(GAP-43)及其磷酸化形式(p-GAP-43)在海马齿状回中表达的时空分布情况。方法构建海人酸(KA)诱导的内侧颞叶癫痫(MTLE)模型小鼠,采用免疫组织化学、Western blot技术检测GAP-43与p-GAP-43在模型... 详细信息

目的研究癫痫发生不同时期生长相关蛋白-43(GAP-43)及其磷酸化形式(p-GAP-43)在海马齿状回中表达的时空分布情况。方法构建海人酸(KA)诱导的内侧颞叶癫痫(MTLE)模型小鼠,采用免疫组织化学、Western blot技术检测GAP-43与p-GAP-43在模型鼠癫痫发生不同时期(5d,2、5周)海马齿状回中的表达变化。结果 GAP-43在正常对照鼠及模型鼠的齿状回、门区和海马内分子层均有较高表达。与对照组相比,p-GAP-43在KA诱导癫痫发作后的5d,2、5周3个时间点的表达水平逐步下降。结论活性形式磷酸化的GAP-43在齿状回颗粒细胞中的表达水平随着癫痫发作时间的推移逐步降低,可能与硬化海马的轴树突异常重组过程相关。

关键词：内侧颞叶癫痫生长相关蛋白-43 海人酸海马齿状回

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小RNA干扰蛋白酶体亚基α7抑制K562细胞增殖

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 601-606页

作者：秦涛范翠青朱宁沈岩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的运用小干扰RNA(siRNA)技术降低人髓性白血病细胞株K562细胞20S蛋白酶体亚基α7(PSMA7)基因的表达水平,探讨PSMA7表达下调对其细胞功能的影响。方法采用HiPerFect将化学合成的针对人PSMA7基因的特异性siRNA转染入K562细胞后,用Wester... 详细信息

目的运用小干扰RNA(siRNA)技术降低人髓性白血病细胞株K562细胞20S蛋白酶体亚基α7(PSMA7)基因的表达水平,探讨PSMA7表达下调对其细胞功能的影响。方法采用HiPerFect将化学合成的针对人PSMA7基因的特异性siRNA转染入K562细胞后,用Western blot法检测siRNA对PSMA7蛋白表达的抑制效果,采用MTS法及细胞计数法检测细胞增殖速率,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A、D、E的表达水平,Annexin V/FITC染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 PSMA7 siRNA转染K562细胞后使PSMA7蛋白表达水平明显下调;细胞增殖速率明显降低但无明显细胞凋亡,细胞周期中S期细胞比例减少;细胞周期蛋白Cyclin A、E表达下调。结论 PSMA7表达下调可使人髓性白血病细胞株K562细胞Cyclin A、E表达下调,使S期细胞比例降低从而抑制K562细胞增殖。

关键词： RNA干扰蛋白酶体亚基α7 细胞周期蛋白细胞增殖

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Dlx1的天然反义转录物在大脑发育中的功能探索

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 607-610页

作者：吴朝赵阿妮朱丽媛阴彬张靖中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的... 详细信息

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的技术比较Dlx1as与Dlx1 mRNA空间表达谱。结果 Dlx1as具有多聚腺苷酸尾,在小鼠的胚胎发育过程中,从E14.5到E18.5高表达,与Dlx1 mRNA在各时间点表达水平虽比较接近,但在表达区域存在互补的特点。结论 Dlx1as在小鼠大脑发育过程中有一段时间的高表达,与蛋白编码基因Dlx1 mRNA空间互补,推测其可能是通过调控Dlx1 mRNA来影响小鼠的大脑发育。

关键词： Dlx1as 小鼠大脑发育天然反义转录物原位杂交

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人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 507-510页

作者：付俊缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金... 详细信息

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。

关键词： ACTL7a 原核表达多克隆抗体

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氧化低密度脂蛋白下调血管内皮细胞表达Rictor

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 685-689页

作者：于淼吕宏娟尹洪超中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005

目的探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响。方法分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,... 详细信息

目的探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响。方法分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化的变化,用硝酸还原酶还原法测定NO释放量。结果氧化低密度脂蛋白显著降低Rictor的mRNA及蛋白的表达量(P<0.01),使Rictor-mTOR复合物形成减少。转染Rictor后,不仅Rictor表达增加而且使蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化增加;内皮细胞NO释放量增多(P<0.05)。结论影响内皮细胞表达Rictor,是氧化低密度脂蛋白诱发血管内皮细胞功能不良的重要机制之一。

关键词：血管内皮细胞氧化低密度脂蛋白 Rictor eNOS

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DNA甲基化调控在免疫学研究中的进展

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中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第6期20卷 729-734页

作者：赵锴(综述) 曹雪涛(审阅) 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005 第二军医大学免疫学研究所医学免疫学国家重点实验室上海200433

表观遗传学是研究基因序列不发生改变的情况下,基因表达发生了可以遗传的改变的一门学科。DNA甲基化是表观遗传学中进化上比较保守、相对比较稳定的一种表观修饰。DNA甲基化,特别是CpG岛的高甲基化,通常能够介导基因表达的稳定沉默。研... 详细信息

表观遗传学是研究基因序列不发生改变的情况下,基因表达发生了可以遗传的改变的一门学科。DNA甲基化是表观遗传学中进化上比较保守、相对比较稳定的一种表观修饰。DNA甲基化,特别是CpG岛的高甲基化,通常能够介导基因表达的稳定沉默。研究表明,DNA甲基化参与调控免疫系统的分化发育,DNA甲基化的异常也是包括肿瘤在内的众多免疫相关疾病发生、发展的关键致病因素。表观遗传学与免疫学的碰撞也为理解免疫学现象的分子调控机制提供了崭新的视角。本文将对近年来DNA甲基化调控在免疫学中的进展作一综述。

关键词： DNA甲基化固有免疫应答适应性免疫应答肿瘤免疫

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植物血凝素-ECM830细胞融合法融合黑色素瘤细胞

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中国医学科学院学报 2013年第5期35卷 515-518页

作者：米蕊芳刘福生金贵善首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。... 详细信息

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。结果荧光标记带有绿色和红色荧光的黑色素瘤细胞,通过PHAECM830细胞融合法获得黑色素瘤融合细胞,细胞融合效率较ECM830电融合法从0.50%提升到7.18%,流式分选得到单一的黑色素瘤融合细胞,DNA含量分析显示黑色素瘤融合细胞的DNA含量翻倍,体内外实验表明黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。结论运用改良的PHA-ECM830细胞融合法成功高效得到黑色素瘤融合细胞,黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。

关键词：植物血凝素 ECM830 细胞融合法黑色素瘤细胞

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解剖学手术操作示教在解剖教学第二课堂中的探索

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基础医学与临床 2013年第5期33卷 515-518页

作者：申新华李沛杨远帆陈咏梅阮侠潘慧马超中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005 清华大学第一附属医院血管外科北京100016 北京协和医学院八年制临床医学专业北京100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院教育处北京100730

作为北京协和医学院教学改革的一部分,开设了解剖学手术操作示教的选修课。精心选择临床病例,实行小组教学。课程内容包括师生共同参与集体备课、临床讲座、手术示教或录播、学生实践以及课后总结等。该课程不仅巩固了解剖学内容,还强... 详细信息

作为北京协和医学院教学改革的一部分,开设了解剖学手术操作示教的选修课。精心选择临床病例,实行小组教学。课程内容包括师生共同参与集体备课、临床讲座、手术示教或录播、学生实践以及课后总结等。该课程不仅巩固了解剖学内容,还强调了所学知识在临床中的应用及其重要性,同时也培养了学生的学习兴趣和团队合作意识。

关键词：八年制临床医学基础医学教育教学改革解剖学模拟手术

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睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程

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基础医学与临床 2013年第2期33卷 179-183页

作者：宋伟胡廷徽缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化... 详细信息

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系,用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达,主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞系,过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达,其过表达能够加速细胞周期进程。

关键词： HSD13 精子发生细胞周期流式细胞术

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HSD1蛋白在精子发生过程中的空间特异性表达

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 325-329页

作者：宋伟陈迎春缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位... 详细信息

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位及其核质分布情况。结果 HSD1蛋白在初级精母细胞和圆形精子细胞的胞质中表达;在成熟精子细胞中主要表达于顶体和尾部。HSD1蛋白在CHO细胞中存在3种分布形式:细胞核型、细胞质型和核质分布型。进一步研究发现该蛋白在细胞中呈动态分布,存在细胞核-质间的穿梭特性。结论HSD1蛋白在生精细胞中呈空间特异性表达并且具有核质穿梭能力。

关键词： HSD1 精子发生免疫荧光核质穿梭

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