检索结果-内蒙古大学图书馆

医学研究杂志 2012年第1期41卷 19-23页

作者：赵忠亮赵吉成代辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP-1和ACF;建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功。结论利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础。

关键词：组蛋白ACF NAP-1染色质组装

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利用两种真核昆虫表达系统表达可溶性甲型H1N1血凝素蛋白

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第4期31卷 345-349页

作者：王浩马驰崔莲仙巴德年何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系 100005

目的利用两种昆虫杆状病毒表达系统表达甲型H1N1血凝素（haemegglutinin，HA）蛋白，进而获得具有生物学活性的目的蛋白。方法选取中国内地第1例2009甲型H1N1确诊病例病毒株A／Sichuan／1／2009（H1N1），人工合成完整HA基因序列；分别... 详细信息

目的利用两种昆虫杆状病毒表达系统表达甲型H1N1血凝素（haemegglutinin，HA）蛋白，进而获得具有生物学活性的目的蛋白。方法选取中国内地第1例2009甲型H1N1确诊病例病毒株A／Sichuan／1／2009（H1N1），人工合成完整HA基因序列；分别利用杆状病毒表达系统BaculoGoldsystem和Bac—to-Bacsystem，在昆虫细胞中表达日的基因HA；经亲和层析纯化及Westernblot搭定，红细胞血凝试验检测ttA蛋门的生物学活性。结果获得测序正确的HA基因，分别克隆到pAcGP67B（Baculo Goldsystem）和pFASTBacl（Bac-to-Bacsystem）载体，经杆状病毒同源重组后转染Sf9细胞，Westernblot鉴定硅示，BaculoGoldsystem表达HA蛋白是分泌型的，而Bac—to—Bacsystem是胞内表达且表达效果优于前者；血凝试验证实，这两种表达系统表达的HA蛋白均具有生物学活性。结论利用杆状病毒表达系统成功表达出具有生物学活性的HA蛋白，Bac—to-Bacsystem更适合表达HA蛋白，为流感病毒的相关研究提供了保障。

关键词：流感病毒血凝素蛋白昆虫杆状病毒表达系统 BaculoGold system Bac-to-Bac sys-tern 血凝试验

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大量制备过继免疫治疗用γδT细胞时培养基的选择

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 644-648页

作者：周建华康宁崔莲仙何维中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所免疫学系北京100005

目的选择适于过继免疫治疗用γδT细胞大量制备的培养基。方法采用不同培养基(RPMI-1640、AIM-V和OpTmizer,分别添加或者不添加自体血清)对γδT细胞进行培养,比较细胞存活率、纯度、扩增效率和生物学功能。结果仅未添加血清的RPMI-164... 详细信息

目的选择适于过继免疫治疗用γδT细胞大量制备的培养基。方法采用不同培养基(RPMI-1640、AIM-V和OpTmizer,分别添加或者不添加自体血清)对γδT细胞进行培养,比较细胞存活率、纯度、扩增效率和生物学功能。结果仅未添加血清的RPMI-1640培养基扩增的细胞存活率随培养时间增加略有下降。不论添加血清与否,AIM-V和OpTmizer培养基扩增的细胞纯度都始终高于RPMI-1640。第2周时,未添加血清的OpTmizer培养基扩增的细胞纯度和扩增效率都显著高于RPMI-1640培养基和AIM-V培养基(P均<0.05)。不同培养基扩增细胞表达的CD107a和分泌的肿瘤坏死因子-α差异均没有统计学意义(P均>0.05),但RPMI-1640培养的细胞对Daudi细胞的杀伤效率显著低于OpT-mizer和AIM-V培养的细胞(P均<0.05)。结论 OpTmizer培养基因其低血清依赖性、高扩增效率和扩增细胞良好的生物学功能,更适用于临床过继免疫治疗用γδT细胞的大量培养。

关键词： γδT细胞过继免疫治疗培养基

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四川省西昌市汉族人群代谢综合征及其影响因素的病例对照研究

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中国慢性病预防与控制 2012年第3期20卷 241-243页

作者：黎晓彤王斌卫大英张建华王淳秀潘利马名驹薛芳单广良中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学与卫生统计学系北京100005 四川省凉山彝族自治州疾病预防控制中心首都医科大学宣武医院流行病学与社会医学部

目的探讨四川省西昌市汉族居民代谢综合征及其影响因素,为代谢综合征的防治提供依据。方法采用病例对照研究的方法,以确诊的120例代谢综合征患者为病例组,按照年龄与性别频数匹配确定120例非代谢综合征者为对照组,采用多因素非条件Logis... 详细信息

目的探讨四川省西昌市汉族居民代谢综合征及其影响因素,为代谢综合征的防治提供依据。方法采用病例对照研究的方法,以确诊的120例代谢综合征患者为病例组,按照年龄与性别频数匹配确定120例非代谢综合征者为对照组,采用多因素非条件Logistic回归分析代谢综合征的影响因素。结果代谢综合征病例组中代谢异常组分检出率从高到低依次是血脂紊乱(98.3%)、高血压(92.5%)、超重或肥胖(90.0%)和高血糖(33.3%)。文化程度是代谢综合征的独立保护因素(OR=0.461,95%CI:0.234～0.908),而相关疾病家族史是代谢综合征的独立危险因素(OR=3.287,95%CI:1.722～6.275)。结论凉山彝族自治州西昌市汉族人群代谢综合征最常见的组合类型是超重或肥胖+高血压+血脂紊乱,文化程度与相关疾病家族史是代谢综合征的影响因素。

关键词：代谢综合征影响因素病例对照研究

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眼脑肾综合征一家系的OCRL基因致病突变检测

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中华眼科杂志 2011年第9期47卷 801-805页

作者：华芮杨威孙念怙张学中国医学科学院基础医学研究所医学遗传学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科

目的探讨眼脑肾综合征一家系的OCRL基因致病突变筛查与检测。方法采集家系成员外周血及胎儿羊水并提取基因组DNA。在OCRL基因两侧选取微卫星标记进行连锁分析；对患者OCRL基因全部外显子进行PCR扩增和测序；对可能致病突变采用限制酶分... 详细信息

目的探讨眼脑肾综合征一家系的OCRL基因致病突变筛查与检测。方法采集家系成员外周血及胎儿羊水并提取基因组DNA。在OCRL基因两侧选取微卫星标记进行连锁分析；对患者OCRL基因全部外显子进行PCR扩增和测序；对可能致病突变采用限制酶分析验证。利用连锁分析、直接测序及酶切分析，对胎儿进行产前基因检测。结果先证者及3名肯定携带者OCRL基因存在无义突变c．2032C→T（P．R678X）；其他7名家系成员及胎儿均不携带此突变。结论OCRL基因e．2032C→T突变是该家系出现眼脑肾综合征的原因；家系中胎儿不携带此致病突变。

关键词：眼脑肾综合征密码子无义系谱

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体外扩增γδT细胞的肿瘤组织趋向性

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基础医学与临床 2011年第11期31卷 1210-1216页

作者：康宁殷珊珊汤龙崔莲仙何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的探查体外扩增的γδT细胞向结直肠癌细胞迁移的能力。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),并利用固相化抗T细胞受体(TCR)γδ抗体进行2周的体外扩增。对扩增的γδT细胞进行免疫荧光染色和流式细胞仪分析或流式细... 详细信息

目的探查体外扩增的γδT细胞向结直肠癌细胞迁移的能力。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),并利用固相化抗T细胞受体(TCR)γδ抗体进行2周的体外扩增。对扩增的γδT细胞进行免疫荧光染色和流式细胞仪分析或流式细胞仪分选。采用Bioplex 200流体芯片系统分析细胞因子和趋化因子的表达。采用transwell小室进行趋化实验。结果体外扩增的γδT细胞主要表达CCR5和CXCR3 2种趋化因子受体。4种结直肠癌细胞系和10种结直肠癌肿瘤组织中存在CCR5和CXCR3配体的表达。体外扩增的γδT细胞在TCR激活的情况下可以大量产生Th1和Th2型细胞因子,进一步募集γδT细胞。特别是其产生的干扰素γ(IFN-γ)能够提高结直肠癌细胞CXCR3配体的表达量,从而进一步促进γδT细胞的趋近。结论本研究结果为γδT细胞过继免疫治疗结直肠癌提供了重要指征。

关键词： γδT细胞趋化作用趋化因子受体结直肠癌

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Hax1基因及其特异性小干扰RNA对人胚肾293细胞凋亡的影响

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基础医学与临床 2011年第6期31卷 602-608页

作者：龙琳刘力中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的构建Hax1基因特异性小干扰RNA(sihax),检测sihax对Hax1基因的表达抑制,在293细胞中研究Hax1和Hax1siRNAs对细胞凋亡的影响。方法设计Hax1siRNA序列构建真核表达载体并转染到293细胞,倒置荧光显微镜下观察、流式细胞仪、AnnexinV-EGF... 详细信息

目的构建Hax1基因特异性小干扰RNA(sihax),检测sihax对Hax1基因的表达抑制,在293细胞中研究Hax1和Hax1siRNAs对细胞凋亡的影响。方法设计Hax1siRNA序列构建真核表达载体并转染到293细胞,倒置荧光显微镜下观察、流式细胞仪、AnnexinV-EGFP/PI双染法及RT-PCR检测靶基因Hax1的表达,以及293细胞的凋亡。结果成功构建了Hax1siRNA干扰质粒pBS/U6-sihaxA和pBS/U6-sihaxB,并且sihaxB对Hax1抑制效应明显强于sihaxA。过量表达Hax1可显著抑制293细胞的早期凋亡比例。用sihaxA和sihaxB抑制内源性Hax1表达,可使晚期细胞凋亡比例从对照的9.03%±0.473%分别增加到10.8%±0.513%(P<0.05)和16.6%±0.858%(P<0.01)。与此同时,sihaxB还可使早期细胞凋亡比例由37.3%±0.5%降低到32%±1.77%(P<0.01)。结论 Hax1siRNA对靶基因Hax1的抑制作用与靶序列的保守性有一定相关性。Hax1基因在细胞中参与凋亡相关的多种调节过程。本研究为进一步探讨Hax1功能奠定了基础。

关键词： Haxl基因小干扰RNA 293细胞凋亡

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恶性疟原虫多表位蛋白疫苗***-1和***-3佐剂的配伍

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基础医学与临床 2011年第5期31卷 496-502页

作者：马瑞森蔺亚晖张文文麻明王恒中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的评价恶性疟原虫多表位蛋白疫苗***-1和***-3与不同佐剂最优配伍方式并进行初步的免疫机制研究。方法将多表位疫苗表达纯化后混合4种佐剂(AD、ADL、CpG及CpG&Al)经皮下注射BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔2周。测定血清中抗***-1和*... 详细信息

目的评价恶性疟原虫多表位蛋白疫苗***-1和***-3与不同佐剂最优配伍方式并进行初步的免疫机制研究。方法将多表位疫苗表达纯化后混合4种佐剂(AD、ADL、CpG及CpG&Al)经皮下注射BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔2周。测定血清中抗***-1和***-3抗体滴度、IgG分型及血清抗体对抗原单表位识别。间接免疫荧光检测血清对天然疟原虫的识别。结果佐剂ADL和AD分别能显著增强***-1(P<0.05)和***-3(P<0.05)免疫反应。而佐剂CpG和CpG&Al增强抗原免疫反应的能力相对较弱。与***-1、***-3和CpG、CpG&Al配伍的组相比,AD和ADL佐剂组的抗体水平和间接免疫荧光反应也都显著增强(P<0.05,P<0.05),抗体对单表位识别显著,抗体IgG分型中IgG1和IgG2a水平较高。结论佐剂ADL和AD的效果显著,可以作为与***-1和***-3配伍的候选临床应用佐剂。

关键词：恶性疟原虫多表位疫苗佐剂配伍

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Wolcott—Rallison综合征一例报告及其EIF2AK3基因突变检测

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中华儿科杂志 2011年第4期49卷 301-305页

作者：丰岱荣孟岩赵时敏施惠平王炜辰黄尚志中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系 WHO遗传病社区控制合作中心 100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院儿科

目的报道一例Wolcott—Rallison综合征患儿，研究患儿真核生物翻译起始因子-2α-激酶-3基因（eukaryoticinitiation factor 2α kinase3，EIF2AK3）的突变情况，为该病的临床诊断、基因诊断与遗传咨询提供依据。方法分析患儿的临床症状... 详细信息

目的报道一例Wolcott—Rallison综合征患儿，研究患儿真核生物翻译起始因子-2α-激酶-3基因（eukaryoticinitiation factor 2α kinase3，EIF2AK3）的突变情况，为该病的临床诊断、基因诊断与遗传咨询提供依据。方法分析患儿的临床症状、体征、生化检查及骨骼x线检查并做出临床诊断；提取患儿及其父母的基因组DNA，针对EIF2AK3基因设计特异性引物，应用降落聚合酶链式反应（Touch—downPCR）扩增基因的全部外显子及外显子一内含子交界区，对扩增产物进行直接测序分析。结果（1）9岁4个月男性患儿，身高108cm，智力相当于6岁儿童发育水平；出生3个月时被诊断为1型糖尿病，正规胰岛素治疗后空腹血糖常高于11．0mmol／L，最高达23．5mmol／L；面容异常；肝脏于肋下5cm，剑突下2cm；骨骼畸形，x线提示多发性骨骺发育不良。（2）患儿EIF2AK3基因的外显子8中检测到n1408—1409insT（P．S470FfsX7）杂合突变，外显子9中检测到c．1596T〉A（P．C532X）杂合突变，2个突变位点分别在患儿母亲和父亲的基因中得到验证。结论Wolcott—Rallison综合征临床特点：新生儿或婴儿早期发生的1型糖尿病，多发性骨骺发育不良，体格和智力发育迟缓，多系统损伤；结合患者临床表现与生化、物理检查，对致病基因EIF2AK3进行突变检测是诊断Wolcott—Rallison综合征的可靠方法。E1F2AK3基因c.1408_1409insT与C．1596T〉A是导致该患儿出现Wolcott—Rallison综合征表型的致病突变，患儿为EIF2AK3基因突变的遗传复合体，这2个突变在国内外均未见报道，属新突变。

关键词： Wolcott—Rallison综合征基因 EIF2AK3 糖尿病 1型骨软骨发育不良

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大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞的影响

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解剖学报 2011年第1期42卷 124-128页

作者：刘昉许增禄钱晓菁仇文颖黄卉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院人体解剖学与组织胚胎学系北京100005

目的探讨大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞数量、形态及相关功能的影响。方法采用手术诱导方法制作大鼠(6月龄)双侧隐睾模型(每组6只),分别于术后第3天、7天、20天和28天取左侧睾丸入Bouin液固定,假手术组作为对照组。应用体视学方法检测... 详细信息

目的探讨大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞数量、形态及相关功能的影响。方法采用手术诱导方法制作大鼠(6月龄)双侧隐睾模型(每组6只),分别于术后第3天、7天、20天和28天取左侧睾丸入Bouin液固定,假手术组作为对照组。应用体视学方法检测睾丸间质细胞的数量、形态变化;应用免疫组织化学检测细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)、干细胞因子(SCF)、雄激素受体(AR)和雌激素受体α(ERα)的表达变化。结果隐睾术后睾丸间质体积分数明显增加,但睾丸间质的绝对体积无明显变化。间质细胞数量和光镜形态也无明显变化。免疫组织化学方法显示,CDC25A和SCF在间质细胞区域强表达,隐睾对其表达无明显影响;AR在间质细胞表达较弱,位于细胞质内,各组之间表达强度无明显变化;ERα在对照组睾丸间质细胞内表达较弱,间质细胞核基本无阳性着色,但随着隐睾时间的延长,间质细胞核阳性表达比例明显升高,在隐睾术后第28天时达到93.6%。结论大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞的数量和光镜形态无明显影响,但对其甾体类激素合成及相关调节功能有明显影响。

关键词：间质细胞隐睾细胞分裂周期蛋白25A 干细胞因子雄激素受体雌激素受体n 免疫组织化学大鼠

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