检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2010年第12期30卷 1303-1308页

作者：周建华曾玉红崔莲仙康宁何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的利用已筛选到的线性B细胞表位组合得到重组多表位肽,并验证其用做表位肽疫苗的可行性。方法用搭桥PCR和人工合成DNA方法获得多表位肽编码基因片段,构建原核表达载体表达多表位肽。ELISA法测其与SARS患者血清的交叉反应性及其用于免... 详细信息

目的利用已筛选到的线性B细胞表位组合得到重组多表位肽,并验证其用做表位肽疫苗的可行性。方法用搭桥PCR和人工合成DNA方法获得多表位肽编码基因片段,构建原核表达载体表达多表位肽。ELISA法测其与SARS患者血清的交叉反应性及其用于免疫动物获得的多克隆抗血清的效价。Western blot检测抗原抗体结合特异性。中和试验检测中和SARS-CoV效果。结果成功获得PEP1和PEP2编码基因片段并表达重组多表位肽rPEP1和rPEP2。纯化的rPEP1和rPEP2与患者血清的交叉反应率分别为88.7%和97.2%;与免疫动物血清具有结合特异性,结合效价分别为1×106和5×105;中和SARS-CoV的效率分别为70%和80%。结论成功获得交叉反应性好、免疫原性强的重组多表位肽rPEP1和rPEP2,为制备多表位肽疫苗提供了实验依据。

关键词： SARS 疫苗重组多表位肽表位疫苗

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MULT1转基因小鼠的基因型鉴定和表型的初步分析

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基础医学与临床 2010年第4期30卷 348-354页

作者：康垒崔莲仙何维马驰中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的对高亲和力NKG2D配体MULT1转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析,并进行MULT1的初步功能研究。方法提取转基因小鼠的基因组DNA,PCR以鉴定转基因小鼠的基因型。提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR,检测其基因转录情况。应用流式... 详细信息

目的对高亲和力NKG2D配体MULT1转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析,并进行MULT1的初步功能研究。方法提取转基因小鼠的基因组DNA,PCR以鉴定转基因小鼠的基因型。提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR,检测其基因转录情况。应用流式细胞分析仪及免疫组化对MULT1转基因小鼠多种组织细胞进行初步分析。结果获得鉴定阳性的MULT1转基因小鼠3 S品系25只,4 S品系13只。3 S和4 S品系的MULT1转基因小鼠的基因转录产物阳性,可用于进行下一步研究。MULT1主要表达在胸腺和小肠上皮间淋巴细胞(iIELs),且在胸腺和iIELs表面的表达与小鼠的年龄有关,而在脾脏细胞上基本不表达。iIELs流式细胞仪分析结果显示,CD8+T细胞比例降低,而CD4+CD25+调节性T细胞比例升高。结论经过基因型和表型的鉴定,表明已经成功构建MULT1转基因小鼠。对转基因小鼠表型的初步分析表明,MULT1可能与胸腺的发育、老化以及免疫调节相关。

关键词：转基因 NKG2D配体 MULT1 基因型表型

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氧化应激对小鼠NKG2D配体表达的影响

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 570-575页

作者：李成红崔莲仙何维马驰中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的分析氧化应激时小鼠免疫器官和免疫组织的NKG2D配体MULT1和Rae1表达的变化,研究氧化应激对免疫系统的影响。方法给小鼠吸入适量的臭氧,建立动物氧化应激模型;利用real-time PCR和免疫组织化学方法检测小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和小肠M... 详细信息

目的分析氧化应激时小鼠免疫器官和免疫组织的NKG2D配体MULT1和Rae1表达的变化,研究氧化应激对免疫系统的影响。方法给小鼠吸入适量的臭氧,建立动物氧化应激模型;利用real-time PCR和免疫组织化学方法检测小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和小肠MULT1和Rae1的表达。用流式细胞仪检测胸腺、脾脏的淋巴细胞和小肠上皮间淋巴细胞表面的MULT1和Rae1的表达。结果氧化应激组小鼠胸腺中MULT1表达降低而Rae1表达升高;脾脏的Rae1表达略有提高,MULT1的表达变化不明显;淋巴结中MULT1的表达变化不明显,Rae1表达降低;小肠的MULT1和Rae1表达均明显上调,多集中于小肠绒毛的上皮层。结论 MULT1和Rae1的表达在体内受到严格的调控。应激分子MULT1和Rae1可以作为检测体内应激状态的参考指标。

关键词：氧化应激 Rae1 MULT1 NKG2D 表达

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过表达CDK11^(p58)促进人胰腺导管腺癌MIAPaCa-2细胞增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第4期26卷 341-346页

作者：余诗灏王辉丁婧孟雁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理学系北京100005

CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺... 详细信息

CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺导管腺癌细胞)单克隆细胞,并通过流式细胞分析、MTT检测及real-time PCR的方法检测了细胞周期、细胞增殖能力及G1/S期相关调控基因的转录水平.结果显示,该单克隆细胞(实验组)与空载体组细胞和空白对照组细胞相比G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期细胞比例明显上升(P<0.01);细胞增殖能力明显提高(P<0.01);cyclin D1、cyclin D3、p21基因mRNA水平较两组对照细胞明显升高(P<0.01).提示过表达的CDK11p58通过上调cyclin D1、cyclin D3和p21基因的mRNA水平促进MIAPaCa-2细胞通过细胞增殖的关键限速点G1/S期,加快细胞增殖.

关键词： CDK11p58 Cdc2L2 胰腺癌 MIAPaCa-2

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人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 598-602页

作者：师文娟邵丁丁钟翔王恒中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台。方法运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长（73-232 aa）和与MIF结合的核心区（109-192 aa）片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bac... 详细信息

目的建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台。方法运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长（73-232 aa）和与MIF结合的核心区（109-192 aa）片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系。用RT-PCR检测目的基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达。结果 CD74胞外端全长（73-232 aa）可实现在昆虫细胞中的表达,目的蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的蛋白可实现最大表达量。CD74与MIF结合的核心区（109-192 aa）片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的蛋白表达。结论成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的蛋白表达的优化条件。

关键词： CD74 杆状病毒昆虫细胞蛋白表达

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补体介导Fcα/μ受体对人肾小球系膜细胞的杀伤

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基础医学与临床 2010年第5期30卷 471-475页

作者：沈濂王晓燕赵青张伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的研究补体能否经由Fcα/μ受体(Fcα/μR)介导杀伤人肾小球系膜细胞。方法应用脂质体将带有Fcα/μRcDNA的质粒pcDNA3.1-Fcα/μR转染入人肾小球系膜细胞(NHMC),用Western blot检测Fcα/μR在NHMC细胞的表达,激光共聚焦显微术检测Fc... 详细信息

目的研究补体能否经由Fcα/μ受体(Fcα/μR)介导杀伤人肾小球系膜细胞。方法应用脂质体将带有Fcα/μRcDNA的质粒pcDNA3.1-Fcα/μR转染入人肾小球系膜细胞(NHMC),用Western blot检测Fcα/μR在NHMC细胞的表达,激光共聚焦显微术检测Fcα/μR在细胞膜的表达。用流式细胞术与激光共聚焦显微术检测所制备的IgM型免疫复合物(IgM-IC)与膜表达Fcα/μR的NHMC细胞的结合,用台盼蓝染色检测补体介导的细胞杀伤作用。结果成功制备了胞膜表达Fcα/μR的NHMC细胞,IgM与IgM-IC能经由Fcα/μR结合于NHMC细胞。在补体作用下,结合有IgM-IC的pcDNA3.1-Fcα/μR转染细胞死亡率显著高于对照组野生型细胞、空载质粒转染细胞及无IgM-IC结合的pcDNA3.1-Fcα/μR转染细胞(P<0.001)。结论胞膜表达Fcα/μR并结合有IgM-IC的人肾小球系膜细胞能为补体所杀伤。

关键词： Fcα/μ受体 IgM 免疫复合物补体肾小球系膜细胞

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一个Charcot-Marie-Tooth病家系的分子遗传学分析

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基础医学与临床 2010年第10期30卷 1046-1050页

作者：杨莹韵从杨孙之星田原刘辰杨威中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系北京100005 北京协和医学院

目的鉴定一个Charcot-Marie-Tooth病(CMT)家系的致病突变。方法根据家族史、临床表现和肌电图检查结果判断家系CMT分型。采集16名家系成员外周血,提取基因组DNA。针对CMT1的6个亚型,选择微卫星标记进行连锁分析。针对PMP22基因重复突变... 详细信息

目的鉴定一个Charcot-Marie-Tooth病(CMT)家系的致病突变。方法根据家族史、临床表现和肌电图检查结果判断家系CMT分型。采集16名家系成员外周血,提取基因组DNA。针对CMT1的6个亚型,选择微卫星标记进行连锁分析。针对PMP22基因重复突变,采用实时定量PCR检测家系成员。结果本家系疾病呈常染色体显性遗传。患者均有青少年发病、缓慢进展的下肢无力症状。部分患者经查体发现下肢腱反射减弱、痛触觉减弱,下肢神经传导速度均小于30 m/s,提示为CMT1型。通过连锁分析排除了CMT1A、CMT1E以外的其他4个亚型,证实患者基因组内PMP22基因存在重复突变。结论此家系患者表型为CMT1A,其致病突变为染色体17p11.2区域内PMP22基因的重复。

关键词： Charcot-Marie-Tooth病 PMP22 重复突变定量PCR

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Noonan综合征患者PTPN11基因突变分析

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中华医学遗传学杂志 2010年第5期27卷 554-558页

作者：杨涛孟岩施惠平赵时敏王刚黄尚志中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院医学遗传学系、WHO遗传病社区控制合作中心北京100005 中国医学科学院北京协和医院儿科

目的研究中国人Noonan综合征患者非受体型蛋白酪氨酸磷酸酯酶（protein-tyrosine phosphatase,nonreceptor-type 11,PTPN11）基因的突变.方法收集遗传咨询门诊3例散发的Noonan综合征患者及其无症状父母,外周血提取基因组DNA,PCR产物... 详细信息

目的研究中国人Noonan综合征患者非受体型蛋白酪氨酸磷酸酯酶（protein-tyrosine phosphatase,nonreceptor-type 11,PTPN11）基因的突变.方法收集遗传咨询门诊3例散发的Noonan综合征患者及其无症状父母,外周血提取基因组DNA,PCR产物直接测序法对患者PTPN11基因的全部15个编码区外显子及其邻接的内含子区域进行测序,检出突变后再对其父母的相应外显子区域进行测序,并通过限制性内切酶检测100名无亲缘关系的正常人相应碱基改变以排除多态性,利用网上ClustalW工具分析突变位点所在氨基酸在多个物种中的保守性.结果在1例患者的第3外显子区域检出一杂合的c.181G＞A碱基取代,导致第61位的天冬氨酸改变为天冬酰胺（p.D61N）,在其无症状父母和100名正常个体中无此突变;该位点在多个物种中高度保守.另外2例患者PTPN11基因的编码区未检到突变.结论 p.D61N突变在文献中已有报道,本例患者为新生突变.本研究进一步肯定了 p.D61N为Noonan综合征的致病突变,基因诊断的结果验证了该患者的临床诊断.另外两例Noonan综合征患者可能由其他基因的突变所致,反映了该病的遗传异质性.

关键词： Noonan综合征 PTPN11基因基因突变

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SLE患者外周血Vγ9链T细胞受体CDR3特征

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现代免疫学 2010年第4期30卷 265-270页

作者：王丽芳康宁崔莲仙巴德年何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

为探讨Vγ9链T细胞受体(Tcell receptor,TCR)互补决定区3(complementarity determining region3,CDR3)是否参与自身免疫性疾病中γδT细胞的抗原识别过程,利用基因扫描技术和随机序列测定法对系统性红斑狼疮(systemic lupus er-ythematosus,SLE)患者和健康人外周血Vγ9TCR CDR3区的结构特征进行分析。结果显示,Vγ9CDR3序列的变化主要集中在J区等位基因的取用不同:健康人以表达JγP为主(82.86%),而SLE患者Jγ1/Jγ2(40.82%)和JγP(59.18%)表达率相近。两组人群相比,Jγ1/Jγ2和JγP表达率的差异均具有显著性。结果表明,SLE患者外周血Vγ9链T细胞受体具有与健康人不同的CDR3组成特点,提示其可能参与SLE病理过程中γδT细胞的抗原识别。本研究为寻找SLE中γδT细胞识别的自身抗原以及阐明γδT细胞在SLE中的独特作用奠定了基础。

关键词：系统性红斑狼疮 γδT细胞 T细胞受体 Vγ9链互补决定区3

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Coffin-Lowry综合征基因突变的检测

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 609-612页

作者：王云孟岩彭园园王铮赵时敏施惠平黄尚志中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院儿科北京100730

目的建立一种准确、快速、简便诊断Coffin-Lowry综合征(CLS)的基因诊断方法。方法收集2例符合CLS临床诊断标准的患者,抽取新鲜外周血,分别提取DNA和RNA,自行设计引物,RT-PCR扩增RPS6KA3基因全长cDNA,进行测序比对。对发现的改变作DNA水... 详细信息

目的建立一种准确、快速、简便诊断Coffin-Lowry综合征(CLS)的基因诊断方法。方法收集2例符合CLS临床诊断标准的患者,抽取新鲜外周血,分别提取DNA和RNA,自行设计引物,RT-PCR扩增RPS6KA3基因全长cDNA,进行测序比对。对发现的改变作DNA水平的验证。对未检测到突变的样品进行多重连接探针扩增(MLPA)检测。结果发现一男性患者有r889_890缺失突变,并在DNA水平得到验证,其母亲外周血DNA检测未发现此缺失,可确定为新生突变,但也不排除生殖腺嵌合;另一患者在该基因未发现改变。结论本研究是国内首次在分子水平确诊CLS患者,为CLS的基因诊断和产前诊断提供遗传基础。

关键词： Coffin-Lowry综合征 RPS6KA3 RT-PCR 多重连接探针扩增

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