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单用静脉大豆油脂肪乳剂对比联合应用鱼油脂肪乳剂的肠外营养对消化道肿瘤术后患者结局影响的随机、对照、双盲、多中心临床研究（摘要）

中华临床营养杂志 2011年第2期19卷 118-118页

作者：蒋朱明 WilmoreDW 王秀荣韦军民张忠涛顾倬云王杉韩少梅江华于康中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院基本外科肠外肠内营养中心 100730 02115美国波士顿哈佛医学院布莱根妇女医院外科卫生部北京医院普外科 100730 首都医科大学附属北京友谊医院普外科 100050 解放军总医院普通外科北京100853 北京大学人民医院普通外科 100044 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所流行病及统计学系 100005 四川省医学科学院四川省人民医院城东病区创伤代谢组多学科实验室成都610110

部分回顾性临床研究观察到在营养液配方中添加特异的药理营养素可能降低术后并发症，缩短术后恢复时间，但仍缺乏较大样本、前瞻性、多中心、随机对照临床研究的证据。近年来，药理营养素在肿瘤患者综合治疗中可能发挥的作用逐渐受到重... 详细信息

部分回顾性临床研究观察到在营养液配方中添加特异的药理营养素可能降低术后并发症，缩短术后恢复时间，但仍缺乏较大样本、前瞻性、多中心、随机对照临床研究的证据。近年来，药理营养素在肿瘤患者综合治疗中可能发挥的作用逐渐受到重视。本研究前瞻性观察了静脉用鱼油脂肪乳剂对消化道肿瘤术后患者结局和免疫功能的影响。

关键词：脂肪乳剂大豆油鱼油肠外营养消化道肿瘤

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丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT2的体外激酶活性分析

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医学分子生物学杂志 2010年第3期7卷 206-210页

作者：王娟关洪斌闫月敏石秉炀杨奔薛征董文吉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞生物学系北京市100005 山东大学威海分校海洋学院山东省威海市264209

目的建立蛋白激酶AKT2体外磷酸化检测体系.方法构建携带AKT2 cDNA编码区的pLNCX2逆转录病毒重组载体,包装重组病毒,转导293A细胞,G418筛选得到稳定表达组成型活化的AKT2细胞株,应用免疫沉淀获得蛋白激AKT2;将核基质结合蛋白SATB1的1～... 详细信息

目的建立蛋白激酶AKT2体外磷酸化检测体系.方法构建携带AKT2 cDNA编码区的pLNCX2逆转录病毒重组载体,包装重组病毒,转导293A细胞,G418筛选得到稳定表达组成型活化的AKT2细胞株,应用免疫沉淀获得蛋白激AKT2;将核基质结合蛋白SATB1的1～204的氨基酸序列及其47位丝氨酸的突变体S47A、S47D,分别与GST基因融合表达载体pGEX4T-1进行重组,经测序鉴定后转化大肠埃希菌BL-21,IPTG诱导表达经亲和纯化得到GST-SATB1 1-204、GST-SATB1 1-204 S47A和GST-SATB1 1-204 S47D融合蛋白;利用免疫沉淀的AKT2磷酸化GST-SATB1融合蛋白,应用免疫印迹检测其是否被磷酸化.结果细胞表达的蛋白激酶AKT2能高效的将野生型SATB1 1-204 磷酸化,而不能磷酸化其两种突变体.结论成功建立了一个蛋白激酶体外磷酸化系统.

关键词：核基质结合蛋白SATB1 蛋白激酶AKT2 体外液酶活性分析

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四川省西昌市汉族和彝族人群代谢综合征危险因素的研究

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中华疾病控制杂志 2010年第7期14卷 594-596页

作者：王淳秀卫大英王斌张建华潘利马名驹薛芳余涛单广良中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学与卫生统计学系北京100005 凉山州疾病预防控制中心四川西昌615000

目的了解四川省西昌市汉族居民和彝族居民代谢综合征(MS)患病情况及其相关的危险因素。方法应用分层整群抽样,于2007-2008年对西昌市2 130例汉族和1 306例彝族成年人进行横断面调查。结果西昌市彝族成人MS粗患病率为11.9%,年龄标化患病... 详细信息

目的了解四川省西昌市汉族居民和彝族居民代谢综合征(MS)患病情况及其相关的危险因素。方法应用分层整群抽样,于2007-2008年对西昌市2 130例汉族和1 306例彝族成年人进行横断面调查。结果西昌市彝族成人MS粗患病率为11.9%,年龄标化患病率为10.8%;汉族MS粗患病率为8.3%,年龄标化患病率为7.2%,MS的患病率随年龄的增加而上升。彝族男性MS、血脂紊乱、肥胖和高血糖患病率均高于汉族男性。彝族人群2种以上代谢异常患病率高于汉族。多因素分析结果表明,MS与民族、年龄、性别、体力劳动强度、文化程度、饮酒量以及高血压或糖尿病家族史有密切关系。结论西昌市彝族居民的MS患病率高于汉族,尤其是彝族男性MS患病率最高。年龄、性别、体力劳动强度、文化程度、饮酒量,家族史是MS重要的危险因素。

关键词：代谢综合征患病率危险因素横断面研究种族关系

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荧光标记肿瘤转移体内模型的建立

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中华病理学杂志 2009年第2期38卷 110-116页

作者：冯海凉刘玉琴顾蓓卞晓翠杨振丽杨丽娟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP... 详细信息

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP和***。分别体内移植于BALB／c—nu裸鼠和C57BL／6J小鼠，观察成瘤潜伏期，绘制体内生长曲线，利用活体荧光成像系统活体连续观察GFP在体内的表达，观察肺部和淋巴结的转移情况，计算转移率。免疫组织化学检测与转移相关的分子CD44和E—cadherin在移植瘤中的表达。结果MGC-803细胞和U14细胞pEGFP—N1转染24h后的转染效率分别为30％和60％。获得了GFP（＋）的单克隆MGC-803-GFP细胞株和U14-GFP细胞株。MGC-803-GFP在BALB／c—nu裸鼠和***在C57BL／6J小鼠移植成瘤的潜伏期分别是3～5d和2～4d，成瘤率均为100％。利用活体荧光成像系统连续观察，可以清楚直观地观察表达GFP的MGC-803-GFP移植瘤在体内的生长，接种后第60天处死全部荷瘤鼠，解剖后仅有1只可见同侧腋窝下淋巴结的转移。接种U14-GFP后，分别在第28、37和52天观察了荷瘤小鼠肿瘤转移的发展过程。在U14-GFP原发瘤体积达到≥5cm^3时，肺部和淋巴结转移率分别为67％和100％。在MGC-803-GFP和U14-GFP的移植瘤中都可以检测到CD44的表达，而无E—cadherin的表达。结论成功建立了表达绿色荧光蛋白单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP，体内移植建立了荧光标记的肿瘤转移模型。该模型可用于可视化肿瘤体内的研究。

关键词：肿瘤转移绿色荧光蛋白质类模型动物

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中华病理学杂志 2009年第8期38卷 537-541页

作者：杨振丽刘玉琴卞晓翠顾蓓冯海凉杨丽娟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能。方法用1％TritonX—114提取DCS细胞膜蛋白，用已制备的DCS细胞多克隆抗体（pAb）及蛋白A＋G琼脂糖进行免疫沉淀，所得样品利用质谱技术进行分析，... 详细信息

目的探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能。方法用1％TritonX—114提取DCS细胞膜蛋白，用已制备的DCS细胞多克隆抗体（pAb）及蛋白A＋G琼脂糖进行免疫沉淀，所得样品利用质谱技术进行分析，检测到VAP-33蛋白在DCS细胞中有表达，继而DCS细胞经不同量抗原（150、850、1500μl）刺激24、48、72h后观察细胞形态及吞噬能力的变化，同时通过间接免疫荧光、共聚焦显微镜、Western blot等方法检测了VAP．33的分布及表达变化。0．5mol／L胰岛素刺激DCS细胞20min后，采用Western blot检测DCS细胞全蛋白、胞质蛋白、膜蛋白中VAP-33、葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）的表达变化，共聚焦方法观察胰岛素刺激前后VAP-33和GLUT-4在DCS细胞中的表达及定位变化。实验中均以常规培养的DCS细胞作为对照。结果VAP-33蛋白主要表达在DCS细胞膜和胞质中；在外来抗原刺激下，随抗原量的增加及作用时间的延长DCS细胞趋向成熟树突状细胞，VAP-33表达量降低，对辣根过氧化物酶的吞噬能力增强。胰岛素刺激后，VAP-33与GLUT-4有共定位。结论VAP-33在树突状细胞来源的肿瘤细胞中表达，与树突状细胞的抗原加工有关，在葡萄糖的转运中起一定作用。

关键词：树突细胞细胞系肿瘤抗原呈递葡萄糖转运体4型

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肾上腺皮质癌患儿TP53基因的一个新生殖系突变

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中华医学杂志 2009年第20期89卷 1402-1404页

作者：司锘孙淼卢超霞刘彦山齐展杨威赵秀丽张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系 100005

目的研究1例肾上腺皮质癌患儿TP53基因突变情况，为该病的基因诊断与遗传咨询提供依据。方法提取1例肾上腺皮质癌患儿及父母外周血基因组DNA，针对TP53基因设计特异性引物，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增基因的全部编码及侧翼序列，对... 详细信息

目的研究1例肾上腺皮质癌患儿TP53基因突变情况，为该病的基因诊断与遗传咨询提供依据。方法提取1例肾上腺皮质癌患儿及父母外周血基因组DNA，针对TP53基因设计特异性引物，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增基因的全部编码及侧翼序列，对扩增产物进行直接测序。结果PCR结合DNA测序发现患者TP53基因第5外显子存在异常：第522与523位核苷酸间插入一个鸟嘌呤（c．522-523insG），导致P53蛋白DNA结合域第175位密码子由精氨酸（R）变为丙氨酸（A），并从突变位置起发生移码，产生移码突变（P．R175AfsX6）。患者父亲带有相同的突变，而母亲未发现此突变。结论TP53基因P．R175AfsX6生殖系突变是导致该例患者肾上腺皮质癌的特异突变。

关键词：肾上腺皮质癌基因,p53 生殖细胞系突变

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人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第2期16卷 106-112页

作者：康宁崔瑛周建华刘庆丰崔莲仙巴德年何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的:比较人外周血γδT细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,... 详细信息

目的:比较人外周血γδT细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδT细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδT细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδT细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI1640培养液对γδT细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδT细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδT细胞受体(Tcell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδT细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4℃条件下保存12h,细胞存活率仍达95%以上。结论:可溶性anti-TCRγδ抗体和含有人AB血浆的RPMI1640培养液可以用于人外周血γδT细胞的体外扩增,扩增得到的γδT细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。

关键词： γδT细胞可溶性抗体培养液稳定性

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氧化应激可选择性诱导细胞的NKG2D配体的表达

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基础医学与临床 2009年第8期29卷 789-795页

作者：李成红崔莲仙何维马驰中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的探讨氧化应激与细胞NKG2D配体表达的关系,分析氧化应激对NK细胞功能的影响。方法加H2O2诱导培养的肿瘤细胞处于氧化应激状态。用RT-PCR、Real-time PCR和流式细胞仪等方法分析细胞多种NKG2D配体的表达。用CCK-8法检测NK92细胞对肿... 详细信息

目的探讨氧化应激与细胞NKG2D配体表达的关系,分析氧化应激对NK细胞功能的影响。方法加H2O2诱导培养的肿瘤细胞处于氧化应激状态。用RT-PCR、Real-time PCR和流式细胞仪等方法分析细胞多种NKG2D配体的表达。用CCK-8法检测NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果氧化应激可诱导肿瘤细胞多种NKG2D配体的表达,不同的肿瘤细胞诱导表达的NKG2D配体不同;NKG2D配体表达上调可有效提高NK细胞的细胞毒活性,此效应可被抗NKG2D抗体所阻断。结论NKG2D配体可能在机体的免疫应答中发挥正向的调节作用。

关键词：氧化应激 NKG2D配体 NK细胞细胞毒活性

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一株健康人γδT细胞克隆的建立及鉴定

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基础医学与临床 2009年第1期29卷 24-28页

作者：何小鹃康宁陈慧崔莲仙何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的建立健康人γδT细胞克隆并进行鉴定。方法以60Co照射的同种异体PBMC作为饲养细胞,以有限稀释法对经过阳性分选的γδT细胞进行克隆化。用流式细胞术及分子生物学检测鉴定所获克隆,以MTT掺入法对所获克隆进行增殖实验检测。结果获... 详细信息

目的建立健康人γδT细胞克隆并进行鉴定。方法以60Co照射的同种异体PBMC作为饲养细胞,以有限稀释法对经过阳性分选的γδT细胞进行克隆化。用流式细胞术及分子生物学检测鉴定所获克隆,以MTT掺入法对所获克隆进行增殖实验检测。结果获得一株γδT细胞单克隆,为Vγ9Vδ2亚型,CD4分子和CD8分子表达均为阴性。进一步的研究发现表位肽EP6不仅能够特异性结合γδT细胞单克隆,而且能够促进其增殖。结论成功建立了健康人外周血γδT细胞克隆,为深入研究γδT细胞抗原识别机制、亚群及功能奠定了坚实的基础。

关键词： γδT细胞克隆有限稀释

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昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白及其生物学功能的初步鉴定

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基础医学与临床 2009年第12期29卷 1268-1272页

作者：郭阳郑静胡愉崔莲仙何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白技术平台并鉴定其表达产物的生物学功能。方法用搭桥PCR获得γ9Fc和δ2(OT3)Fc基因片段,构建成pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫sf9细胞,表达TCR... 详细信息

目的建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白技术平台并鉴定其表达产物的生物学功能。方法用搭桥PCR获得γ9Fc和δ2(OT3)Fc基因片段,构建成pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫sf9细胞,表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白;Western blot鉴定TCRγ9/δ2-Fc蛋白表达位置;胞内流式细胞仪检测γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因表达效率;蛋白G亲和层析后,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度;激光共聚焦扫描显微镜技术和生物传感器技术检测了TCRγ9/δ2-Fc蛋白与SKOV3细胞和MNS蛋白的结合特性。结果成功构建pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc表达载体,经鉴定发现TCRγ9/δ2-Fc蛋白在sf9细胞内表达,但γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因的表达效率有较大差异。纯化得到一定纯度的TCRγ9/δ2-Fc蛋白,并且具有与SKOV3细胞和MNS蛋白结合的特性。结论成功建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白的技术平台,表达产物TCRγ9/δ2-Fc可以在体外模拟TCRγδ识别抗原的特性。

关键词： TCRγ9/δ2-Fc 昆虫杆状病毒表达系统

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