检索结果-内蒙古大学图书馆

血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF-κB的激活机制及其对PDGF-B基因转录的影响

中华医学杂志 2002年第3期115卷 433-438页

作者：李皓尹鸿操张华曹心宜王宗立佘铭鹏中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理研究室北京100005　　

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF-κB的作用和对PDGF-B 基因表达的影响.方法　采用电泳迁移率移动分析法(EMSA)和免疫组化方法,包括共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术；荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的... 详细信息

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF-κB的作用和对PDGF-B 基因表达的影响.方法　采用电泳迁移率移动分析法(EMSA)和免疫组化方法,包括共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术；荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern 印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活NF-κB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后PDGF-B mRNA的表达水平.结果　血管紧张素Ⅱ刺激后,在ECV304细胞内有NF-κB的激活及核易位过程,应用免疫荧光共聚焦显微镜,免疫电镜及Northern 印迹等方法均可观察到PDGF-B或其基因表达增高.变异型激酶质粒IKKα-KM,IKKβ-KM 及 NIK-KM 可抑制经AngⅡ刺激的转染细胞内与NF-κB启动相连的荧光素酶的表达.结论　AngⅡ可激活胞浆内NF-κB并出现核易位,激酶NIK、IKKα和IKKβ参与了此信号传递路径.血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF-B链mRNA水平增高.

关键词：血管紧张素Ⅱ NF-κB 内皮细胞 PDGF-B

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高密度脂蛋白诱导内皮细胞系差异表达基因的研究

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中华医学杂志 2002年第13期82卷 921-923页

作者：张文成陈保生曾武威白玲薛红吴纲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表... 详细信息

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表达明显差异的cDNA。对差异基因进行序列测定和同源性比较 ,Northern印迹分析部分差异基因的表达情况。结果　HDL诱导ECV 30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA ,差异表达明显的已知基因有 9个 ,其中上调表达的基因包括STE2 0样激酶、PBK1蛋白、转谷氨酰胺酶、肌球蛋白轻链、apobec 1结合蛋白、DAP蛋白 ;下调表达的基因有核糖体蛋白L7a (RPL7A)、线粒体外膜电压依赖性阴离子通道蛋白基因、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶。差异表达明显的未知基因 4个。Northern印迹证实 ,转谷氨酰胺酶基因表达上调5 0 % ,apobec 1结合蛋白基因表达上调 70 %。结论　HDL可诱导ECV 30 4细胞转谷氨酰胺酶、apobec 1结合蛋白表达水平上调。这两个基因表达水平的升高可能与HDL抗动脉粥样硬化作用相关。

关键词：高密度脂蛋白逆转录聚合酶链反应 HDL 基因表达动脉粥样硬化

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应用双色荧光原位杂交技术检测一例49,XXXXY性染色体异常

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生殖与避孕 2002年第5期22卷 287-291,I003页

作者：刘永章曾瑄温州医学院生物教研室温州325027 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础遗传室北京100005

目的:探讨用双色荧光原位杂交技术(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)检测性染色体数目异常的实验方法及其应用价值。方法:以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重... 详细信息

目的:探讨用双色荧光原位杂交技术(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)检测性染色体数目异常的实验方法及其应用价值。方法:以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重复顺序(pY3.4)探针与经处理的标本同时进行外周血染色体及间期细胞核的原位杂交,分别用Avidin-FITC和Rhodamine-FITC及其Anti-avidin进行信号的检测与放大,DAPI复染。于Olympus AX-70型荧光显微镜下,分别通过WIB、WIG及其WU滤光镜观察杂交信号及其染色体或间期核背景,并统计外周血中期染色体和间期细胞核的杂交信号颗粒数。结果:在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示4个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号,染色体或细胞质背景经DAPI复染显示兰色;统计350个中期染色体和间期细胞核,X染色体杂交信号阳性率分别为91.43％和92.57％;Y染色体杂交信号阳性率分别为99.5％和99.8％。结论:双色荧光原位杂交技术是检测49,XXXXY性染色体异常以及其他性染色体数目异常患者的一种十分有价值的技术,具有高效、灵敏、可靠等特点,可为临床提供良好的辅助诊断。

关键词：双色荧光原位杂交技术检测 49,XXXXY性染色体异常 DNA特异性探针

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小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

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中华血液学杂志 2002年第12期23卷 628-630页

作者：孙义民左路许彩民沈悌潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼... 详细信息

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达 ,NBT还原实验检测细胞分化。结果　阴性对照组细胞PS外翻率为 1.2 % ,5 μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞 4 8h后PS外翻率为 0 .8% ,0 .1μmol/LATRA诱导 4 8h后PS外翻率为 2 .0 % ,与对照组相比 ,差异均无显著性 ,而两者联合作用NB4细胞 2 4 ,36 ,4 8h后的PS外翻率分别达到 18.3%、2 5 .9%、5 0 .0 % ,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量 (2 μmol/L)亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力 ,但其与 0 .1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用 0 .1μmol/L的ATRA相比 ,CD11b表达阳性细胞率进一步增加 ,NBT还原能力也进一步增强。结论　小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。

关键词：亚硒酸钠全反式维甲酸细胞凋亡细胞分化 NB4细胞株急性白血病

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TMR结合转基因技术促血管生成的形态学实验

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解剖学杂志 2002年第3期25卷 210-213页

作者：张晓东黄秉仁王冬李若凡程效东刘克曲彦明徐达传中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院解剖组胚学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生化学系第一军医大学解剖学教研室

目的:观察机械性透室壁心肌血管重建术（Transmyocardial　revascularization,TMR）管道内转入VEGF基因后血管再生与重建的形态学效果,并探索TMR结合转基因技术的新方法。方法:利用高速空心钻头在家兔左室前壁进行TMR,形成透室壁性心肌... 详细信息

目的:观察机械性透室壁心肌血管重建术（Transmyocardial　revascularization,TMR）管道内转入VEGF基因后血管再生与重建的形态学效果,并探索TMR结合转基因技术的新方法。方法:利用高速空心钻头在家兔左室前壁进行TMR,形成透室壁性心肌管道。实验组的心肌管道内注入编码VEGFcDNA质粒;对照组仅做单纯机械性TMR。动物于术后不同时间处死,利用组织切片染色法,对照观察两组TMR管道内血管再生与重建状况。结果:实验组管道内新生小血管的密度月数量较高,与对照组相比具有非常显著性差异（P<0.001）。结论:机械TMR管道内注入VEGcDNA质粒后能有效地促进其血管生成,机械TMR结合转基因技术促血管生成作用明显优于单纯机械性TMR。

关键词：机械性透室壁心肌血管重建术血管内皮生长因子质粒血管生成形态学实验研究

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纳米粒子载反义单核细胞趋化蛋白-1基因局部定位转染抑制兔颈动脉内膜损伤后内膜增生的研究

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中华心血管病杂志 2002年第2期30卷 67-70页

作者：曾勇朱文玲王宗立刘佩毛赵三妹张华杨菁王澎延宋存先中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院心内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学院病理室中国医学科学院生物工程研究所

目的　观察纳米粒子包载反义单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )基因局部腔内转染对兔颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响。方法　采用球囊导管损伤动脉内膜的方法建立兔颈动脉球囊损伤模型。用纳米粒子包载反义MCP 1基因 ,采用保留灌注的方法... 详细信息

目的　观察纳米粒子包载反义单核细胞趋化蛋白 1 (MCP 1 )基因局部腔内转染对兔颈动脉球囊损伤后内膜增生的影响。方法　采用球囊导管损伤动脉内膜的方法建立兔颈动脉球囊损伤模型。用纳米粒子包载反义MCP 1基因 ,采用保留灌注的方法进行局部腔内定位转染。结果　聚合酶联反应检测发现重组基因整合 ,RNANorthern杂交观察到转基因治疗组有反义MCP 1基因表达 ,内源性MCP 1基因的表达受抑制 ,转基因治疗组内膜 /中膜面积比降低 42 %。结论　纳米粒子可以作为转基因载体 ,反义MCP

关键词：单核细胞趋化蛋白-1 反义RNA 再狭窄纳米粒子 PTCA 内膜增生基因载体

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北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶的cDNA和蛋白质的结构分析

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 64-69页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢张可满薛红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序... 详细信息

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较 .北京鸭LCATcDNA (在GenBank中的注册号为AF32 4 887)全长 195 3bp ,其中开放阅读框架 135 6bp ,编码 4 5 1个氨基酸 ,包括一个由 2 3个氨基酸构成的疏水性信号肽和一个由 4 2 8个氨基酸组成的成熟蛋白 .该成熟蛋白比人LCAT在C端多 12个氨基酸 ,其与鸡、人、家兔的同源性依次为 98%、83%和 82 % .与其它种属LCAT蛋白序列的比较结果表明 ,北京鸭LCAT蛋白质序列虽然在长度上和结构上与其它种属有一定的差异。

关键词：北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 cDNA 蛋白质结构

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热休克蛋白的产生提高大鼠离体皮瓣的成活

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基础医学与临床 2002年第6期22卷 566-569页

作者：叶菜英 Bethodtle H.Wang Rabelt Udelsman 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005 美国霍普金斯大学医学院

观察热休克蛋白对离体皮瓣成活的影响。雄性大鼠分对照组 ,全身加热组 ,局部加热组。加热组分别全身或局部 4 2℃作用 30min ,离体皮瓣取自大腿内收缩肌条一块 (2cm× 6cm) ,植入同侧腹股沟。手术 3d后处死动物 ,用硝基蓝四氮唑染... 详细信息

观察热休克蛋白对离体皮瓣成活的影响。雄性大鼠分对照组 ,全身加热组 ,局部加热组。加热组分别全身或局部 4 2℃作用 30min ,离体皮瓣取自大腿内收缩肌条一块 (2cm× 6cm) ,植入同侧腹股沟。手术 3d后处死动物 ,用硝基蓝四氮唑染色判定皮肤损失面积 (cm2 )及肌肉运动性 ,皮瓣上皮肤和肌肉用定量Norther和Wester分析HSP72 的变化及离体皮瓣存活率。局部和全身预热的大鼠皮肤成活率明显提高 2 3% ,HSP72 的表达升高 ,与对照组相比P <0 0 5。实验结果表明热诱导热休克蛋白的产生有利于皮肤移植后皮瓣的成活。

关键词：成活热休克蛋白离体皮瓣

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用RACE结合cDNA文库筛选的方法获取新的锌指蛋白基因

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遗传 2002年第3期24卷 329-331页

作者：杜占文刘立仁张俊武中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同... 详细信息

大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同源部位 ,然后以非同源序列为探针 ,筛选cDNA文库。利用此方法成功地从人骨髓cDNA文库中克隆到几个编码锌指蛋白并代表原有EST的新的全长cDNA。这一策略也应适用于筛选编码具有其他序列保守性功能结构域蛋白的基因。

关键词： RACE cDNA文库筛选锌指蛋白基因非同源DNA序列新基因

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仙贞片对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的调节

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北京中医药大学学报 2002年第4期25卷 21-24页

作者：潘明政郭赛珊梁晓春唐代屹张建伟孙仁宇中国协和医科大学北京协和医院中医科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所病理生理研究室北京100730

观察仙贞片对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA高表达的影响。采用链脲佐菌素左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型 ,随机分模型组、仙贞片组及氨基胍组各 10只 ,另设正常对照组 10只。应用原位杂交的方法。结果模型组大鼠主动脉... 详细信息

观察仙贞片对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物受体mRNA高表达的影响。采用链脲佐菌素左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型 ,随机分模型组、仙贞片组及氨基胍组各 10只 ,另设正常对照组 10只。应用原位杂交的方法。结果模型组大鼠主动脉内皮细胞糖基化终产物受体mR NA表达的灰度值明显增高 ,出现过度表达。仙贞片治疗后主动脉糖基化终产物受体mRNA表达的灰度值降低 ,与氨基胍组相近似 (P >0 0 5 ) ,与模型组比较差异显著 (P <0 0 5 )。显示仙贞片与氨基胍一样 ,可显著下调糖基化终产物受体 -mRNA的过度表达 ,对糖尿病大鼠主动脉血管糖基化终产物受体高表达有明显调节作用。提示仙贞片对高血糖造成的主动脉血管损害具有保护作用。

关键词：仙贞片糖尿病大鼠主动脉 mRNA 糖基化终产物受体

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