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由BL21DE3^(pET28C-rPAL-1-cDNA)高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶

中国药理学与毒理学杂志 2000年第3期14卷 211-215页

作者：蔡朱男余应年陈星若袁丽芳浙江大学医学院病理生理学教研室浙江杭州310031 中国医学科学院基础医学研究所遗传室北京100730

为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径 ,本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) c DNA的重组表达质粒 ,并用它转化大肠杆菌 BL2 1 DE3获得工程菌 BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA.经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷诱导后 ,通过 SDS- PAGE... 详细信息

为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径 ,本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) c DNA的重组表达质粒 ,并用它转化大肠杆菌 BL2 1 DE3获得工程菌 BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA.经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷诱导后 ,通过 SDS- PAGE及微型蛋白双向电泳 ,证明表达的目的蛋白的分子量为 78.6ku,主要存在于破碎菌体的沉积物中 (以包涵体形式存在 ) .按 Zucker法测定 PAL酶活性 ,并进行酶动力学实验 .测得表达蛋白的酶比活性为 462 nmol·g-1·min-1,Km,vmax分别为 0 .50 mmol·L-1和3. 0 5nmol · min-1.结果证明所建立BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA大肠杆菌菌株能高效表达有活性的 PAL .

关键词：脱氨酶类苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸苯丙酮尿症

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反义大鼠凝血酶受体基因的构建及其对主动脉血管平滑肌细胞增生的影响

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基础医学与临床 2000年第3期20卷 47-51页

作者：任国锋王宗立李拥军许漫赵三妹刘佩毛张华佘铭鹏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理室北京100005

凝血酶激活凝血酶受体引起的一系列细胞事件和内源性PDGF-A，bFGF的产生可能是血管病变发生发展过程中平滑肌细胞增生的重要因素。为进一步阐明血管损伤后平滑肌细胞增生的机理及探索有效治疗途径，针对凝血酶受体基因中一段包括转录起... 详细信息

凝血酶激活凝血酶受体引起的一系列细胞事件和内源性PDGF-A，bFGF的产生可能是血管病变发生发展过程中平滑肌细胞增生的重要因素。为进一步阐明血管损伤后平滑肌细胞增生的机理及探索有效治疗途径，针对凝血酶受体基因中一段包括转录起始点，翻译起始点，凝血酶结合和切割位点的序列作为靶序列，构建了凝血酶受体反义RNA重组表达载体pLXSN／ATR，并将其导入凝血酶刺激的动脉平滑肌细胞。结果表明重组基因转染能抑制凝血酶对大鼠平滑肌细胞DNA合成的刺激作用。提示序列特异的凝血酶受体反义重组基因的表达可以抑制凝血酶受体介导的血管平滑肌细胞增生。

关键词：凝血酶受体反义RNA 再狭窄平滑肌细胞增生 PCR

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饮酒和载脂蛋白AI基因启动子G/A置换多态性对凉山彝汉人血浆载脂蛋白AI水平的影响

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基础医学与临床 2000年第2期20卷 74-77页

作者：赵庆伟申萍张华周梦玲佘铭鹏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理室北京100005

研究载脂蛋白ＡＩ启动子－７５ｂｐ处Ｇ／Ａ嘌呤置换以及饮酒对凉山彝族及汉族人群血浆载脂蛋白ＡＩ水平的影响。经现场调查随机抽样７４２名凉山州彝汉健康居民，包括三个人群样本：彝族农民、彝族移民、汉族居民。根据饮用酒精量将... 详细信息

研究载脂蛋白ＡＩ启动子－７５ｂｐ处Ｇ／Ａ嘌呤置换以及饮酒对凉山彝族及汉族人群血浆载脂蛋白ＡＩ水平的影响。经现场调查随机抽样７４２名凉山州彝汉健康居民，包括三个人群样本：彝族农民、彝族移民、汉族居民。根据饮用酒精量将各人群分为四组：不饮酒者、１～２５ｇ／ｄ饮酒者、２６～７５ｇ／ｄ以上饮酒者、７５ｇ／ｄ以上饮酒者。采集清晨空腹血样１０ｍＬ／人。全项血脂和脂蛋白水平测定。从冷冻血凝块中抽提基因组ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增，进行片段长度多态性分析。结果：随着饮酒量的增加，血浆ＨＤＬＣ和ａｐｏＡＩ水平逐渐升高，在彝族农民样本和汉民样本中有非常显著的统计学意义。三人群样本间的Ａ等位基因频率相似。Ａ等位基因携带者与ＧＧ基因型携带者之间的各项血脂水平无显著差异。但在不饮酒者中，Ａ等位基因携带者的ａｐｏＡＩ水平明显高于ＧＧ基因型携带者；而饮酒者中，Ａ等位基因携带者的ａｐｏＡＩ和ＨＤＬＣ水平明显低于ＧＧ基因型携带者，上述差异在城镇人群中显示出统计学意义（Ｐ＜０．０５）。不饮酒者中，Ｇ／Ａ置换可以解释１８％的个体间ａｐｏＡＩ水平变异（Ｆ＝８．９４，Ｐ＜０．０１）。结论；适量饮酒和ａｐｏＡＩ基因－７５处Ｇ／Ａ置换多态性均可使?

关键词：酒精载脂蛋白AI 启动子多态性彝族汉族

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基质金属蛋白酶及其组织抑制物预测葡萄胎恶变的研究

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中华妇产科杂志 2000年第9期35卷 547-550页

作者：李志英向阳戴理程国钧张德永杨秀玉宋鸿钊湖北三峡学院医学院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科 100730 中国医学科学院基础医学研究所遗传室解放军总医院妇产科

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TI... 详细信息

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TIMP 1、TIMP 2基因表达量。结果　MMP 9、MMP 2、TIMP 1及TIMP 2在葡萄胎组织及正常绒毛组织中的表达量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。但MMP 9/TIMP 1比值在发生恶变的葡萄胎组织明显高于未发生恶变的葡萄胎组织及正常绒毛组织(P <0 .0 1) ;而MMP 2 /TIMP 2在各组织中则无明显差异。结论　MMP 9/TIMP 1与葡萄胎恶变有关 ;MMP 9与TIMP

关键词：金属蛋白酶类金属蛋白酶类组织抑制剂葡萄胎

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尼古丁对中性粒细胞活化及细胞间粘附分子基因表达的影响

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中国病理生理杂志 2000年第9期16卷 779-782页

作者：周卫辉陈祥银余丽君赵青严仪昭中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的 :观察尼古丁对中性粒细胞 (PMNs)的活化 ,PMNs与内皮细胞的粘附及内皮细胞表达ICAM - 1mRNA ,有助于阐明尼古丁在慢性阻塞性肺疾患 (COPD)炎症发病中的作用。方法 :测定 β -葡萄糖醛酸苷酶及溶菌酶活性 ,以反映PMNs的活化 ;培养... 详细信息

目的 :观察尼古丁对中性粒细胞 (PMNs)的活化 ,PMNs与内皮细胞的粘附及内皮细胞表达ICAM - 1mRNA ,有助于阐明尼古丁在慢性阻塞性肺疾患 (COPD)炎症发病中的作用。方法 :测定 β -葡萄糖醛酸苷酶及溶菌酶活性 ,以反映PMNs的活化 ;培养人脐静脉内皮细胞 ,观察PMNs与内皮细胞的粘附 ;制备探针 ,提取总RNA ,Northern杂交测细胞间粘附分子 - 1(ICAM - 1)mRNA。结果 :尼古丁可活化PMNs ,增加PMNs-内皮细胞粘附 ;增强ICAM - 1mRNA表达 ,76 4- 3可明显抑制尼古丁的上述作用。结论 :尼古丁通过活化PMNs,促进PMNs -内皮细胞粘附 ,在COPD慢性炎症发病中起重要作用。而这种粘附作用的增加与粘附分子表达增强有关 ;抑制尼古丁的上述作用可能是 76 4-

关键词：中性白细胞细胞粘附分子尼古丁阻塞性肺疾病

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肺血管内皮细胞在大鼠急性肺损伤发生中的作用

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中国病理生理杂志 2000年第9期16卷 831-834页

作者：杨红斯琴孙仁宇中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的 :观察肺血管内皮细胞受损在大鼠急性肺损伤发病中的作用及地塞米松的影响。方法 :给Wistar大鼠静脉注射脂多糖 (LPS 5mg/kgBW)复制急性肺损伤模型。采用ELISA、放射免疫、原位杂交等多种方法测定肺组织ICAM - 1mRNA表达、iNOS活性... 详细信息

目的 :观察肺血管内皮细胞受损在大鼠急性肺损伤发病中的作用及地塞米松的影响。方法 :给Wistar大鼠静脉注射脂多糖 (LPS 5mg/kgBW)复制急性肺损伤模型。采用ELISA、放射免疫、原位杂交等多种方法测定肺组织ICAM - 1mRNA表达、iNOS活性、血中TNF -α、NO-2 /NO3-、ACE含量及肺血管通透性、肺泡灌洗液中细胞数、蛋白含量等的变化。结果 :注射LPS后 ,肺血管ICAM - 1mRNA表达增加 ,从 1h开始至 2 4h达高峰。肺组织匀浆iNOS活性升高、肺血管通透性升高、肺泡灌洗液中中性粒细胞数量增加 ,巨噬细胞数量减少、蛋白含量增加 ,血中TNF -α、NO2 -/NO3-含量升高而ACE含量下降等变化多在注LPS后 2h明显。预先给予地塞米松对上述多种指标的变化有明显缓解作用。结论 :提示LPS通过损伤肺血管内皮细胞导致急性肺损伤。

关键词：内毒素急性肺损伤肺血管内皮细胞大鼠

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表达人载脂蛋白AI小鼠主动脉平滑肌细胞的培养及意义

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基础医学与临床 2000年第1期20卷 38-40页

作者：谷素敏李汇华佘铭鹏中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所病理室北京100005

培养表达人ａｐｏＡＩ转基因小鼠主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）。从具有可诱导，高效，多组织表达人ａｐｏＡＩ转基因小鼠分离主动脉，用改良贴块法培养血管ＳＭＣ。细胞经相差显微镜和免疫细胞化学证实具有ＳＭＣ特征。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ... 详细信息

培养表达人ａｐｏＡＩ转基因小鼠主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）。从具有可诱导，高效，多组织表达人ａｐｏＡＩ转基因小鼠分离主动脉，用改良贴块法培养血管ＳＭＣ。细胞经相差显微镜和免疫细胞化学证实具有ＳＭＣ特征。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ表明转基因鼠主动脉平滑肌细胞中有人ａｐｏＡＩｍＲＮＡ表达，而正常鼠则未检测出，为在体外从细胞和分子水平研究ａｎＯＡＩ基因表达在胆固醇代谢及动脉粥样硬化发生中的作用提供了较理想的细胞模型。

关键词：载脂蛋白AI 转基因小鼠平滑肌细胞细胞培养

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嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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中华血液学杂志 2000年第10期21卷 517-520页

作者：刘海丽许彩民吕照江陆承平潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院南京农业大学

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素... 详细信息

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于PNH和其他贫血患者及正常人的红细胞 ,采用 96孔板在波长 6 30nm酶标仪比色 ;同时用CD59单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG标记红细胞 ,以流式细胞仪分析毒素作用前后CD59标记率。结果　对 15例PNH患者、15名正常人、15例非PNH贫血患者的红细胞 ,进行hec毒素试验 ,发现毒素在 0 .12 5g/L、37℃作用 2 0min后 ,正常人和非PNH贫血患者的红细胞完全溶解 ,而PNH患者存留红细胞的百分率与CD59标记率成反比。毒素作用前后流式细胞仪检测结果表明 ,毒素可以特异地作用于CD59阳性细胞。结论　PNH患者的红细胞比其他非PNH贫血患者及正常人的红细胞有明显的抗毒素溶破作用 ,且毒素作用后存留细胞的百分数反映CD59标记率 ,故可作为PNH诊断的敏感、特异、简便可行的新诊断方法。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿嗜水气单胞菌 hec毒素

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TMR术后激光心肌管道的实验形态学观察

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中国临床解剖学杂志 2000年第2期18卷 161-163页

作者：张晓东刘晓程刘克曹承刚李若凡程效东徐达传北京市中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院解剖组胚教研室 100005 中国医学科学院北京协和医院心外科第一军医大学解剖学教研室

目的 :从形态学角度探讨透室壁性激光心肌血管重建术 (TMR)的供血机理。方法 :采用CO2 激光照射成年兔左室壁 ,形成透室壁性激光心肌管道 ,于术后不同时间处死 ,利用组织学切片染色法 ,观察激光心肌管道内血管的再生与重建及形态学变化... 详细信息

目的 :从形态学角度探讨透室壁性激光心肌血管重建术 (TMR)的供血机理。方法 :采用CO2 激光照射成年兔左室壁 ,形成透室壁性激光心肌管道 ,于术后不同时间处死 ,利用组织学切片染色法 ,观察激光心肌管道内血管的再生与重建及形态学变化。结果 :TMR术后 ,激光心肌管道内相继出现血液凝固、机化、新生血管及纤维组织增生 ,最终由纤维性瘢痕修复。但在纤维性瘢痕中存在着稀少的与心腔相通的小动脉和小静脉。结论 :激光心肌管道本身并不能对心肌直接供血 ,而是由机化过程形成的毛细血管和小血管及纤维瘢痕中存留的小动脉对心肌供血。

关键词：透室壁性激光心血管重建术形态学心肌管道

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吸入一氧化氮治疗胎粪吸入综合征的实验研究

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中华儿科杂志 2000年第11期38卷 692-695页

作者：华子瑜王丹华张宏张叔平姚丹孙仁宇徐景蓁重庆医科大学附属儿童医院新生儿科 400014 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所病理生理研究室

目的　建立新生猪胎粪吸入综合征 (MAS)动物模型 ;评价吸入一氧化氮 (NO)的疗效及对机体的其他影响。方法　日龄 7d以内健康新生猪在机械通气条件下 ,吸入 2 0 %胎粪盐水 (MNS)4～ 6ml kg制成重症MAS模型。观察NO治疗前后血气、循环指... 详细信息

目的　建立新生猪胎粪吸入综合征 (MAS)动物模型 ;评价吸入一氧化氮 (NO)的疗效及对机体的其他影响。方法　日龄 7d以内健康新生猪在机械通气条件下 ,吸入 2 0 %胎粪盐水 (MNS)4～ 6ml kg制成重症MAS模型。观察NO治疗前后血气、循环指标、高铁血红蛋白 (MHb)、肺组织匀浆丙二醛 (MDA)含量的变化及肺组织病理改变。结果　新生猪吸入胎粪后出现重症MAS的临床表现 :低氧血症 [动脉血氧分压 (PaO2 ) <6 0mmHg],动脉与肺泡氧分压之比 (a APO2 ) <0 .2 ]、酸中毒 (pH值<7.3)、肺动脉压升高 (≥ 2 5mmHg)。吸入 2 0× 10 - 6 或 40× 10 - 6 NO均可迅速纠正低氧血症、降低肺动脉压 [PaO2 分别由 (5 0± 7)、(4 6± 6 )mmHg上升至 (115± 34)、(85± 2 3)mmHg (P <0 .0 1) ;PAP分别由 (32± 6 )、(2 4± 3)mmHg下降至 (2 1± 3)、(17± 4)mmHg]。吸入不同浓度的NO两组间疗效差异无显著性 ,体循环稳定。短期 (2h)吸入NO治疗不会引起高铁血红蛋白血症、肺组织氧自由基升高等毒副作用 ;不能抑制肺组织炎症损伤。结论　短期 (≤ 2h)、低浓度 (≤ 40× 10 - 6 )吸入NO治疗MAS迅速、安全、有效。治疗重症MAS宜采用包括吸入NO在内的综合治疗措施。

关键词：一氧化氮胎粪吸入高血压,肺性高铁血红蛋白

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