检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2025年第2期45卷 183-188页

作者：罗钰蓓黄建军杨文秀张军红李静赵春华豆晓伟贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院乳腺外科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代... 详细信息

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代细胞的特异遗传标记。集落形成实验和球形成实验分析乳腺癌原代细胞系致瘤性。Real-time PCR和Western blot实验分析乳腺癌原代细胞上皮间充质转换分子。转移实验和侵袭实验分析乳腺癌原代细胞的转移能力。结果培养了4种乳腺癌原代细胞系BC25#,BC51#,BC56#和BC57#。这些乳腺癌细胞系培养基是DMEM培养基,可以传代,具有清楚的临床背景。STR基因分型确定了4种乳腺癌原代细胞系特异的遗传标记。集落形成实验和成球实验发现4种乳腺癌原代细胞系比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的形成肿瘤能力。Real-time PCR和Western blot实验发现,与传统的乳腺癌细胞T-47D相比,4种乳腺癌原代细胞系E-cadherin表达降低,vimentin表达升高。迁移实验和侵袭实验发现原代细胞系BC25#比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的转移能力。结论培养了4种可以传代的乳腺癌原代细胞系BC25#、BC51#、BC56#和BC57#,为乳腺癌基础研究提供了新的肿瘤细胞模型。

关键词：乳腺癌原代细胞系基础研究新肿瘤细胞模型

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敲降人组织特异性lncRNA MEK6-AS1改善衰老间充质干细胞成骨分化能力

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基础医学与临床 2025年第5期45卷 568-574页

作者：陈运华李迪赵晓妍陈明李红凌赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心北京100005

目的旨在探讨一条新发现的人组织特异性长链非编码RNA(lncRNA)MEK6-AS1在改善人间充质干细胞(hMSCs)衰老后的成骨分化能力中的作用及分子机制。方法建立体外hMSCs复制性衰老细胞模型,利用RT-qPCR检测MEK6-AS1在衰老过程中的表达差异;采... 详细信息

目的旨在探讨一条新发现的人组织特异性长链非编码RNA(lncRNA)MEK6-AS1在改善人间充质干细胞(hMSCs)衰老后的成骨分化能力中的作用及分子机制。方法建立体外hMSCs复制性衰老细胞模型,利用RT-qPCR检测MEK6-AS1在衰老过程中的表达差异;采用慢病毒敲降技术抑制MEK6-AS1的表达,利用转录组测序技术分析MEK6-AS1对成骨相关转录组的影响;通过诱导细胞中成骨分化标志物的mRNA及蛋白质表达水平以及碱性磷酸酶(ALP)染色检测ALP活性,评估验证以MEK6-AS1为干预靶点对人衰老间充质干细胞成骨分化能力的改善效果。结果随着衰老的进展,hMSCs的成骨分化能力明显下降,MEK6-AS1的表达显著上调(P<0.0001)。在成骨诱导过程中,与衰老的对照组细胞相比,敲降MEK6-AS1的衰老细胞中成骨标志物的表达更高,诱导细胞的ALP活性更强(P<0.001)。结论敲降人组织特异性lncRNA MEK6-AS1可提升衰老MSCs的成骨分化能力,lncRNA MEK6-AS1可作为衰老相关骨质疏松防治的新靶点。

关键词：间充质干细胞(MSCs) 衰老成骨分化长链非编码RNA(lncRNA) MEK6-AS1

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间充质干细胞系统：解析机体免疫调控和代谢平衡

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 263-267页

作者：赵春华北京协和医学院、中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心协和医院北京100000

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质... 详细信息

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质干/祖细胞群体统称为MSC系统。MSC系统的确立具有重要意义:(1)赋予了MSC三大重要生物学特征,即干细胞自身特性、组织微环境功能及免疫调控功能;(2)平衡机体免疫与组织代谢;(3)提供高效转化为临床安全有效的组织特异性干细胞。总之,该系统很好的解释了间充质干细胞的异质性,同时丰富了我们之前提出的亚全能干细胞理论,为研究人员更好的理解间充质干细胞提供了深厚的理论平台。

关键词：干细胞间充质干细胞间充质干细胞系统

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肝癌HepG2细胞分泌的Exosome对间充质干细胞分化的影响及其相互作用机制

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中国医学科学院学报 2017年第3期39卷 312-317页

作者：骆飞孙昭韩钦薛春玲白春梅中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肿瘤内科北京100052 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的评估肝癌HepG2细胞分泌的Exosome对间充质干细胞(MSC)分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAF)的影响及其相互作用机制。方法在人脂肪MSC培养体系中加入HepG2细胞分泌的Exosome进行培养,采用Western blot法检测CAF特征性蛋白的表达情况。将... 详细信息

目的评估肝癌HepG2细胞分泌的Exosome对间充质干细胞(MSC)分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAF)的影响及其相互作用机制。方法在人脂肪MSC培养体系中加入HepG2细胞分泌的Exosome进行培养,采用Western blot法检测CAF特征性蛋白的表达情况。将已鉴定为CAF样条件培养基(CAF-CM)和牛血清白蛋白对照组分别加至HepG2培养基中,采用Western blot法和定量PCR检测上皮间质转化相关基因的表达,MTS法检测细胞增殖,Transwell法检测HepG2细胞的迁移和侵袭。结果 HepG2细胞分泌的Exosome表达CD63、热休克蛋白(HSP)70和HSP90。将Exosome加入MSC培养体系后14 d,可检测到α平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞激活蛋白α、白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β等CAF特征性蛋白的表达。MTS法检测CAF-CM组的细胞增殖OD值为1.075±0.104,明显高于对照组的0.874±0.066(P=0.023)和MSC条件培养基组的0.649±0.034(P=0.0005)。CAF-CM组迁移的HepG2细胞数为(42.5±9.1)个,明显高于对照组的(18.5±3.1)个(P=0.001);CAF-CM组侵袭细胞数为(29.0±3.5)个,明显高于对照组的(13.1±3.7)个(P=0.009)。CAF-CM组Smad交互蛋白1(P=0.040)、β-catenin(P=0.038)、纤连蛋白(P=0.029)和Vimentin(P=0.013)的表达较对照组显著上调;而CAF-CM组的紧密连接蛋白表达显著低于对照组(P=0.010)。结论肝癌HepG2细胞系分泌的Exosome可诱导脂肪组织来源的MSC分化为CAF,后者又可以促进HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词： Exosome 间充质干细胞肝癌肿瘤相关成纤维细胞

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间充质干细胞来源的Exosome对神经损伤的保护作用

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中国医学科学院学报 2016年第1期38卷 33-36页

作者：魏俊吉陈云飞薛春玲马百涛沈雅梅关健包新杰吴昊韩钦王任直赵春华中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的研究脂肪间充质干细胞（MSC）来源的Exosome对谷氨酸神经损伤的保护作用及可能机制。方法采用透射电镜和Western blot法检测人脂肪MSC来源的Exosome的特征,ELISA法检测Exosome中主要的细胞因子。用PC12细胞建立谷氨酸神经细胞损伤模... 详细信息

目的研究脂肪间充质干细胞（MSC）来源的Exosome对谷氨酸神经损伤的保护作用及可能机制。方法采用透射电镜和Western blot法检测人脂肪MSC来源的Exosome的特征,ELISA法检测Exosome中主要的细胞因子。用PC12细胞建立谷氨酸神经细胞损伤模型,并分为对照组（未经谷氨酸损伤的细胞）、Glu组（谷氨酸损伤未经其他处理的细胞）、Glu＋Exo组（谷氨酸损伤后用100 ng/ml MSC Exosome处理的细胞）、Glu＋Exo＋Akt组（谷氨酸损伤后用MSC Exosome同时加10μmol/L Akt抑制剂LY294002处理的细胞）、Glu＋Exo＋Erk组（谷氨酸损伤后用MSC Exosome同时加10μmol/L Erk抑制剂U0126处理的细胞）和Glu＋Exo＋Trk B组（谷氨酸损伤后用MSC Exosome同时加10μmol/L Trk B抑制剂K252a处理的细胞）,MTS法检测各组细胞的存活率并进行比较。结果透射电镜下可见Exosome为40-100 nm的小囊泡结构,Western blot法检测结果显示其可表达CD63、CD81、HSP70和HSP90等特征性蛋白。ELISA检测结果显示Exosome中主要包含的细胞因子为肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子,含量分别为9336.49±258.63和58645.50±16014.62;而脑源性神经营养因子、血管内皮生长因子和神经生长因子含量均较低,分别为1928.25±385.47、1136.94±5.99和33.34±9.43。MTS检测结果显示,对照组、Glu组、Glu＋Exo组、Glu＋Exo＋Akt组、Glu＋Exo＋Erk组和Glu＋Exo＋Trk B组的PC12细胞存活率分别为0.842±0.047、0.306±0.024、0.566±0.026、0.461±0.016、0.497±0.003和0.515±0.034,其中,Glu组显著低于对照组（P=0.02）,Glu＋Exo组显著高于Glu组（P=0.01）,Glu＋Exo＋Akt组显著低于Glu＋Exo组（P=0.01）。结论人脂肪MSC来源的Exosome具有保护谷氨酸神经损伤的作用,这可能是通过激活磷脂酰基醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路来实现的。

关键词：间充质干细胞 Exosome 神经损伤治疗机制

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成人AB型血清取代胎牛血清在体外有效扩增骨髓间充质干细胞

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 576-581页

作者：胡建立李静陈斌边春景马杰赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的找到一种合适的胎牛血清的替代品,可以在体外有效扩增间充质干细胞。方法比较骨髓间充质干细胞(BMSCs)在健康成人AB型血清、AB型脐带血清和胎牛血清培养体系中的不同代次的细胞形态、免疫表型、周期、生长曲线等生物学特性。结果骨... 详细信息

目的找到一种合适的胎牛血清的替代品,可以在体外有效扩增间充质干细胞。方法比较骨髓间充质干细胞(BMSCs)在健康成人AB型血清、AB型脐带血清和胎牛血清培养体系中的不同代次的细胞形态、免疫表型、周期、生长曲线等生物学特性。结果骨髓间充质干细胞在3种不同血清的培养体系中的生物学特性无明显差异。结论 AB型血清可以取代胎牛血清在体外扩增骨髓间充质干细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞血清扩增

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成体组织来源的Sca-1^+CD117-Lin-多潜能干细胞生物学特性分析

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第43期12卷 8454-8457页

作者：刘瑞张斌刘星霞朱希山陈媛豆晓伟赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心北京市100005

背景:关于成体干细胞可塑性机制的解释,目前多数学者接受的观点是多种组织器官内存在的成体干细胞其实并非均一的细胞群体,其中包含着更为原始的多潜能干细胞,但对于多潜能干细胞的起源、鉴别及其生物学特性仍缺乏了解。目的:探讨从成... 详细信息

背景:关于成体干细胞可塑性机制的解释,目前多数学者接受的观点是多种组织器官内存在的成体干细胞其实并非均一的细胞群体,其中包含着更为原始的多潜能干细胞,但对于多潜能干细胞的起源、鉴别及其生物学特性仍缺乏了解。目的:探讨从成体组织中能否分离出一群具有独特表型的更为原始的多潜能干细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-01在北京协和医学院基础学院组织工程中心完成。材料:清洁级12.5~14.5dBALB/C孕鼠10只。方法:无菌条件下打开BALB/C孕鼠子宫获取胚胎体壁组织,胰蛋白酶消化后贴壁法制成细胞悬液,接种后免疫磁珠分选Sca-1+CD117-Lin-细胞群,当细胞达70%~80%融合时消化传代,取第5代细胞用于实验。主要观察指标:倒置相差显微镜和扫描电子显微镜观察该类细胞的显微和超微形态,通过生长曲线和细胞周期观察其基本生长特性,采用流式细胞技术分析该群细胞免疫表型,以RT-PCR法检测胚胎干细胞相关抗原的表达情况,通过VonKossa染色、油红O染色、甲苯胺蓝染色及免疫细胞荧光染色观察其向三胚层细胞分化的潜能。结果:Sca-1+CD117-Lin-细胞贴壁生长,呈纺锤或短梭形,可在体外快速稳定扩增50代以上;传代后3~7d为对数生长期,此后即进入平台期生长,倍增时间约为32h,90.43%细胞处于G0/G1期,G2/M+S期的细胞比例为9.57%;细胞表型稳定,高表达Sca-1,不表达CD117,CD14,CD19,CD31,CD34,CD45和Flk-1,中度表达CD44;胚胎干细胞相关抗原Sox2,Oct-4及Nanog均呈阳性表达;诱导分化实验表明该细胞可以向中胚层来源的成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、外胚层来源的神经胶质细胞以及内胚层来源的肝细胞分化。结论:从成体组织内可以分离出Sca-1+CD117-Lin-细胞群,其表达胚胎干细胞相关抗原,能够向三胚层分化,是一群更为原始的多潜能成体干细胞。

关键词：成体干细胞可塑性分化

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骨髓Sca-1^+间充质干细胞移植减轻小鼠迟发型超敏反应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 133-137页

作者：曲学彬曾洋刘星霞赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背... 详细信息

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞。24 h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例。结果注射组小鼠足跖的肿胀程度[(0.368±0.126)mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111)mm,P<0.01]。注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应。

关键词：间充质干细胞迟发型超敏反应免疫反应

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慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 404-408页

作者：王椋曲学彬赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院组织工程中心北京100005

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、... 详细信息

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、凋亡的作用情况。结果 CML和正常志愿者骨髓来源的MSC的细胞形态和表型没有差异,CML患者来源的MSC抑制T细胞增殖能力和抑制T细胞停留在G0/G1期的作用均减弱(CML MSC组74.5%±1.2%,BMSC组94.0%±1.9%,P<0.05),CML患者抑制T细胞凋亡的作用增强(CMLMSC组8.36%±1.31%,BMSC组14.10%±0.65%,P<0.05)。结论 CML患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用CML患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML患者最好是选用异基因的MSC移植。

关键词：慢性粒细胞白血病间充质干细胞免疫调节

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非病毒诱导体系高效诱导脐带来源间充质干细胞向胰岛细胞分化

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 675-678,I0017页

作者：李晶朱莉赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化... 详细信息

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化过程中转录因子foxa2、sox17、pdx1、ngn3、pax4、insulin和glut-2在诱导组和非诱导组中的表达水平;免疫荧光染色方法检测胰岛素和C-肽在诱导终末阶段细胞中的表达定位;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素及C-肽的分泌以及细胞对葡萄糖刺激的反应性。结果诱导第1阶段末,诱导后细胞foxa2和sox17的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第2阶段末,诱导细胞pdx1、ngn3和pax4的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第3阶段末,诱导细胞的insulin和glut-2表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05)。免疫荧光染色结果显示,胰岛素和C-肽均表达于诱导终末分化阶段的细胞,效率可达90%以上。ELISA检测结果显示,诱导第3阶段末细胞胰岛素总量为(346.3 739±32.5 149)μU/ml,明显高于未诱导细胞的(17.69±1.46)μU/ml(P<0.01);诱导后细胞置于5.5 mmol/L葡萄糖环境检测到的基础C-肽释放量为(195.10±8.88)pmol/L/h(P<0.01),细胞置于22 mmol/L葡萄糖环境测定葡萄糖刺激C-肽释放量达到(340.99±7.91)pmol/L/h(P<0.01)。结论以UC-MSC作为种子细胞,采用体外非病毒诱导体系获得的分化终末阶段细胞是具有胰岛素分泌功能的成熟胰岛细胞。

关键词：脐带间充质干细胞胰岛细胞转录因子

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