检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2007年第3期29卷 394-397,I0008页

作者：周崎刘玉琴赵家良张华中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞中心北京100005

目的研究氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)表达的影响,探讨氧化应激诱导的ELAM-1的表达与白细胞介素1α(IL-1α)的关系。方法原代培养的猪眼小梁细胞经过血清饥饿培养后,用不同浓度白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1r... 详细信息

目的研究氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)表达的影响,探讨氧化应激诱导的ELAM-1的表达与白细胞介素1α(IL-1α)的关系。方法原代培养的猪眼小梁细胞经过血清饥饿培养后,用不同浓度白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1rα)处理或直接用1mmol/L的H2O2刺激后,用免疫细胞化学法检测小梁细胞E-LAM-1的表达。结果H2O2处理的原代培养的猪眼小梁细胞中ELAM-1表达呈阳性,高浓度(180μg/ml和600μg/ml)拮抗剂IL-1rα预处理的猪眼小梁细胞ELAM-1表达呈阴性。结论氧化应激可诱导猪眼小梁细胞表达ELAM-1。在体外细胞培养体系,高浓度的IL-1rα可拮抗氧化应激对ELAM-1表达的作用。

关键词：氧化应激小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1

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天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷对阿尔茨海默病模型小鼠脑内β-淀粉样多肽表达的影响及其机制

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中华病理学杂志 2016年第11期45卷 780-785页

作者：周楠楠朱燃赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L）... 详细信息

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L），黄芪总皂苷高、低剂量组（黄芪总皂苷-H、黄芪总皂苷-L）及芍药苷高、低剂量组（芍药苷-H、芍药苷-L），阳性对照组，每组10只；另取同窝阴性小鼠10只作为阴性对照组。药物干预4个月后，观察各组小鼠行为学变化及脑部病理学变化情况，并用模型细胞探讨其相关的作用机制。结果与阳性对照组相比，在行为学水迷宫试验中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组隐形平台寻找时间分别缩短，平台撤后在原目标象限停留时间分别延长（ P＜0.01）；在病理形态学检测中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组海马区Aβ斑块阳性面积分别降低70.1％、62.4％和57.6％（ P＜0.01），皮层区Aβ斑块阳性面积分别降低81.0％、69.6％和66.6％（ P＜0.01）；各干预组小鼠行为学改善和脑部Aβ斑块减少呈药物剂量依赖性；各干预组小鼠脑匀浆中及模型细胞培养上清液中Aβ水平均有降低；分泌酶表达结果显示，天麻素降低模型细胞β分泌酶基因转录水平达32.9％（ P＜0.01），降低β分泌酶蛋白表达水平达47.9％（ P＜0.01），黄芪总皂苷和芍药苷对β分泌酶在转录和蛋白表达水平无影响。结论天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷均可明显改善5XFAD模型小鼠的学习认知及记忆能力，且均可明显抑制小鼠脑内Aβ斑块及脑组织中Aβ多肽，其中天麻素-H作用效果最好；天麻素抑制Aβ斑块可能与抑制β分泌酶进而减少Aβ的产生有关，而黄芪总皂苷和芍药苷未观察到对β分泌酶的影响。

关键词：阿尔茨海默病淀粉样β蛋白前体天麻属黄芪芍药属大脑皮质海马

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二十碳五烯酸与表阿霉素联合应用对人胃癌细胞株MGC-803的作用

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中国医学科学院学报 2007年第3期29卷 353-358,I0006页

作者：郭卫东于健春刘玉琴康维明彭维朝顾蓓董继红中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞培养中心北京100005

目的评估二十碳五烯酸(EPA)联合表阿霉素(EPI)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测各种药物单用和联合应用对细胞的作用,电镜观察细胞超微结构的变化,等效线图解法判断两药合用效果,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果EPA可... 详细信息

目的评估二十碳五烯酸(EPA)联合表阿霉素(EPI)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测各种药物单用和联合应用对细胞的作用,电镜观察细胞超微结构的变化,等效线图解法判断两药合用效果,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果EPA可抑制MGC-803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P<0.01);倒置相差显微镜下可见经EPA培养的胃癌细胞核周存在大量异常颗粒,电镜下在核周及胞浆内可见异常电子致密物;EPA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P<0.01);EPA与EPI联合应用对MGC-803细胞生长的抑制具有协同作用(P<0.05);EPA有一定的G0/G1期阻滞作用,EPI有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖。结论EPA对胃癌细胞株MGC-803有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用。EPA与EPI对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用EPI相比,联合应用可减少EPI的用药剂量。

关键词：二十碳五烯酸表阿霉素药物疗法联合流式细胞术体外研究

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移植P选择素糖蛋白配体1过表达内皮祖细胞促进裸鼠缺血组织新生血管形成

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中华病理学杂志 2010年第9期39卷 621-626页

作者：李玲黄丽杨浩尹洪超中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨细胞黏附的重要分子P选择素糖蛋白配体1（PSGL-1）在内皮祖细胞过表达对内皮祖细胞黏附能力以及促新生血管形成的影响.方法将人PSGL-1 cDNA亚克隆至穿梭质粒,包装扩增病毒.用所产病毒转染大鼠内皮祖细胞,用逆转录聚合酶链反应... 详细信息

目的探讨细胞黏附的重要分子P选择素糖蛋白配体1（PSGL-1）在内皮祖细胞过表达对内皮祖细胞黏附能力以及促新生血管形成的影响.方法将人PSGL-1 cDNA亚克隆至穿梭质粒,包装扩增病毒.用所产病毒转染大鼠内皮祖细胞,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot等方法检测PSGL-1在内皮祖细胞中的表达,用黏附实验检测PSGL-1的功能.将过表达PSGL-1的内皮祖细胞（实验组）移植裸鼠下肢缺血模型,同时设置对照组（转染空载体的内皮祖细胞移植组）和空白组（注射PBS组）,用免疫组织化学方法检测缺血部位新生毛细血管的形成,用激光多普勒检测缺血部位的血流恢复情况.结果 PSGL-1基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度可达3.1×1011 pfu/ml.该重组腺病毒转染内皮祖细胞后,PSGL-1表达显著增加,内皮祖细胞的黏附活性增高;细胞移植至裸鼠缺血下肢后,缺血部位实验组新生毛细血管数量为[（41.0±2.2）个/高倍视野]较对照组[（21.0±2.5）个/高倍视野]及空白组[（10.0±1.6）个/高倍视野]显著增加（P＜0.01）;缺血部位的血流恢复也明显增加[实验组（119.1%±7.0%）、对照组（93.3%±3.0%）、空白组（76.3%±12.0%）,P＜0.01].结论转染PSGL-1可增加内皮祖细胞的黏附活性,移植高表达PSGL-1的内皮祖细胞能促进缺血组织新生血管形成,为改善移植内皮祖细胞治疗缺血性疾病提供了实验依据.

关键词：内皮细胞干细胞 P选择素新生血管化生理性

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二十二碳六烯酸与氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞株MGC803的影响

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中国医学科学院学报 2010年第1期32卷 65-70页

作者：吴全于健春刘玉琴康维明郭卫东中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞培养中心北京100005

目的评估二十二碳六烯酸(DHA)联合氟尿嘧啶(FU)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测DHA、FU单用和联合应用对细胞增殖的影响,Chou-Talalay联合指数原理计算药物单用和合用时的中效浓度(Dm)及合用指数(CI),流式细胞仪检测药... 详细信息

目的评估二十二碳六烯酸(DHA)联合氟尿嘧啶(FU)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测DHA、FU单用和联合应用对细胞增殖的影响,Chou-Talalay联合指数原理计算药物单用和合用时的中效浓度(Dm)及合用指数(CI),流式细胞仪检测药物对细胞周期及凋亡的影响,Western blot检测bcl-2和caspase-3蛋白的表达。结果DHA可抑制MGC803细胞生长,低浓度DHA可促进正常细胞生长(P<0.05)。DHA能显著增强FU对胃癌细胞生长的抑制作用,将FU的Dm减少3.6～2.5倍;两者合用抑制效率达30%时呈协同作用(CI<1),并表现为显著的G_0/G_1期阻滞作用(P<0.05)。DHA能提高FU的诱发凋亡作用,促进剪切型caspase-3蛋白表达。结论DHA可抑制胃癌细胞株MGC803生长,与FU对胃癌细胞的抑制具有协同作用,可减少FU用量。

关键词：二十二碳六烯酸氟尿嘧啶胃癌协同增效

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同种移植小鼠乳腺癌超声造影增强模式与缺氧诱导因子1α的相关性

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中国医学科学院学报 2015年第6期37卷 656-661页

作者：王铭冯海凉刘赫姜玉新刘玉琴朱庆莉戴晴李建初李康宁中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院超声诊断科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞资源中心北京100005

目的探讨乳腺癌超声造影（CEUS）增强模式与缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达及微血管密度（MVD）的关系。方法在22只小鼠体内建立同种移植性乳腺癌,于接种后第4、6、7、8、9、10、11天随机抓取3~4只小鼠进行常规超声及CEUS检查,检查结... 详细信息

目的探讨乳腺癌超声造影（CEUS）增强模式与缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达及微血管密度（MVD）的关系。方法在22只小鼠体内建立同种移植性乳腺癌,于接种后第4、6、7、8、9、10、11天随机抓取3~4只小鼠进行常规超声及CEUS检查,检查结束后处死小鼠并使用免疫组织化学方法检测肿瘤标本中HIF-1α表达及MVD,分析CEUS增强模式与HIF-1α表达及MVD的关系。结果 22只小鼠乳腺癌中瘤体〈0.05 cm3组5例,CEUS表现为Ⅰ型增强模式,周边环状增强,内部无增强4例,Ⅱ型增强模式,周边环状增强并向病灶内呈点线状穿入1例;0.05~0.75 cm3组9例,多表现为Ⅲ型增强模式,病灶弥漫性增强,均匀/不均匀5例;〉0.75 cm3组8例,多表现为Ⅳ型增强模式,周边环状增强,内部结节状增强7例。3组瘤体在CEUS增强模式上差异有统计学意义（P〈0.01）,Ⅰ~Ⅳ型CEUS增强模式与肿瘤大小相关（r=0.841,P〈0.05）。小鼠乳腺癌中HIF-1α表达与增强模式（Ⅰ~Ⅳ型）呈负相关（r=-0.596,P=0.003）,与肿瘤大小无相关性（P〉0.05）。Ⅰ~Ⅳ型CEUS增强模式间MVD均值差异无统计学意义,MVD与肿瘤大小无相关性（P〉0.05）。结论 CEUS可动态评估同种移植性小鼠乳腺癌的血管生成,肿瘤增强模式与肿瘤HIF-1α的表达水平相关。

关键词：乳腺癌同种移植动物模型超声造影缺氧诱导因子1α 肿瘤血管生成

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荧光标记肿瘤转移体内模型的建立

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中华病理学杂志 2009年第2期38卷 110-116页

作者：冯海凉刘玉琴顾蓓卞晓翠杨振丽杨丽娟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP... 详细信息

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP和***。分别体内移植于BALB／c—nu裸鼠和C57BL／6J小鼠，观察成瘤潜伏期，绘制体内生长曲线，利用活体荧光成像系统活体连续观察GFP在体内的表达，观察肺部和淋巴结的转移情况，计算转移率。免疫组织化学检测与转移相关的分子CD44和E—cadherin在移植瘤中的表达。结果MGC-803细胞和U14细胞pEGFP—N1转染24h后的转染效率分别为30％和60％。获得了GFP（＋）的单克隆MGC-803-GFP细胞株和U14-GFP细胞株。MGC-803-GFP在BALB／c—nu裸鼠和***在C57BL／6J小鼠移植成瘤的潜伏期分别是3～5d和2～4d，成瘤率均为100％。利用活体荧光成像系统连续观察，可以清楚直观地观察表达GFP的MGC-803-GFP移植瘤在体内的生长，接种后第60天处死全部荷瘤鼠，解剖后仅有1只可见同侧腋窝下淋巴结的转移。接种U14-GFP后，分别在第28、37和52天观察了荷瘤小鼠肿瘤转移的发展过程。在U14-GFP原发瘤体积达到≥5cm^3时，肺部和淋巴结转移率分别为67％和100％。在MGC-803-GFP和U14-GFP的移植瘤中都可以检测到CD44的表达，而无E—cadherin的表达。结论成功建立了表达绿色荧光蛋白单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP，体内移植建立了荧光标记的肿瘤转移模型。该模型可用于可视化肿瘤体内的研究。

关键词：肿瘤转移绿色荧光蛋白质类模型动物

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抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

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中华病理学杂志 2010年第8期39卷 542-547页

作者：常德张建华赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽（Aβ）人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增鼠... 详细信息

目的通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽（Aβ）人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学（SP法）对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础.

关键词：阿尔茨海默病抗体,单克隆淀粉样β蛋白

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Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立

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中华肿瘤杂志 2018年第8期40卷 572-579页

作者：左春霞卞晓翠杨振丽冯海凉周芳颖刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌... 详细信息

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌细胞（GBC-SD）中，分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1，挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后，通过基因组聚合酶链反应（PCR）和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry，流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞，再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA，细胞扩增后，通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中表达Cas9-Neo的细胞35株，表达Cas9-Puro的细胞25株，表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示，同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下，同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry－EGFP＋细胞。流式细胞仪检测结果显示，mCherry－EGFP＋细胞占0.3%～93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。

关键词：肝细胞癌胆管癌胆囊肿瘤基因编辑 CRISPR/Cas9 细胞株

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GDC-0941联合AZD6244对KRAS突变非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用

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中华病理学杂志 2013年第5期42卷 330-335页

作者：李占稳杨振丽冯海凉卞晓翠刘艳艳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨选择性P13K抑制剂联合MEK抑制剂对携带KRAS／VI＇EN双突变的非小细胞肺癌细胞系NCI-H157的生长增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养NCI-H157细胞并分别用不同浓度的P13K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合... 详细信息

目的探讨选择性P13K抑制剂联合MEK抑制剂对携带KRAS／VI＇EN双突变的非小细胞肺癌细胞系NCI-H157的生长增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养NCI-H157细胞并分别用不同浓度的P13K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用，四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步观察对细胞生长增殖的影响。根据观察结果确定联合给药的浓度。然后分为无药对照组、P13K抑制剂单独用药组（GDC-0941，0．5和5．0μmol／L）、联合I组（0．5μmol／LAZD6244＋0．5μmol／LGDC-0941）及联合Ⅱ组（5．0μmol／LAZD6244＋5．0μmol／LGDC-0941）。细胞经过不同的作用后，MTT法绘制增殖抑制曲线；平板集落形成法检测集落形成能力的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Westernblot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。结果抑制剂单独作用于NCI-H157细胞可抑制其生长增殖。联合用药组与P13K抑制剂单独用药组相比，细胞的生长增殖抑制作用增强，联合I组表现为两药协同作用，联合Ⅱ组表现为两药相加作用；集落形成能力下降[（77．20±1．54）个／孔比（61．50±2．12）个／孔。P〈0．01]和[（51．004-4．00）个／孔比（22．50±3．53）个／孔，P〈0．01]；凋亡率增加[（18．30±0．82）％比（21．32±0．56）％，P〈0．01]和[（27．14±1．58）％比（42．45±4．42）％，P〈0．01]；细胞周期发生改变，联合用药组G0／G1期细胞增加，S期细胞减少（P〈0．05）。Westernblot显示，联合用药组与P13K单独用药组相比，eyelinD1、eyelinB1表达量减少，p21表达量和PARP剪切增加，bel-2／bax的比值下降。结论P13K抑制（AZD6244）可协同MEK抑制（GDC-0941）诱导NCI-H157细胞发生生长增殖抑制和凋亡，但联合用药效果受到药物剂量的影响。

关键词：癌非小细胞肺肿瘤细胞培养的协同用药

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