检索结果-内蒙古大学图书馆

稳定敲除Mcart⁃1下调RAW264.7巨噬细胞增殖能力和氧化磷酸化水平

基础医学与临床 2023年第4期43卷 568-575页

作者：赵永晶仇佳星张迪雅郭泓江王钰铖鞠瑞郭磊中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、药理学系北京100005

目的基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞,并挑选单克隆细胞:qPCR和Western blot检测Cas9表... 详细信息

目的基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞,并挑选单克隆细胞:qPCR和Western blot检测Cas9表达水平和Mcart-1敲除效果;单细胞测序分析突变位点;细胞能量代谢分析仪Seahorse检测细胞耗氧速率(OCR)和能量代谢表型;试剂盒测定细胞内总ATP含量;细胞计数仪计数和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色检测细胞增殖。结果成功构建Mcart-1稳定敲除的RAW264.7细胞株(记为Mcart-1^(-/-)-RAW264.7);该细胞株中Mcart-1发生移码突变;与野生型RAW264.7细胞系(记为RAW264.7)相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞氧气消耗速率(OCR)下降,胞外酸化速率(ECAR)升高;与RAW264.7细胞相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞内总ATP含量下降(P<0.05),线粒体ATP产生速率下降(P<0.01),而糖酵解ATP产生速率升高(P<0.01);与RAW264.7细胞相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞增殖能力下降(P<0.001)。结论稳定敲除Mcart-1后RAW264.7细胞增殖能力和氧化磷酸化水平均下降。该细胞株可作为探索肿瘤微环境细胞功能的重要工具。

关键词： CRISPR/Cas9 巨噬细胞 Mcart-1 代谢表型

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面部精细结构解剖在注射美容操作培训中的意义

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中国美容整形外科杂志 2024年第11期35卷 676-679页

作者：张艺璇孙怡馨陈震王乃利杜奉舟王炳寒黄久佐俞楠泽龙笑中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院整形外科北京100032 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005

面部注射美容作为整形美容外科的重要项目之一,目前缺乏国家规定的规范操作培训。北京协和医院整形外科与北京协和医学院解剖学系合作,将面部精细结构解剖引入注射美容操作培训。在培训中,特别关注面部脂肪垫与肌肉层次,以及神经血管分... 详细信息

面部注射美容作为整形美容外科的重要项目之一,目前缺乏国家规定的规范操作培训。北京协和医院整形外科与北京协和医学院解剖学系合作,将面部精细结构解剖引入注射美容操作培训。在培训中,特别关注面部脂肪垫与肌肉层次,以及神经血管分布,从而加强对注射技术的理解,提高操作有效性和安全性,以及减少术后并发症,并最终提升患者满意度。另外,通过该形式的培训,年轻医师能够在提高临床参与度的同时拓展科研道路。

关键词：面部注射美容整形外科面部解剖

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基于医疗大数据开展药品上市后监测与评价研究的偏倚及其控制

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中国药物警戒 2022年第3期19卷 239-243页

作者：王丽王晓墨杨晨露中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学和卫生统计学系北京100005

目的介绍国内外基于医疗大数据库开展上市后药品监测与评价研究的现状、存在的偏倚及其可能的控制方法,为我国药品风险监测与管理提供参考。方法系统总结欧美发达国家基于医疗大数据开展药品上市后监测与评价的具体实践,分析我国存在的... 详细信息

目的介绍国内外基于医疗大数据库开展上市后药品监测与评价研究的现状、存在的偏倚及其可能的控制方法,为我国药品风险监测与管理提供参考。方法系统总结欧美发达国家基于医疗大数据开展药品上市后监测与评价的具体实践,分析我国存在的差距;评价在研究设计、数据收集与标准化、统计分析等方面存在的问题及可以改进的方法;探讨我国目前面临的机遇与挑战。结果与结论欧美国家已经基于医疗大数据建立了高效、可持续的药品上市后监测警戒系统;充分考虑并控制研究设计、实施和统计分析中的潜在偏倚是确定药品与不良反应因果关系的前提;应借鉴欧美先进经验,完善和整合现有医疗大数据,开展药物流行病学方法学研究。

关键词：医疗大数据药品上市后监测选择偏倚信息偏倚混杂药物流行病学

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ATF6调控生殖相关基因HSPA1L表达的分子机制

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基础医学与临床 2024年第1期44卷 37-42页

作者：汪媛媛朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的探究内质网应激活化转录因子6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制。方法在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6过表达质粒,RT-qPCR和Western blot验证过表达效率;利用雄性ATF6敲除小鼠... 详细信息

目的探究内质网应激活化转录因子6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制。方法在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6过表达质粒,RT-qPCR和Western blot验证过表达效率;利用雄性ATF6敲除小鼠睾丸组织转录物组测序信息,筛选ATF6下游5个生殖相关基因;双荧光素酶报告基因实验选择启动子活性较高的下游基因并检测过表达ATF6对其启动子活性的影响;通过gene-regulation预测ATF6和下游基因启动子可能的结合位点;RT-qPCR和Western blot检测在HEK-293T细胞中过表达ATF6对于下游基因表达的影响;利用凝胶迁移实验(EMSA)确定ATF6与下游基因启动子是否结合。结果转染后HEK-293T细胞中ATF6的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平明显升高。转录物组测序及双荧光素酶报告基因实验筛选出ATF6下游的生殖相关基因HSPA1L。ATF6能够促进HSPA1L的截短启动子活性(P<0.001)。过表达ATF6后,HSPA1L的表达量明显升高(P<0.001)。差异均有统计学意义。ATF6蛋白能与HSPA1L的启动子DNA序列aagtcgtcac相结合。结论内质网应激的关键分子ATF6通过结合生殖相关基因HSPA1L的启动子调控后者表达水平,这将为预防或治疗与内质网应激(ERS)有关的男性不育的深入研究奠定基础。

关键词：活化转录因子6 热休克蛋白A1样蛋白男性生殖基因调控

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XRCC6调节RYBP表达的分子机制与功能

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医学研究杂志 2024年第12期53卷 31-36页

作者：刘薇佳李唐嫒陈修远夏婉娉陈等中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系 100005

目的研究X-射线修复交叉互补蛋白6(X-ray repair cross complementing 6,XRCC6)结合和下调RING1和YY1结合蛋白(ring1 and YY1 binding protein,RYBP)表达的分子机制与功能。方法采用蛋白质免疫共沉淀和免疫荧光方法分析XRCC6与RYBP之间... 详细信息

目的研究X-射线修复交叉互补蛋白6(X-ray repair cross complementing 6,XRCC6)结合和下调RING1和YY1结合蛋白(ring1 and YY1 binding protein,RYBP)表达的分子机制与功能。方法采用蛋白质免疫共沉淀和免疫荧光方法分析XRCC6与RYBP之间的相互作用;采用Western blot法检测XRCC6对RYBP表达水平的影响;采用Western blot法和蛋白质免疫共沉淀法检验XRCC6对RYBP蛋白稳定性的调节作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测XRCC6是否通过RYBP调节基因表达。结果内源性RYBP与XRCC6之间存在相互作用;XRCC6负性调节RYBP蛋白水平;过表达XRCC6促进RYBP的多聚泛素化和蛋白酶体降解,显著缩短其半衰期;XRCC6负调节H2AK119Ub1,通过调节RYBP抑制下游基因的表达。结论XRCC6结合并通过蛋白酶体途径下调RYBP表达,进而调节RYBP下游基因的表达。

关键词： XRCC6 RYBP 蛋白质相互作用蛋白酶体途径基因表达调节

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鼻窦炎-中耳炎-双肺弥漫支气管扩张

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中华结核和呼吸杂志 2022年第11期45卷 1117-1120页

作者：周王继赵新月刘雅萍郑姝颖徐凯峰田欣伦中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院呼吸与危重症医学科疑难重症及罕见病国家重点试验室北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学遗传学系北京100005 北京大学人民医院电镜室北京100044

原发性纤毛运动障碍(PCD)是一种罕见的常染色体隐性或X连锁相关的双等位基因变异遗传病,以纤毛运动障碍为特征。典型表现包括支气管扩张、分泌性中耳炎、鼻窦炎、内脏反位和不孕不育等,常因临床表现相似需与囊性纤维化(CF)鉴别。本文介... 详细信息

原发性纤毛运动障碍(PCD)是一种罕见的常染色体隐性或X连锁相关的双等位基因变异遗传病,以纤毛运动障碍为特征。典型表现包括支气管扩张、分泌性中耳炎、鼻窦炎、内脏反位和不孕不育等,常因临床表现相似需与囊性纤维化(CF)鉴别。本文介绍1例幼年起反复咳嗽、咳痰伴发热的青少年女性,有分泌性中耳炎、鼻窦炎病史,曾考虑诊断CF。后经基因测序发现PCD相关致病基因复合杂合变异,结合临床表现、影像学特点,最终诊断为PCD。

关键词：支气管扩张鼻窦炎青少年女性常染色体隐性囊性纤维化不孕不育分泌性中耳炎内脏反位

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基于直接TaqMan-PCR的无创检测脂质代谢相关SNP基因分型技术

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基础医学与临床 2024年第6期44卷 858-865页

作者：孙元宏谢吕范利华郑直中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的建立一种基于直接TaqMan-PCR的无创多重单核苷酸多态性分型技术用于高通量检测与脂质代谢相关的rs688和rs964184位点,以满足风险人群快速筛查的需求。方法采用提取的DNA对设计的TaqMan探针进行PCR退火延伸温度和扩增程序的优化;将... 详细信息

目的建立一种基于直接TaqMan-PCR的无创多重单核苷酸多态性分型技术用于高通量检测与脂质代谢相关的rs688和rs964184位点,以满足风险人群快速筛查的需求。方法采用提取的DNA对设计的TaqMan探针进行PCR退火延伸温度和扩增程序的优化;将口腔拭子放入样品处理液后进行短暂震荡和离心,取少量上清进行直接qPCR扩增分析;探索探针冻融稳定性和样品保存时间对分型结果的影响。结果本方法仅需对口腔拭子样本简单处理后即可进行qPCR分析,并且可在室温情况下保存4 d。优化后的方法能够较好地区分rs688和rs964184位点的野生纯合子、突变纯合子及杂合子。结论建立了一种快速便捷、高通量、低成本的SNP分型新技术,为大规模筛查携带易感基因的风险人群提供了高效且准确的新方法。

关键词：直接PCR 核酸提取 SNP基因分型高通量

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RNA结合蛋白RBPMS调控急性髓系白血病细胞系THP-1增殖与迁移

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基础医学与临床 2024年第5期44卷 619-625页

作者：赵羚延何浏马艳妮余佳中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(RBPMS)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中RBPMS的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测RBPMS过表达效率;... 详细信息

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(RBPMS)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中RBPMS的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测RBPMS过表达效率;通过高通量测序检测RBPMS过表达后对THP-1细胞转录组的影响。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测RBPMS过表达对白血病细胞增殖以及迁移能力的影响。结果RBPMS在携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病干细胞中异常低表达。RBPMS过表达后THP-1细胞的增殖和迁移能力显著降低(P<0.0001,P<0.05)。结论RBPMS可以抑制携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系的细胞增殖与迁移。

关键词： RBPMS MLL-AF9 急性髓系白血病急性髓系白血病细胞系(THP-1)

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肺循环血流动力学参数对急性冠状动脉综合征患者预后的预测价值

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中华医学杂志 2022年第38期102卷 3012-3018页

作者：全睿琳黄石安庞玲品罗鹏钱钰玲陈小曦单广良何建国中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心血管内科北京100037 广东医科大学附属医院心血管内科湛江524002 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学与卫生统计学系北京100005

目的探讨肺循环血流动力参数对急性冠状动脉综合征(ACS)患者预后的预测价值。方法连续纳入左心疾病相关性肺动脉高压多中心前瞻性登记注册数据库2013年1月至2016年11月住院期间接受冠状动脉造影及左、右心导管术的ACS患者,以全因死亡作... 详细信息

目的探讨肺循环血流动力参数对急性冠状动脉综合征(ACS)患者预后的预测价值。方法连续纳入左心疾病相关性肺动脉高压多中心前瞻性登记注册数据库2013年1月至2016年11月住院期间接受冠状动脉造影及左、右心导管术的ACS患者,以全因死亡作为主要研究终点,采用Lasso回归筛选具有预测价值的肺血流动力学参数,并将参数纳入全球ACS事件注册(GRACE)评分中分析,比较纳入前后模型的预后预测能力。结果共纳入251例患者,年龄(63.7±11.5)岁,其中男198例(78.9%),女53例(21.1%),中位随访34.7个月。右心导管术所测平均肺动脉压(mPAP,HR=1.068,95%CI:1.015~1.123)、肺动脉收缩压(sPAP,HR=1.033,95%CI:1.002~1.065)和舒张压梯度(DPG,HR=1.094,95%CI:1.008~1.187)是ACS患者预后的预测因素(均P<0.05)。251例患者的中位GRACE评分为123分,预测全因死亡的C指数为0.703(95%CI:0.615~0.791)。在GRACE风险评分的基础上分别加上mPAP或DPG后,模型预测全因死亡的C指数分别提高至0.715(95%CI:0.629~0.801)和0.711(95%CI:0.625~0.797)。比较纳入mPAP或DPG前后的模型,综合判别改善指数分别为4.3%(95%CI:0.2%~13.5%,P=0.030)和3.0%(95%CI:0.2%~11.1%,P=0.020)。结论肺血流动力学参数对ACS患者的预后具有预测价值,可提高现有ACS风险评估模型对患者预后的预测能力。

关键词：急性冠状动脉综合征右心导管术肺血流动力学预后队列研究

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沙门氏菌感染巨噬细胞的动态转录物组分析

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基础医学与临床 2024年第6期44卷 779-785页

作者：宋博渊吴雪丽李雪媛王莉莎陈阳中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的本文研究了巨噬细胞RAW 264.7感染鼠伤寒沙门氏菌SL1344后在分子水平上发生的时序变化,旨在全面了解感染期间的动态转录物图谱。方法使用鼠伤寒沙门氏菌SL1344感染巨噬细胞RAW 264.7,分别在0 h、8 h和16 h收集细胞样本进行转录物组... 详细信息

目的本文研究了巨噬细胞RAW 264.7感染鼠伤寒沙门氏菌SL1344后在分子水平上发生的时序变化,旨在全面了解感染期间的动态转录物图谱。方法使用鼠伤寒沙门氏菌SL1344感染巨噬细胞RAW 264.7,分别在0 h、8 h和16 h收集细胞样本进行转录物组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)。通过对转录物组数据进行上下游分析,包括差异基因表达、聚类和功能注释,再结合分子网络研究,来阐明巨噬细胞信号通路的变化。结果感染的巨噬细胞呈现出明显的形态和转录水平变化。差异基因分析确定了显著的上调和下调模式。聚类揭示了六个基因簇,涉及多种信号通路,包括免疫反应、膜转运和脂质代谢等。结论巨噬细胞对沙门氏菌感染表现出动态响应,具有明显的时序基因表达模式。免疫反应、膜转运和脂质代谢通路的协同激活暗示了巨噬细胞对外源感染的多层次细胞适应性,为了解巨噬细胞响应沙门氏菌感染的分子机制提供了重要见解。

关键词：巨噬细胞感染模型免疫反应转录物组时序分析

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