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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：李一叶李涛路金芝陈伟京王欣肖卫纯卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

颗粒酶B(Granzyme B,GrB)虽然是CTL和NK细胞等发挥清除感染病原体和恶性转化细胞等免疫功能的主要效应分子,且具有从多种途径来诱导细胞发生caspase依赖和非依赖凋亡的能力,但因缺乏受体,它通常须在穿孔素的协助下才能发挥作用. 促... 详细信息

颗粒酶B(Granzyme B,GrB)虽然是CTL和NK细胞等发挥清除感染病原体和恶性转化细胞等免疫功能的主要效应分子,且具有从多种途径来诱导细胞发生caspase依赖和非依赖凋亡的能力,但因缺乏受体,它通常须在穿孔素的协助下才能发挥作用. 促性腺激素释放激素(GnRH)的受体(GnRHR)在多数源于性激素应答器官的肿瘤和部分源于非性激素应答器官的肿瘤中都有高表达,而在正常情况下该受体则主要局限于受下丘脑一垂体一性腺轴调节的组织,因此,该受体是一种理想的靶向抗肿瘤药物的攻击靶点.

关键词：颗粒酶B 靶向构建抗肿瘤活性

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基因工程包涵体中活性蛋白质的非变性萃取

基因工程包涵体中活性蛋白质的非变性萃取

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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：王欣路金芝陈伟京李涛卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多效性细胞因子,具有多种生物学活性,包括细胞毒活性和促进T细胞生长活性.本研究中XE-TNFαm是一种TNFα突变衍生物,即XE27dN7TNFα.天然的TNFα是一种含有157个氨基酸的非糖基化蛋白,热稳定性好,是相对分... 详细信息

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多效性细胞因子,具有多种生物学活性,包括细胞毒活性和促进T细胞生长活性.本研究中XE-TNFαm是一种TNFα突变衍生物,即XE27dN7TNFα.天然的TNFα是一种含有157个氨基酸的非糖基化蛋白,热稳定性好,是相对分子量为34~40 kDa的紧密三体,三体分子是其活性形式.

关键词：基因工程包涵体活性蛋白质非变性萃取

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异源毒素蛋白质治疗白血病的新策略

异源毒素蛋白质治疗白血病的新策略

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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：王湛李涛路金芝陈伟京王欣肖卫纯卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

本研究旨在探索一条新的途径,以运用人体异源毒素蛋白质靶向杀灭白血病细胞,避免其免疫原性,且使毒副作用最小化. 虽然源于动物、植物和微生物的具有抗肿瘤活性的蛋白质或多肽毒素有千种之多,且人们一直在采用基因工程等方法来研制... 详细信息

本研究旨在探索一条新的途径,以运用人体异源毒素蛋白质靶向杀灭白血病细胞,避免其免疫原性,且使毒副作用最小化. 虽然源于动物、植物和微生物的具有抗肿瘤活性的蛋白质或多肽毒素有千种之多,且人们一直在采用基因工程等方法来研制以这类毒素作为效应域的靶向融合蛋白,如由绿脓杆菌毒素PE或商陆毒素PAP等作为效应域,以TGF、IL-2或GnRH等作为靶向域的TGF-PE40、IL-2-PE40和GnRH-PAP等,但这类靶向融合蛋白至今未能成功用于临床.究其原因,主要在于这些异源毒素对于人体来说都具有极强的免疫原性,所致高水平的中和抗体一会使药物在重复使用时失效,二会导致病人发生过敏反应、甚至休克与死亡,且对肝脏或其他器官有严重的毒副作用.

关键词：异源毒素蛋白质白血病

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HIV-1 AE重组型疫苗构建及免疫原性研究

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中华疾病控制杂志 2010年第9期14卷 831-835页

作者：张聪优万延民仇超黄杨阮力许雪梅徐建青中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理与结构生物学系北京100073 复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508

目的利用AE亚型的膜蛋白,研发抗HI V-1 AE重组型的疫苗并进行免疫原性评价。方法构建表达中国流行株97CNGX2F(HI V-1 AE2F)包膜蛋白gp140的重组痘苗病毒rVVT140AE。使用表达gp140的DNA疫苗和rVVT140AE用初免-加强方式免疫小鼠。免疫结... 详细信息

目的利用AE亚型的膜蛋白,研发抗HI V-1 AE重组型的疫苗并进行免疫原性评价。方法构建表达中国流行株97CNGX2F(HI V-1 AE2F)包膜蛋白gp140的重组痘苗病毒rVVT140AE。使用表达gp140的DNA疫苗和rVVT140AE用初免-加强方式免疫小鼠。免疫结束后第2周处死小鼠,分别检测特异性抗体滴度和特异性T细胞反应。结果本疫苗所活化的特异性抗体滴度在3 200和51 200之间,几何平均值为11 143;总T细胞免疫反应强度为(1 918±442)SFCs/106脾细胞,其中针对env1、env2、env3、env4肽池的免疫反应强度分别为(1 280±330)SFCs/106脾细胞,(66±16)SFCs/106脾细胞,(163±34)SFCs/106脾细胞和(409±96)SFCs/106脾细胞,均显著高于空载体对照组(<10 SFCs/106脾细胞)。结论本实验构建的HI V-1 AE2F株包膜蛋白gp140重组痘苗病毒疫苗可作为针对我国HI V-1流行株的候选疫苗免疫原。

关键词： HIV疫苗包膜蛋白疫苗,合成

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高效液相色谱法测定燕麦麸皮芦丁的含量

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亚太传统医药 2010年第10期6卷 40-41页

作者：张维库续洁琨赵莹杜冠华中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所国家药物筛选中心北京100050 北京中医药大学基础医学院北京100029

目的:建立燕麦麸皮中芦丁的含量测定方法。方法:燕麦麸皮经甲醇提取,提取物用甲醇溶解,定容,HPLC分析条件为流动相甲醇-0.4%磷酸(45:55),流速1.0mL/min,柱温30°C,360nm波长下检测样品芦丁的含量。结果:线性方程为Y=0.0007X-0.0029,... 详细信息

目的:建立燕麦麸皮中芦丁的含量测定方法。方法:燕麦麸皮经甲醇提取,提取物用甲醇溶解,定容,HPLC分析条件为流动相甲醇-0.4%磷酸(45:55),流速1.0mL/min,柱温30°C,360nm波长下检测样品芦丁的含量。结果:线性方程为Y=0.0007X-0.0029,r=0.9997,线性范围0.025～0.125μg,平均回收率99.58%,RSD为1.32%。结论:本方法简单、快捷,重复性良好,可用于燕麦麸皮中芦丁含量的质量控制。

关键词：燕麦燕麦麸皮芦丁

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丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT2的体外激酶活性分析

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医学分子生物学杂志 2010年第3期7卷 206-210页

作者：王娟关洪斌闫月敏石秉炀杨奔薛征董文吉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞生物学系北京市100005 山东大学威海分校海洋学院山东省威海市264209

目的建立蛋白激酶AKT2体外磷酸化检测体系.方法构建携带AKT2 cDNA编码区的pLNCX2逆转录病毒重组载体,包装重组病毒,转导293A细胞,G418筛选得到稳定表达组成型活化的AKT2细胞株,应用免疫沉淀获得蛋白激AKT2;将核基质结合蛋白SATB1的1～... 详细信息

目的建立蛋白激酶AKT2体外磷酸化检测体系.方法构建携带AKT2 cDNA编码区的pLNCX2逆转录病毒重组载体,包装重组病毒,转导293A细胞,G418筛选得到稳定表达组成型活化的AKT2细胞株,应用免疫沉淀获得蛋白激AKT2;将核基质结合蛋白SATB1的1～204的氨基酸序列及其47位丝氨酸的突变体S47A、S47D,分别与GST基因融合表达载体pGEX4T-1进行重组,经测序鉴定后转化大肠埃希菌BL-21,IPTG诱导表达经亲和纯化得到GST-SATB1 1-204、GST-SATB1 1-204 S47A和GST-SATB1 1-204 S47D融合蛋白;利用免疫沉淀的AKT2磷酸化GST-SATB1融合蛋白,应用免疫印迹检测其是否被磷酸化.结果细胞表达的蛋白激酶AKT2能高效的将野生型SATB1 1-204 磷酸化,而不能磷酸化其两种突变体.结论成功建立了一个蛋白激酶体外磷酸化系统.

关键词：核基质结合蛋白SATB1 蛋白激酶AKT2 体外液酶活性分析

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中国最常见的两种神经肌肉病的产前诊断方案的优化

中国最常见的两种神经肌肉病的产前诊断方案的优化

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中国妇儿健康发展促进高峰论坛

作者：黄尚志中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院 WHO 遗传病社区控制合作中心北京协和医院产前诊断中心

北京协和医学院开展遗传病产前诊断已经有20多年的经历，随着学科的进步，产前诊断的工作量日渐增加，2009年提供单基因病产前诊断186例，检出受累胎儿39例，其中杜氏肌营养不良症(DMD)72例、脊髓性肌萎缩(SMA)53例，居于产前诊断病种... 详细信息

北京协和医学院开展遗传病产前诊断已经有20多年的经历，随着学科的进步，产前诊断的工作量日渐增加，2009年提供单基因病产前诊断186例，检出受累胎儿39例，其中杜氏肌营养不良症(DMD)72例、脊髓性肌萎缩(SMA)53例，居于产前诊断病种的首位。本文介绍了杜氏肌营养不良症和脊髓性肌萎缩中国最常见的两种神经肌肉病的产前诊断方案的优化。

关键词：神经肌肉病产前诊断杜氏肌营养不良脊髓性肌萎缩 MLPA分析

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胆固醇酯转运蛋白基因TaqⅠB多态性与蒙古族原发性高血压的相关性

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基础医学与临床 2010年第7期30卷 677-682页

作者：陶晓明李国江侯淑琴萧占森佟伟军刘永跃吴刚张永红邱长春中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市房山区第一医院北京102400 通辽市卫生防疫站内蒙古通辽028000 哈尔滨医科大学公共卫生学院流行病学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的分析胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqⅠB多态性与蒙古族人群原发性高血压(EH)的关系。方法从内蒙古自治区通辽市蒙古族健康体检人群随机抽取1 819例进行病例-对照研究,其中高血压组840例,正常血压组979例。用多聚酶链式反应/限制性... 详细信息

目的分析胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqⅠB多态性与蒙古族人群原发性高血压(EH)的关系。方法从内蒙古自治区通辽市蒙古族健康体检人群随机抽取1 819例进行病例-对照研究,其中高血压组840例,正常血压组979例。用多聚酶链式反应/限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及直接测序方法鉴定CETP基因的TaqⅠB多态性位点基因型。结果 TaqⅠB位点GG、GA、AA基因型和G/A等位基因频率分布在整个人群、男性组和女性组中均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。无论在整体人群还是按性别分组的亚群中,原发性高血压组CETP基因TaqⅠB位点GG、GA、AA基因型和G/A等位基因频率分布和对照组无差异。在男性组中,与携带CETP基因TaqⅠB位点GG基因型的个体相比,AA型个体的高密度脂蛋白胆固醇水平显著升高,总胆固醇和三酰甘油水平显著降低(P<0.05)。结论 CETP基因TaqⅠB多态性不是原发性高血压的直接危险因素,但可影响血脂水平,可能间接参与原发性高血压的发生。

关键词：蒙古族原发性高血压胆固醇酯转运蛋白 TaqⅠB基因多态性

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人TSLC1基因核心启动子的克隆和鉴定

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基础医学与临床 2010年第4期30卷 406-410页

作者：高静申林明树红北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所消化肿瘤内科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 卫生部北京医院呼吸科北京100730

目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细... 详细信息

目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细胞,检测细胞裂解液中的双荧光素酶活性,确定TSLC1基因的核心启动子区。结果在人TSLC1基因启动子区的分段克隆中,ATG上游-68～-329 bp片段在A549及NCI-H446细胞中均具有很强的启动活性,对TSLC1的转录起重要作用。结论人TSLC1基因翻译起始位点ATG上游-68～-329 bp区域可能为基因的核心启动子区。

关键词： TSLC1 核心启动子克隆鉴定

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肠道病毒EV71感染对T细胞免疫功能影响的研究

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医学研究杂志 2010年第8期39卷 50-53页

作者：杜伯雨白璐沈岩缪时英王琳芳国家医学分子生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京市疾病预防控制中心北京100005

目的探讨肠道病毒EV71感染对T淋巴细胞系Jurkat细胞免疫功能的影响。方法首先,用RT-PCR和免疫荧光的方法检测EV71能否感染Jurkat细胞,其次用Annexin V-FITC试剂检测EV71感染后的Jurkat细胞凋亡的情况,最后用ELISA的方法分析感染后的Jur... 详细信息

目的探讨肠道病毒EV71感染对T淋巴细胞系Jurkat细胞免疫功能的影响。方法首先,用RT-PCR和免疫荧光的方法检测EV71能否感染Jurkat细胞,其次用Annexin V-FITC试剂检测EV71感染后的Jurkat细胞凋亡的情况,最后用ELISA的方法分析感染后的Jurkat细胞分泌细胞因子的情况。结果 EV71能够感染Jurkat细胞,并能够引起Jurkat细胞的凋亡,同时EV71感染还能导致Jurkat细胞分泌细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-6和IL-10的能力下降。结论 EV71病毒感染对机体免疫功能的影响是多方面的,它不但能够诱导T细胞的凋亡,还能引起T细胞分泌细胞因子的能力降低,从而在数量和功能上影响参与免疫应答的T淋巴细胞。

关键词： EV71 T细胞免疫力

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