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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 669-673,795-796页

作者：阴彬陈涛高静袁建刚彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活... 详细信息

目的在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响。利用不同培养密度的U251细胞,对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察,并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达。结果在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中,恢复NECL1的表达后,肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制。NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势,星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调。结论神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子,对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用,同时,NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能。

关键词：神经胶质瘤细胞系U251 NECL1 转移侵袭星形胶质细胞

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亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ的下调机制

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 686-691页

作者：李竹石杨洋许彩民中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ(COX Ⅳ)表达的变化情况及其机制和意义。方法用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX Ⅳ蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理... 详细信息

目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ(COX Ⅳ)表达的变化情况及其机制和意义。方法用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX Ⅳ蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化以及caspase-3的激活。caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化。瞬时转染干扰NB4细胞中COX Ⅳ表达后,流式细胞术检测细胞凋亡。结果亚硒酸钠诱导NB4细胞COX Ⅳ蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化。活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调与caspase-3激活。caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调。干扰COX Ⅳ表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加。结论在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX Ⅳ在蛋白水平显著下调。活性氧介导COX Ⅳ下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX Ⅳ表达下调,抑制COX Ⅳ能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性。

关键词：凋亡细胞色素c氧化酶活性氧

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胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 735-739,801页

作者：韩建军黄秉仁王欣马晓骊陈虹中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿... 详细信息

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。

关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白-6 核定位核定位顺序非胰岛素样生长因子依赖的生物学活性

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靶向性抗肿瘤融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶磷酸化的影响

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 674-678,797-798页

作者：王存琳陈虹马晓骊王欣黄秉仁中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-M... 详细信息

目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-MB-231和BGC823细胞中的转运和代谢特点,Western blot检测融合蛋白引起的细胞内ERK磷酸化水平的改变。结果融合蛋白可在细胞内累积,向细胞核周围聚集,并与细胞早期内体和晚期溶酶体共定位;融合蛋白能快速触发细胞内ERK发生磷酸化,磷酸化水平在10 min时最强,之后逐渐回落至刺激前水平,活化ERK的能力较表皮生长因子弱。结论融合蛋白EGF-E4orf4在细胞内经内体-溶酶体途径发生缓慢降解;在MDA-MB-231和BGC823细胞中,融合蛋白的作用特点存在明显差异,可能是导致融合蛋白对二者抑瘤率不同的原因之一。

关键词：融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白内体-溶酶体途径胞外信号调节激酶

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黑龙江省血脂异常人群相关因素调查分析

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中国动脉硬化杂志 2009年第11期17卷 950-953页

作者：白伟黄付敏斯琴祖淑玉韩少梅徐成丽朱广瑾中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京市100005

目的研究黑龙江省血脂异常人群的分布特点及相关因素的调查分析,为血脂异常的防治提供科学依据。方法抽取黑龙江省哈尔滨市、牡丹江市、海林市不同年龄和职业的城乡居民3 481人（年龄2085岁,男性1509人,女性1 972人）,进行体质检查和问... 详细信息

目的研究黑龙江省血脂异常人群的分布特点及相关因素的调查分析,为血脂异常的防治提供科学依据。方法抽取黑龙江省哈尔滨市、牡丹江市、海林市不同年龄和职业的城乡居民3 481人（年龄2085岁,男性1509人,女性1 972人）,进行体质检查和问卷调查,并采集空腹静脉血进行检测。包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白及血糖。根据诊断标准筛查出血脂异常人群。结果检出血脂异常1 681人,检出率为48.3%,男性检出率54.5%,女性检出率43.6%;除20岁、40岁、50岁年龄组的高总胆固醇血症和高低密度脂蛋白血症外,其余血脂异常发生率在不同年龄、不同性别间均有显著性差异;非条件Logistic回归分析显示,有统计学意义的血脂异常的危险因素有年龄（OR=1.771）、性别（OR=1.384）、体质指数（OR=1.666）、空腹血糖（OR=1.919）、饮酒（OR=1.277）、吸烟（OR=1.515）、舒张压（OR=1.529）、腰围（OR=1.283）及腰臀比（OR=1.858）,而体育锻炼（OR=0.802）是血脂异常的保护因素。结论对居民血脂异常的预防及干预是十分必要的,采取控制体重、血压、戒烟戒酒、加强锻炼、科学饮食等关键性措施,对预防和降低血脂异常的患病率有积极作用。

关键词：总胆固醇甘油三酯高密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白血脂异常

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四川省汉族与藏族人群亚健康状态现患率和症状数比较

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中华医学杂志 2009年第38期89卷 2671-2674页

作者：徐涛韩少梅刘军延朱广瑾毛萌中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病-统计学系 100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理生理学系 100005 首都儿科研究所流行病室四川大学华西第二医院华西妇产儿童医院儿科

目的探讨四川省汉族和藏族人群亚健康状态现患率和症状数的差异。方法采用分层二阶段整群抽样在四川省进行汉族和藏族人群亚健康状态的横断面调查，采用陈青山等制定的亚健康量表进行亚健康状态评定，分别用亚健康状态现患率、症状数及... 详细信息

目的探讨四川省汉族和藏族人群亚健康状态现患率和症状数的差异。方法采用分层二阶段整群抽样在四川省进行汉族和藏族人群亚健康状态的横断面调查，采用陈青山等制定的亚健康量表进行亚健康状态评定，分别用亚健康状态现患率、症状数及各维度的现患率反映2组人群的亚健康状况。用多因素Logistic回归模型和负二项回归模型控制年龄、性别、婚姻状况、职业、吸烟、饮酒、体育锻炼、超重和高血压等因素的混杂影响，进行2组人群亚健康状态现患率和症状数的比较分析。结果汉族亚健康现患率为52．3％（3611／6911），藏族亚健康现患率为57．9％（1034／1787）。症状数在3个及5—14个的受试者所占比例在藏族受试者中均高于汉族。Logistic回归模型结果显示藏族受试者处于亚健康状态的风险是汉族受试者的1．2840倍（95％CI为1．1460—1．4390）。负二项回归模型显示藏族人群亚健康症状数明显多于汉族人群，藏族受试者的亚健康患病风险为汉族的1．2908倍（95％CI为1．1820～1．4096）。藏族人群各亚健康维度的现患率均显著高于汉族人群，尤其是免疫力和躯体症状维度。结论生活在高海拔地区的藏族人群也有较高的亚健康状态患病情况，值得医学研究人员的进一步关注。

关键词：藏族流行病学方法 Logistic模型亚健康状态

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HPV 18 L1病毒样颗粒的表达纯化及其豚鼠抗血清制备

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基础医学与临床 2009年第10期29卷 1039-1043页

作者：彭清林张婷范东升郑伟谢喜秀许于飞许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理与结构生物学系北京100005

目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体... 详细信息

目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV18L1VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清。结果HPV18L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV18L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50nm的VLP,豚鼠免疫血清中HPV18L1VLP特异性抗体滴度达5.12×105。结论HPV18L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV18L1VLP疫苗的进一步研究打下基础。

关键词：人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒杆状病毒表达系统抗血清

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三省一市2478名成年人体重指数与深吸气量的关系

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中国医学科学院学报 2009年第5期31卷 631-633页

作者：冯逵陈莉韩少梅朱广瑾中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生理与病理生理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所流行病学与统计学系北京100005

深吸气量(inspiratory capacity,IC)为平静呼气末用力吸气所能吸入的最大气量,由潮气量和补吸气量组成,是慢呼吸的吸气容量指标,与吸气肌力量大小、肺弹性和气道通畅都有关系。[第一段]

关键词：体重指数深吸气量肺功能低体重超重肥胖

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甘肃地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

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中华医学遗传学杂志 2009年第4期26卷 419-422页

作者：闫有圣王铮郝胜菊孟岩郑雷黄尚志中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院 WHO遗传病社区控制合作中心北京100005 甘肃省妇幼保健院

目的了解甘肃地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因突变。方法应用PCR产物直接测序检测了29例苯丙酮尿症患儿PAH基因第3，5，6，7，11，12外显子及其两侧旁侧内含子。结果在58个等位基因中检测到了4... 详细信息

目的了解甘肃地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因突变。方法应用PCR产物直接测序检测了29例苯丙酮尿症患儿PAH基因第3，5，6，7，11，12外显子及其两侧旁侧内含子。结果在58个等位基因中检测到了45个突变等位基因，检出率达77．6％（45／58），鉴定了18种突变，其中突变基因（IVS124-5G〉C）国内外未见报道。甘肃地区常见的突变是R243Q（22．7％），V399V（12．1％），EX6—96A〉G（5．2％），R413P（5．2％），IVS4—1G〉A（5．2％），较常见的突变有Y356X（3．4％），R111X（3．4％），INS7＋2T〉A（3．4％）。结论甘肃地区PAH基因突变与中国其他地区相似，但部分突变基因比例存在明显的差异。

关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶 DNA测序突变检测

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人源DTD蛋白激活人神经母细胞瘤细胞非选择性阳离子通道

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基础医学与临床 2009年第2期29卷 139-143页

作者：朱镜羲阳洪波于晓霞郝维鲍光宏曹济民龚燕华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理与病理生理学系北京100005

目的探讨人源D-酪氨酰tRNA脱酰基酶(h-DTD)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的非选择性阳离子通道通透性的影响。方法利用毛细管电泳法检测原核表达纯化的h-DTD的体外脱酰酶活性;用W estern b lot法分析h-DTD在各组织和细胞中的表达谱;用膜... 详细信息

目的探讨人源D-酪氨酰tRNA脱酰基酶(h-DTD)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的非选择性阳离子通道通透性的影响。方法利用毛细管电泳法检测原核表达纯化的h-DTD的体外脱酰酶活性;用W estern b lot法分析h-DTD在各组织和细胞中的表达谱;用膜片钳技术检测SH-SY5Y细胞全细胞电位。结果h-DTD具有体外脱酰酶活性,并在脑组织中高表达。在h-DTD蛋白存在的情况下,游离的D-氨基酸及L谷-氨酸能激活谷氨酸敏感的非选择性阳离子通道,导致细胞膜通透性增加。结论在神经系统,h-DTD蛋白可能通过维持游离D-氨基酸的浓度来影响非选择性阳离子通道的功能。

关键词：人源D-酪氨酰tRNA脱酰基酶表达谱非选择性阳离子通道

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