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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 692-695页

作者：戴津泼张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定... 详细信息

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对Ngn1mRNA表达的影响。结果成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性;降低Setd7抑制Ngn1mRNA表达。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录。

关键词： Setd7 神经分化 Ngn1

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过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1,能量代谢的共激活因子

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 773-777页

作者：王瑞常永生方福德中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

转录共激活因子过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1(PGC1)家族是一类特异性存在于高能量代谢组织器官的因子,它们通过对转录因子的辅助作用促进下游基因的表达,从而调节糖异生、脂肪酸氧化、脂蛋白的合成与分泌、线粒体生物合成... 详细信息

转录共激活因子过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1(PGC1)家族是一类特异性存在于高能量代谢组织器官的因子,它们通过对转录因子的辅助作用促进下游基因的表达,从而调节糖异生、脂肪酸氧化、脂蛋白的合成与分泌、线粒体生物合成及氧化磷酸化解耦联等。PGC1蛋白序列无DNA结合结构域,通过与转录因子的相互作用完成对基因的表达调控。机体对PGC1的活性调节可以通过转录水平或蛋白磷酸化、乙酰化/去乙酰化、甲基化、泛素化等多种共价化学修饰完成。PGC1的表达失调与糖尿病、肥胖、高血脂症、动脉硬化、脑神经元坏死性疾病等有密切关系。

关键词：过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1 能量代谢活性调控

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甲基化作用与肿瘤

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 786-790页

作者：邵迪崔安芳朱鏐娈乔爱君孔星星刘晓军常永生方福德中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

对表观遗传学进行的研究表明,表观事件中甲基化的发生与肿瘤的发生发展密切相关。表观遗传调控主要通过DNA甲基化和组蛋白甲基化修饰控制细胞的增殖和分化、维持机体的稳定,但甲基化的异常改变常导致肿瘤的发生、发展。本文主要综述有... 详细信息

对表观遗传学进行的研究表明,表观事件中甲基化的发生与肿瘤的发生发展密切相关。表观遗传调控主要通过DNA甲基化和组蛋白甲基化修饰控制细胞的增殖和分化、维持机体的稳定,但甲基化的异常改变常导致肿瘤的发生、发展。本文主要综述有关肿瘤基因组和组蛋白甲基化的理论研究、检测方法及甲基化在临床上作为生物学标记和药物靶点的应用。

关键词：甲基化肿瘤

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热激诱导Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子基因和人白细胞抗原的表达

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 746-750页

作者：晏丽程谟斌张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Wester... 详细信息

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Western blot检测热激和IFN-γ作用前后Jurkat细胞中CⅡTA蛋白的表达变化。采用流式细胞仪荧光分析热激前后Jurkat细胞表面HLA-DR的表达。结果在Jurkat细胞中,热激可诱导CⅡTAmRNA和蛋白的表达,而IFN-γ处理后无明显变化。与正常Jurkat细胞相比,热激后HLA-DR在Jurkat细胞表面的抗原浓度明显增加(P<0.01)。结论热诱导Jurkat细胞中CⅡTA和HLA-DR先后表达增高。提示热激可能在免疫基因表达缺陷的细胞中,重建相关基因的功能,为肿瘤热疗提供新的依据。

关键词：热激 Jurkat细胞主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子人白细胞抗原

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PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 756-759页

作者：翟妞张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;... 详细信息

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5。结论PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用。

关键词： SWI/SNF染色质重塑复合物 SNF5 PIH1D1 蛋白酶体依赖降解

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中药筋脉通对高糖培养雪旺细胞增殖及NGF表达的影响

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中华中医药杂志 2009年第8期24卷 1019-1022页

作者：孙连庆梁晓春张宏吴群励屈岭赵丽顾蓓北京协和医学院中国医学科学院北京协和医院北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京100005

目的:从细胞生物学水平观察筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞(SC)的增殖及其分泌神经生长因子(NGF)的影响。方法:体外培养大鼠SC,采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清,观察筋脉通含药血清对高糖培养SC增殖活性的影响,检测筋脉通含药... 详细信息

目的:从细胞生物学水平观察筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞(SC)的增殖及其分泌神经生长因子(NGF)的影响。方法:体外培养大鼠SC,采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清,观察筋脉通含药血清对高糖培养SC增殖活性的影响,检测筋脉通含药血清对高糖培养SC分泌NGF的影响。结果:高糖培养条件下,SC增殖及分泌NGF的能力明显减弱,筋脉通含药血清可增强高糖培养SC的增殖能力,上调NGF的表达水平,作用与神经妥乐平含药血清相似。结论:中药筋脉通可有效促进高糖环境培养的SC的增殖能力及其分泌NGF的水平。

关键词：糖尿病周围神经病变神经生长因子雪旺细胞 MTT比色法共聚焦激光扫描显微镜筋脉通

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MR1 siRNA抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖

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基础医学与临床 2009年第1期29卷 1-5页

作者：王金华边春景赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影... 详细信息

目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影响。流式细胞术检测BEL-7402细胞周期,用细胞同步化的方法,即与G2期阻滞药物噻氨酯哒唑(nocodazole)联合应用,以间接反映MR1 siRNA对肿瘤细胞周期的影响。Western blot法检测Cyclin D1蛋白。结果(1)300 nmol/LMR1 siRNA处理BEL-7402细胞24 h后,MR1基因的mRNA水平明显降低。(2)经siRNA处理后,BEL-7402细胞存活细胞数明显下降,细胞生长速度明显减慢,集落形成率显著下降,Cyclin D1表达水平明显降低。(3)MR1 siRNA与nocodazole联合处理BEL-7402细胞后,G2期细胞比例显著减少,而G1期细胞明显增多。结论MR1基因与人肝癌BEL-7402细胞增殖相关,抑制MR1表达,能够引起细胞的增殖抑制,其作用机制与诱导细胞的G1期阻滞有关。

关键词：肌纤基因调节因子 siRNA 细胞周期细胞增殖 BEL-7402细胞

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钙离子和细胞凋亡及药物调控

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中国全科医学 2009年第12期12卷 1126-1128页

作者：薛全福王振纲中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理与病理生理学系北京市100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京市100005

细胞凋亡不足或过度能引发诸多疾病。细胞内Ca2+过度升高造成的Ca2+超载是细胞凋亡的重要成因。本文针对Ca2+超载引起细胞凋亡的机制,提出与Ca2+有关的药物调控细胞凋亡的作用靶点,以利于调控药物的研发和应用。

关键词：钙代谢障碍细胞凋亡线粒体

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全反式维甲酸对SH-SY5Y细胞全基因组启动子区组蛋白H3乙酰化修饰的影响

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科学通报 2009年第1期54卷 46-52页

作者：方洪波米洋张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3... 详细信息

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3乙酰化修饰状态进行了高通量检测和分析.首先分别制备RA处理组和对照组的标记探针,然后将人类基因组启动子芯片与探针进行杂交,获得RA诱导SH-SY5Y细胞分化早期全基因组启动子区H3组蛋白乙酰化的数据.结果分析显示,RA处理导致597个基因启动子的乙酰化程度显著升高、647个基因降低.本研究结果显示上述技术的高效与可行,并为深入研究RA诱导分化相关基因的表观遗传调控机制奠定了基础.

关键词：全反式维甲酸(RA) 染色质免疫沉淀启动子芯片细胞分化组蛋白乙酰化

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山西农村地区妇女HPV-6、11、16、18的血清流行病学研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第8期29卷 701-705页

作者：王建炳胡尚英王鹤陈汶马俊飞苏采峰李志霞武燕萍乔友林中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学教研室北京100005 中国医学科学院肿瘤研究所流行病学室北京100021 山西省襄垣县妇幼保健院

目的研究中国农村地区妇女HPV-6、11、16、18型抗体分布情况，为将来HPV疫苗在中国的应用提供一定的依据。方法采用横断面研究的方法，调查山西襄垣县年龄为19～54岁妇女884名。问卷收集人口统计学指标、疾病史、月经史等信息。荧光检... 详细信息

目的研究中国农村地区妇女HPV-6、11、16、18型抗体分布情况，为将来HPV疫苗在中国的应用提供一定的依据。方法采用横断面研究的方法，调查山西襄垣县年龄为19～54岁妇女884名。问卷收集人口统计学指标、疾病史、月经史等信息。荧光检测法检测静脉血HPV-6、11、16、18血清型抗体。结果山西农村地区妇女HPV-6、11、16、18病毒样颗粒（VLP）抗体阳性率分别为7．35％、2．26％、6．90％、1．58％。任意一种HPV-6、11、16、18VLP抗体阳性率为14．93％。子宫颈病变正常、宫颈上皮内瘤变（CIN）1级及CIN2＋妇女的HPV．16VLP抗体阳性率分别为5．36％、14．63％、50．00％（P〈0．0001）。性伴侣数为1〉2的妇女HPV-6／11和HPV-16／18VLP抗体阳性率均高于性伴侣数为1组，且差异有统计学意义（P〈0．05）。HPV-6／11、16／18VIJP抗体与首次性行为年龄、吸烟、教育程度和避孕套使用情况均无统计学关联。结论HPV-6、16型在山西襄垣被调查妇女中感染较普遍，CIN2及以上病变的患者中有一半感染过HPV-16型。HPV-16VLP抗体阳性率与子宫颈病变程度有关，且随病变程度的加重而增加。

关键词：人乳头瘤病毒抗体血清流行病学荧光检测法

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