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基础医学与临床 2022年第5期42卷 782-787页

作者：李钊璇罗云萍陈翀中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的构建一种不需要人工重建就可以保留免疫微环境中各类免疫细胞的小鼠来源的肿瘤类器官的气液交互法。方法利用气液交互法建立并培养小鼠来源的肿瘤类器官;用苏木精-伊红(HE)染色分析肿瘤类器官的组织学形态;用流式细胞测量术分析肿... 详细信息

目的构建一种不需要人工重建就可以保留免疫微环境中各类免疫细胞的小鼠来源的肿瘤类器官的气液交互法。方法利用气液交互法建立并培养小鼠来源的肿瘤类器官;用苏木精-伊红(HE)染色分析肿瘤类器官的组织学形态;用流式细胞测量术分析肿瘤类器官中各类免疫细胞的比例;用白细胞介素-2(IL-2)维持肿瘤类器官中T淋巴细胞的数量。结果小鼠CT26结肠癌、Lewis肺癌和MC38结肠癌这3种肿瘤类型的肿瘤类器官都分别保留了原始肿瘤的组织形态;与小鼠CT26结肠癌原始肿瘤组织相比,肿瘤类器官中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和B细胞的比例基本保持不变,巨噬细胞比例从66.7%减少到44.3%,树突状细胞的比例从66.5%减少到7.25%;与小鼠Lewis肺癌原始肿瘤组织相比,肿瘤类器官中CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和B细胞的比例基本保持不变,CD8^(+)T细胞的比例从5.6%减少到1.95%;与小鼠MC38结肠癌肿瘤组织相比,肿瘤类器官中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和B细胞的比例基本保持不变,巨噬细胞的比例从33.5%减少到17%,树突状细胞的比例从46.8%减少到1.2%;IL-2可以增加3种肿瘤类型来源的肿瘤类器官中肿瘤浸润T淋巴细胞的数量。结论小鼠肿瘤类器官保留了原始肿瘤的组织学形态,一定程度上保留了各类免疫细胞。IL-2可以增加T淋巴细胞的数量。

关键词：气液交互法肿瘤类器官免疫微环境免疫细胞白细胞介素-2(IL-2)

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针对SARS-CoV2不同突变株广谱特异性中和抗体的筛选与鉴定

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基础医学与临床 2022年第5期42卷 752-757页

作者：佟可心蔡孟华何维张建民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的筛选对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV2)不同突变株具有广谱特异性的、高亲和性中和抗体,并进行功能验证。方法用脂质体包被的SARS-CoV2刺突蛋白(S蛋白)mRNA疫苗对Balb/c小鼠进行2次免疫,测定小鼠血清中特异性抗体含量,选取... 详细信息

目的筛选对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV2)不同突变株具有广谱特异性的、高亲和性中和抗体,并进行功能验证。方法用脂质体包被的SARS-CoV2刺突蛋白(S蛋白)mRNA疫苗对Balb/c小鼠进行2次免疫,测定小鼠血清中特异性抗体含量,选取抗体含量较高的小鼠进行冲击免疫;取冲击免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用有限稀释法和ELISA筛选出上清能特异性结合S蛋白及S蛋白受体结合域(RBD)的杂交瘤细胞克隆;纯化单克隆抗体,进行假病毒中和实验,验证抗体中和活性;并通过ELISA筛选对4种SARS-CoV2突变株的重组RBD蛋白具有广谱结合特性的单克隆抗体。结果经2次免疫,检测到高剂量组4号小鼠血清中针对S蛋白的抗体含量最高;经过冲击免疫、细胞融合后,共筛选到12株与S蛋白具有结合活性的杂交瘤细胞,其中9株特异性结合RBD蛋白;假病毒中和实验结果显示,41、46和47这3株抗体在体外有显著的中和病毒活性(P<0.05);与另2株抗体相比,46号抗体显示出与SARS-CoV24种包括Omicron在内的突变株的RBD蛋白的广谱结合活性。结论46号抗体是对SARS-CoV2四种不同突变株具有广谱特异性的中和抗体,有望进一步进行人源化改造,用于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV2) 杂交瘤细胞广谱中和抗体

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小鼠乳腺癌肺特异性转移细胞亚系的建立和验证

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基础医学与临床 2022年第7期42卷 1083-1091页

作者：王子辕段昭君罗云萍中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的筛选和建立乳腺癌的自发性高器官特异性转移亚系,验证所建立的细胞亚系的细胞特征和肺转移器官特异性。方法利用实验性肺转移模型,尾静脉注射小鼠乳腺癌细胞系4T07,回收肺转移灶细胞,体外扩增培养后,再重复2次,获得高肺转移乳腺癌细... 详细信息

目的筛选和建立乳腺癌的自发性高器官特异性转移亚系,验证所建立的细胞亚系的细胞特征和肺转移器官特异性。方法利用实验性肺转移模型,尾静脉注射小鼠乳腺癌细胞系4T07,回收肺转移灶细胞,体外扩增培养后,再重复2次,获得高肺转移乳腺癌细胞;再利用小鼠乳腺脂肪垫原位接种构建自发肺转移模型;在此之间,结合肺转移灶体外培养扩增,重复3次,获得肺高转移细胞亚系及自发性肺转移模型;转染筛选稳定表达荧光素酶的高转移细胞亚系,显微镜下观察细胞形态学变化;小动物活体成像和HE染色来检测肺特异性转移和体外迁移能力的变化;流式细胞测量术分析原发灶、转移灶及脾脏中免疫细胞的变化。细胞划痕实验和Transwell小室法检测细胞亚系的体外迁移能力的变化。结果成功建立了小鼠乳腺癌4T07肺特异性转移细胞亚系4T07LuM。将稳定表达荧光素酶的4T07LuM细胞接种于小鼠乳腺脂肪垫后,小动物活体成像结果发现荧光信号主要集中于肺器官,HE切片可见肺脏中的肿瘤转移灶。4T07LuM相较于亲本细胞4T07体外迁移能力有明显提升,48 h的划痕闭合程度是亲本细胞的1.64倍(P<0.001),12 h时迁移过小室的细胞数是亲本细胞的1.91倍(P<0.001)。4T07LuM细胞荷瘤鼠的脾脏、原位灶和转移器官的免疫细胞比例发生显著变化,体内免疫微环境均更倾向于免疫抑制状态。结论实验性转移和自发性转移的连续筛选联合体外培养扩增可以建立高器官特异性转移的细胞亚系。

关键词：乳腺癌肺转移器官特异性自发转移模型

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老年人粪或尿失禁发生风险的预测模型研究

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中华老年医学杂志 2023年第6期42卷 726-732页

作者：李琳陈飞龙李晓艳高逸远朱思霖刁茜叶子王宁徐涛国家卫生健康委科学技术研究所临床医学中心北京100081 中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础学院流行病与卫生统计学系北京100005 国家卫生健康委科学技术研究所基层健康质量创新发展研究中心北京100081 华中师范大学数学与统计学院武汉430079

目的构建老年人粪/尿失禁发生风险的预测模型并进行验证。方法采用2018年进行的第7次中国健康长寿纵向调查的横断面调查数据, 以问卷中"您是否能控制大小便"为主要效应指标, 利用受试者工作特征曲线(ROC)寻找以小腿围预测老... 详细信息

目的构建老年人粪/尿失禁发生风险的预测模型并进行验证。方法采用2018年进行的第7次中国健康长寿纵向调查的横断面调查数据, 以问卷中"您是否能控制大小便"为主要效应指标, 利用受试者工作特征曲线(ROC)寻找以小腿围预测老年人粪/尿失禁的最佳截点, 并通过单因素Logistic回归探讨老年人粪/尿失禁的相关影响因素。采用随机抽样的方法抽取70%的调查数据作为训练集, 剩余30%的调查数据作为测试集, 在训练集中用多因素Logistic回归分析方法建立一个囊括所有预测因子的预测模型, 绘制列线图, 并利用测试集对模型的预测效能进行验证。结果多因素Logistic回归分析结果显示, 年龄、较小的小腿围(男性<28.5 cm、女性<26.5 cm)、无法连续步行1 km、无法提起5 kg重物、无法连续做3次蹲起、日常活动能力受限和有泌尿系统、神经系统和脑血管疾病史是老年人粪/尿失禁的危险因素(均P<0.05), 女性、较好的社会经济状况以及正常的体质指数(BMI)是粪/尿失禁的保护因素。使用上述12个因素构建中国老年人粪/尿失禁状态的Logistic回归预测模型, 该模型一致性指数(C-index)值为0.907, 表明该模型有较好的预测能力。训练集和测试集预测模型校正曲线的吻合度均较好, 整体样本、训练集、测试集ROC曲线下面积(AUC)分别为0.906(95%CI:0.896~0.917)、0.907(95%CI:0.894~0.921)、0.910(95%CI:0.892~0.928), 表明该模型预测能力较高, 区分度良好。结论年龄、性别、小腿围、连续步行1 km、提起5 kg重物、连续做3次蹲起、日常活动能力、泌尿系统、神经系统和脑血管疾病史、社会经济状况和BMI是老年人粪/尿失禁的影响因素, 基于上述指标构建的列线图对老年人粪/尿失禁有较好的预测效能。

关键词：尿失禁大便失禁预测列线图

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小鼠乳腺癌干细胞免疫相关分子表达和免疫浸润的分析

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基础医学与临床 2022年第6期42卷 876-882页

作者：李昱阳李钊璇罗云萍陈翀中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的分析小鼠乳腺癌干细胞(BCSCs)中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞(CSCs);用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达;用小... 详细信息

目的分析小鼠乳腺癌干细胞(BCSCs)中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞(CSCs);用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达;用小鼠乳腺癌原位移植瘤模型和流式细胞测量术分别检测脾脏和肿瘤组织中各类免疫细胞的比例。结果用成球培养的方法可以成功富集小鼠乳腺癌干细胞4T1和4T07;与贴壁培养的肿瘤细胞相比,小鼠BCSCs中免疫检查点和抗原递呈相关基因的表达有明显差异(P<0.05)。体内的结果表明,与贴壁肿瘤细胞来源的肿瘤组织相比,肿瘤干细胞来源的肿瘤组织中浸润更多的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞(P<0.05),但是CD11b^(+)F4/80^(+)的巨噬细胞浸润更少(P<0.05)。结论小鼠BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达有改变,且在体内可招募更多的T细胞到肿瘤组织中去。

关键词：肿瘤干细胞免疫检查点抗原递呈肿瘤免疫逃逸肿瘤免疫浸润

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骶神经刺激治疗排便失禁的机制研究进展

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中华结直肠疾病电子杂志 2024年第5期13卷 417-422页

作者：王梦琪刘恒昌陈海鹏刘佳中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京100700 国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院结直肠外科北京100021

骶神经刺激(SNS)是指通过短频脉冲刺激电流作用于特定骶神经的一种物理治疗方法。目前SNS在临床上可用于治疗多种肠道疾病以及结直肠术后导致的排便失禁,但其作用机制尚不完全明确。本文就SNS目前治疗排便失禁中已探明的作用机制做一概... 详细信息

骶神经刺激(SNS)是指通过短频脉冲刺激电流作用于特定骶神经的一种物理治疗方法。目前SNS在临床上可用于治疗多种肠道疾病以及结直肠术后导致的排便失禁,但其作用机制尚不完全明确。本文就SNS目前治疗排便失禁中已探明的作用机制做一概述,为临床治疗提供新思路。

关键词：骶神经刺激神经调节排便失禁机制

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基础医学整合课程内分泌系统教学改革

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1171-1174页

作者：李伟朱惠娟夏维波朱蕾中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院内分泌科国家卫生健康委员会内分泌重点实验室北京100730 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院药理系北京100005

北京协和医学院招收的4+4临床医学专业试点班,具有学生专业背景多样,医学课程学习时间短等特点。在试点班中设立“器官-系统-功能”(OSF)基础医学整合课程,是一种全新的尝试。内分泌系统教学可通过模块化面向对象动态学习环境(Moodle)... 详细信息

北京协和医学院招收的4+4临床医学专业试点班,具有学生专业背景多样,医学课程学习时间短等特点。在试点班中设立“器官-系统-功能”(OSF)基础医学整合课程,是一种全新的尝试。内分泌系统教学可通过模块化面向对象动态学习环境(Moodle)平台建设自主学习环境,推行集体备课和试讲制度,授课中结合医学史、医学科学研究导论等内容,积极探索适合4+4试点班学生特点的教学模式。通过问卷调查发现,80.0%的学生对教学效果总体满意,45.0%的学生认为应该加强基础知识内容学习,55.0%的学生认为有必要增加与专业内容相关的人文知识。

关键词：内分泌系统整合课程 4+4临床医学专业试点班

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PABPC1对人单核白血病细胞系THP-1翻译活性的影响

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基础医学与临床 2023年第5期43卷 751-754页

作者：翟雪莹王芳余佳中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究细胞质多聚腺苷酸结合蛋白-1(PABPC1)对人单核细胞白血病细胞系THP-1翻译活性的影响。方法在THP-1细胞中转染shPABPC1,Western blot验证敲低效率,多聚核糖体分析技术检测细胞翻译活性变化。结果转染后THP-1细胞中PABPC1表达被抑... 详细信息

目的研究细胞质多聚腺苷酸结合蛋白-1(PABPC1)对人单核细胞白血病细胞系THP-1翻译活性的影响。方法在THP-1细胞中转染shPABPC1,Western blot验证敲低效率,多聚核糖体分析技术检测细胞翻译活性变化。结果转染后THP-1细胞中PABPC1表达被抑制(P<0.001);与对照组相比,敲低PABPC1组的翻译活性减弱。结论敲低PABPC1可抑制THP-1细胞翻译活性,PABPC1可能成为治疗急性髓系白血病(AML)的潜在靶点。

关键词：急性髓系白血病(AML) 细胞质多聚腺苷酸(A)结合蛋白-1 翻译

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AHR抑制剂CH223191提高辐照小鼠骨髓移植效果

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基础医学与临床 2023年第2期43卷 233-240页

作者：庞瑞洋周力吕家迪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究骨髓移植过程中辐射诱导的旁观者效应对供体骨髓细胞的影响以及芳香烃受体(AHR)抑制剂CH223191对供体骨髓细胞的保护作用。方法将小鼠分为9 Gy辐照组和12 Gy辐照组,不同辐照剂量辐射后移植相同数量供体骨髓细胞,流式细胞术检测... 详细信息

目的探究骨髓移植过程中辐射诱导的旁观者效应对供体骨髓细胞的影响以及芳香烃受体(AHR)抑制剂CH223191对供体骨髓细胞的保护作用。方法将小鼠分为9 Gy辐照组和12 Gy辐照组,不同辐照剂量辐射后移植相同数量供体骨髓细胞,流式细胞术检测外周血细胞总数、外周血供体细胞嵌合率及数量;ELISA检测未辐照小鼠和辐照小鼠血清活性氧(ROS)水平;将供体骨髓细胞分为对照组、9 Gy辐照组和12 Gy辐照组体外培养,分别加入未辐照小鼠血清、9 Gy和12 Gy辐照小鼠血清处理,ATP活力测定法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测Cyp1a1与Cyp1b1的mRNA表达;将辐照血清处理后的骨髓细胞分为CH223191治疗组与对照组,加入CH223191处理后,比较细胞活力、细胞凋亡、细胞内ROS水平,RT-qPCR检测Cyp1a1与Cyp1b1的mRNA表达;将骨髓移植小鼠分为CH223191治疗组和对照组,治疗组腹腔注射CH223191,记录小鼠体质量、外周血供体细胞嵌合率及数量、骨髓内供体细胞嵌合率及数量。结果小鼠经9 Gy或12 Gy辐照后,12 Gy辐照组外周血细胞总数少于9Gy辐照组(P<0.05),而骨髓移植后外周血供体细胞嵌合率无明显差异,并且12 Gy辐照组外周血供体细胞数明显少于9Gy辐照组(P<0.05);小鼠经辐照后,血清内ROS水平上升(P<0.01);经辐照小鼠血清处理的供体骨髓细胞活力降低,凋亡比例升高(均P<0.01),辐照小鼠血清处理的供体骨髓细胞中Cyp1a1与Cyp1b1 mRNA均升高(P<0.05);辐照小鼠血清处理的供体骨髓细胞加入CH223191后,Cyp1a1与Cyp1b1 mRNA水平降低(P<0.05),细胞活力升高,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡比例减少(均P<0.01);骨髓移植后,CH223191治疗组小鼠体质量相对于对照组减轻较少,外周血供体细胞嵌合率与细胞数高于对照组,骨髓内供体细胞比例与数量均高于对照组(均P<0.05)。结论CH223191通过抑制AHR激活,减少辐射诱导的旁观者效应对移植骨髓细胞的损伤,提升小鼠骨髓移植效果。

关键词：骨髓移植辐射诱导的旁观者效应芳香烃受体活性氧

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粉尘接触人数与原煤产量相关关系的多水平模型构建

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中国职业医学 2022年第4期49卷 387-392页

作者：王宇彤李欣欣王丹胡伟江万霞中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院流行病与卫生统计学系北京100005 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所北京100050

目的基于“职业病危害项目申报系统”(以下简称“申报系统”)的数据,构建在省级行政区水平估算煤炭开采和洗选业企业职业性接触粉尘工人数量(以下简称“接尘人数”)的方法。方法采用典型抽样方法,以申报系统中2020年山西省、内蒙古自治... 详细信息

目的基于“职业病危害项目申报系统”(以下简称“申报系统”)的数据,构建在省级行政区水平估算煤炭开采和洗选业企业职业性接触粉尘工人数量(以下简称“接尘人数”)的方法。方法采用典型抽样方法,以申报系统中2020年山西省、内蒙古自治区、陕西省、新疆维吾尔自治区1808家煤炭企业为研究对象。基于其中1217家单纯采煤或采煤和洗选一体化企业的数据,建立接尘人数与原煤产量相关关系的多水平模型,分析两者关系;并基于企业规模构成比设置两种场景,估算漏报的接尘人数,以校正各省级行政区接尘人数。结果2020年申报系统的数据显示,原煤产量与接尘人数由多到少的排序均为山西省、内蒙古自治区、陕西省和新疆维吾尔自治区,共有接尘人数1002842人。本研究采用原煤产量、企业规模及其交互项建立的随机截距模型拟合效果相对最优,-2倍的对数似然值为2005.96,赤池信息准则值为2017.95。影响接尘人数的因素为原煤产量及其与企业规模的交互项,原煤产量每变化1.00%,小微企业的接尘人数变化0.62%,大中企业较小微的接尘人数多变化0.13%。在两种假设的场景下,4个省级行政区的校正总接尘人数分别为1125515和1089321人。结论以4个省级行政区的原煤产量和企业规模及其交互项数据构建的多水平模型能够相对准确地估计接尘人数,可较好地校正各省级行政区的接尘人数。

关键词：多水平模型模型构建粉尘煤炭工人企业校正估计

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