目的研究T淋巴细胞白血病中酰基甘油激酶(acylglycerol kinase,AGK)上游转录机制,构建AGK基因启动子不同截短片段的重组质粒并检测其转录活性。方法利用TIMER2.0、The Human Protein Atlas、Gene Expression Profiling Interactive Anal...
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目的研究T淋巴细胞白血病中酰基甘油激酶(acylglycerol kinase,AGK)上游转录机制,构建AGK基因启动子不同截短片段的重组质粒并检测其转录活性。方法利用TIMER2.0、The Human Protein Atlas、Gene Expression Profiling Interactive Analysis等公共数据库探索AGK在白血病中的作用,以pGL4.20-pAGK promoter-luciferase全长质粒为模板,利用PCR法分别扩增AGK启动子不同长度的截短片段;将扩增片段分别插入pGL4.20-basic载体,构建AGK启动子不同截短片段重组质粒;经双酶切及序列鉴定正确后,将重组质粒电击转染至人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat中,采用双荧光素酶报告基因实验测定AGK启动子不同截短片段的双荧光素酶活性。结果AGK在多种类型肿瘤中表达上调(P<0.05),且在白血病细胞中处于较高水平。Log-rank检验结果显示AGK高表达患者的总生存期短于低表达患者(P=0.028)。JASPAR网站预测出3个评分高的转录因子TEAD与AGK的结合区域,并成功构建含AGK基因启动子不同截短片段重组质粒。双荧光素酶报告基因实验发现T淋巴细胞白血病细胞中AGK启动子转录活性在-540bp至-80 bp区域较高。结论人T淋巴细胞白血病细胞中AGK基因启动子在-540 bp至-80 bp区域的转录活性较高,可为进一步研究T淋巴细胞白血病中AGK的转录及其上游调控机制奠定基础。
目的探讨山茱萸提取物(Cornus officinalis extract,COE)对紫外线B(ultraviolet-B,UVB)辐射引起的皮肤损伤的修复作用,并探讨其潜在的作用机制。方法通过检测人角化细胞(human keratinocytes cells,Ha Ca T)中UVB诱导的基质金属蛋白酶(m...
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目的探讨山茱萸提取物(Cornus officinalis extract,COE)对紫外线B(ultraviolet-B,UVB)辐射引起的皮肤损伤的修复作用,并探讨其潜在的作用机制。方法通过检测人角化细胞(human keratinocytes cells,Ha Ca T)中UVB诱导的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及促炎细胞因子的表达,评估COE的光保护作用,并对其抗氧化酶活性及胶原蛋白含量进行评价。小鼠无毛皮肤在UVB辐射下暴露后,局部应用提取物,并测定表皮厚度、皮肤含水量及胶原mRNA的表达量。结果在UVB照射(354.128 m J/cm^(2))下,1.00mg/m L COE显著增强了抗氧化酶活性,显著降低了促炎细胞因子前列腺素E2、白细胞介素1α、白细胞介素6的表达;同时降低了MMPs的表达;胶原蛋白含量显著增加,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达量分别增加13%和75%。此外,COE能够减轻UVB辐射引起的小鼠皮肤表皮增厚及胶原蛋白的丧失。同时,COE处理使丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量降低69%,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(clutathione peroxidase,GSH-Px)活性分别升高27%和234%。对小鼠表皮m RNA表达的分析表明,用COE处理导致Mmp1a和Mmp3 mRNA表达水平降低,Col1a1和Col3a1 m RNA水平升高。结论COE能够有效改善UVB辐射引起的皮肤损伤,其作用机制可能与抗氧化酶活性的增强以及促炎细胞因子和MMPs表达的抑制密切相关。本研究旨在通过小鼠和细胞模型进一步探究山茱萸对UVB诱导的皮肤损伤的光保护潜力并阐明其潜在机制,为治疗由UVB光老化导致皮肤疾病的研究和山茱萸新药开发提供理论依据。
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