检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2018年第5期38卷 604-609页

作者：赵双周芳杨隽中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞生物系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用遗传性肺动脉高压(HPAH)患者和对照志愿者(CON)来源的诱导多能干细胞,研究其定向分化得到的内皮细胞(i PSC-ECs)表型及功能的差异,阐明骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPRII)突变引起的PAH特征性内皮紊乱病理机制。方法将CON志愿者和HPAH... 详细信息

目的利用遗传性肺动脉高压(HPAH)患者和对照志愿者(CON)来源的诱导多能干细胞,研究其定向分化得到的内皮细胞(i PSC-ECs)表型及功能的差异,阐明骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPRII)突变引起的PAH特征性内皮紊乱病理机制。方法将CON志愿者和HPAH患者的肺动脉平滑肌细胞诱导得到的i PSCs分化为ECs,通过荧光定量PCR分析i PSC-ECs分化过程中多能性和内皮相关基因的mRNA表达水平;免疫荧光鉴定i PSC-ECs表面特征分子;检测参与调控内皮-间充质转分化(Endo MT)过程的相关基因α-SMA、HMGA1、Slug和Snail1表达;比较HPAH和CON来源i PSCECs成管功能,检测血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的mRNA和蛋白表达。结果 HPAH与CON多能性基因表达趋势基本一致,而ECs相关基因的表达变化存在差异;HPAH患者来源的i PSC-ECs的α-SMA和Endo MT过程的相关基因HMGA1、Slug和Snail1表达均高于CON ECs(P<0.05);与CON相比,HPAH患者来源的i PSC-ECs成管功能存在缺陷,VEGFR2的mRNA和蛋白水平均较低,VEGF165可使其得到恢复。结论 HPAH来源的i PSC-ECs存在Endo MT现象和成管功能缺陷,HMGA1、Snail家族转录因子和VEGF通路可能参与对PAH血管重构的调控。

关键词：肺动脉高压内皮细胞内皮间质转化血管内皮细胞生长因子受体2

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利用CRISPR/CAS9技术构建QKI敲除GC1-spg细胞株及其生物学功能检测

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基础医学与临床 2018年第5期38卷 589-593页

作者：钟顺顺李凯杨阳缪时英王琳芳宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响。方法利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响。方法利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)和基因测序鉴定出GC1-spg敲除QKI细胞株;常规培养野生型和敲除细胞株,利用细胞计数检测试剂盒(CCK8)绘制增殖曲线和荧光定量PCR(q-PCR)检测减数分裂相关基因变化。结果本研究成功构建出QKI敲除GC1-spg细胞株,与对照组相比,QKI敲除细胞株的增殖明显下降(P<0.05),减数分裂相关分子标志基因c-kit、Mtl5和Hspa2表达量明显降低(P<0.05)。结论 QKI蛋白可以影响GC1-spg的增殖和分化,因此QKI蛋白可能通过影响增殖和分化而影响精子发生。

关键词： CRISPR/CAS9 GC1-spg QKI 精子发生

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ADAR1通过RNA编辑上调ZNF655表达并促进人肝癌细胞系HepG2中HBV复制

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基础医学与临床 2018年第3期38卷 312-316页

作者：李京源李涛朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨细胞中ADAR1对锌指蛋白ZNF655的作用及其对乙肝病毒(HBV)复制的影响。方法在人肝癌细胞系HepG2细胞中,利用桑格测序验证ZNF655 3'UTR存在ADAR1 RNA编辑位点;RT-qPCR检测ADAR1和ZNF655 mRNA的表达及HBV total RNA和HBV 3.5 k... 详细信息

目的探讨细胞中ADAR1对锌指蛋白ZNF655的作用及其对乙肝病毒(HBV)复制的影响。方法在人肝癌细胞系HepG2细胞中,利用桑格测序验证ZNF655 3'UTR存在ADAR1 RNA编辑位点;RT-qPCR检测ADAR1和ZNF655 mRNA的表达及HBV total RNA和HBV 3.5 kb RNA的表达;双荧光素酶报告基因检测荧光素酶的相对表达;Western blot检测ADAR1和ZNF655蛋白的表达;ELISA检测ZNF655对HBV标志物HBs Ag和HBe Ag的影响。结果 ZNF655基因3'UTR上chr7:99575277位点在DNA水平为纯合型,在RNA水平为杂合型;ZNF655基因3'UTR上chr7:99575277位点的编辑型G比正常型A的荧光素酶活性显著升高(P<0.001);在转录和翻译水平,ADAR1都显著增加了ZNF655的表达(P<0.001);ZNF655对HBV的表达起到促进的作用。结论 ADAR1通过编辑ZNF655的3'UTR上的chr7:99575277位点,使编辑位点A转换成G,上调了基因的表达,进而起到对HBV复制的促进作用。

关键词：作用于RNA的腺苷脱氨酶1 锌指蛋白655 RNA编辑乙肝病毒

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miR-207在大鼠纤维化肾组织及尿液中表达上调

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基础医学与临床 2018年第3期38卷 308-311页

作者：石变华孙佳增张尚史娟中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究miR-207在大鼠肾脏纤维化(RF)模型中的差异表达,并对其功能进行研究。方法实验组大鼠(UUO)分离并结扎右侧输尿管,假手术组只分离右侧输尿管,不结扎。Real-time PCR定量分析大鼠肾脏纤维化模型肾脏和尿液中miR-207的表达,以及瞬... 详细信息

目的研究miR-207在大鼠肾脏纤维化(RF)模型中的差异表达,并对其功能进行研究。方法实验组大鼠(UUO)分离并结扎右侧输尿管,假手术组只分离右侧输尿管,不结扎。Real-time PCR定量分析大鼠肾脏纤维化模型肾脏和尿液中miR-207的表达,以及瞬时转染miR-207 mimics和inhibitors的大鼠肾小管上皮(NRK-52E)细胞中纤维化相关基因的表达。结果大鼠肾脏纤维化模型尿液和肾脏组织中miR-207表达上调(P<0.05),miR-207能上调大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞中纤维化相关基因的表达。结论 miR-207可能在肾脏纤维化中发挥重要的作用,为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能。

关键词：肾脏纤维化 miR-207 NRK-52E

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RNA结合蛋白KSRP在急性髓系白血病(AML)M5型细胞中的功能

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 821-826页

作者：王小爽于姗何金蓉余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢... 详细信息

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢病毒传导分别抑制KSRP的内源表达或者过表达miR-129,检测细胞的增殖和凋亡。结果 KSRP在t(15;17)型急性早幼粒细胞白血病中低表达,而在混合谱系白血病(MLL)易位的急性单核细胞白血病或急性粒-单核细胞白血病中高表达。抑制内源KSRP的表达后显著抑制了THP-1细胞的增殖(P<0.01)而促进细胞凋亡(P<0.01)。过表达miR-129后促进THP-1细胞的增殖(P<0.05)。结论KSRP通过促进miR-129的加工调控AML-M5型细胞的增殖。

关键词： KSRP RNA结合蛋白 miR-129 细胞增殖急性髓系白血病

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胶质瘤中PTB调控长非编码RNA选择性剪接的筛选

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 787-792页

作者：卫群芳朱丽媛韩为彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PC... 详细信息

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PCR验证候选基因不同剪接异构体的表达及比值变化。核质分离实验鉴定长非编码RNA细胞定位。结果筛选出16条受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA,其中linc00882的不同剪接异构体的表达模式受PTB调控所产生的差异最明显。检测到linc00882定位于细胞质。结论神经胶质瘤中PTB蛋白参与长非编码RNA linc00882的选择性剪接。

关键词：选择性剪接长非编码RNA PTB 神经胶质瘤

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衰老的基础研究现状与干预策略

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蚌埠医学院学报 2018年第10期43卷 1261-1265页

作者：陈厚早刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100730

我国已进入老龄化社会,老年伴随着疾病增加严重威胁人们的健康,但是目前对于衰老的认识还处于初步阶段。衰老过程中,机体系统层面的紊乱与细胞和分子层面的失真互为因果,使得衰老的机制具有明显的复杂性。本文从系统、细胞和分子三个角... 详细信息

我国已进入老龄化社会,老年伴随着疾病增加严重威胁人们的健康,但是目前对于衰老的认识还处于初步阶段。衰老过程中,机体系统层面的紊乱与细胞和分子层面的失真互为因果,使得衰老的机制具有明显的复杂性。本文从系统、细胞和分子三个角度阐述衰老的基础研究的现状,进一步阐述衰老导致疾病过程中的内在联系以及提出潜在干预策略。因此,倡导通过健康的生活方式来控制衰老相关疾病的发生发展,探索从"分病而治"向"异病同防/治"的战略转变。

关键词：衰老系统生物学细胞生物学分子生物学

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基于转录组学分析预测潜在的γ-和β-珠蛋白基因表达调控因子

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基础医学与临床 2018年第11期38卷 1522-1525页

作者：王南宇杨科崔申申张祝琴刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的预测潜在的γ-和β-珠蛋白表达调控因子,为珠蛋白基因表达调控研究提供新的思路。方法从GEO数据库中下载γ-和β-珠蛋白基因差异表达相关的两组RNA-seq数据,利用分化各时期共同存在的不同组织来源细胞间的差异表达基因及其预测出的... 详细信息

目的预测潜在的γ-和β-珠蛋白表达调控因子,为珠蛋白基因表达调控研究提供新的思路。方法从GEO数据库中下载γ-和β-珠蛋白基因差异表达相关的两组RNA-seq数据,利用分化各时期共同存在的不同组织来源细胞间的差异表达基因及其预测出的上游调控因子,通过STRING数据库、Centiscape软件进行潜在调控因子的预测。结果除预测到BCL11A、NF-E2、YY1和GATA1等已知的γ-和β-珠蛋白基因表达调控因子外,从两组数据共同预测出14个潜在调控因子。结论分析预测出的包括MAPK1、TNF和IFNG等潜在的调控因子可能调控γ-和β-珠蛋白基因表达,需要近一步的分子生物学实验证实。

关键词：转录组学 γ-珠蛋白 β-珠蛋白调控因子

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利用CRISPR/Cas9构建R778L类型肝豆状核变性疾病小鼠模型

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基础医学与临床 2018年第12期38卷 1702-1707页

作者：朱基彦瞿思遥张祝琴刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统构建针对人肝豆状核变性R778L突变类型的R780L突变小鼠。方法通过BLAST比对人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列,证明二者保守性。通过CRISPR/Cas9系统进行小鼠受精卵显微注射,并对小鼠肝豆状核变性... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统构建针对人肝豆状核变性R778L突变类型的R780L突变小鼠。方法通过BLAST比对人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列,证明二者保守性。通过CRISPR/Cas9系统进行小鼠受精卵显微注射,并对小鼠肝豆状核变性症状进行病理和生理学检测。结果人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列高度保守。通过CRISPR/Cas9技术成功获得纯合的R780L突变小鼠,该小鼠存在明显的肝脏铜离子淤积以及血清ALT、AST的升高且未发现有可检测出的脱靶效应。结论成功利用CRISPR/Cas9介导的基因敲入系统构建了针对人肝豆状核变性R778L类型的R780L突变小鼠模型。

关键词：肝豆状核变性 CRISPR/Cas9 点突变R778L 小鼠模型

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基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建

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中国医学科学院学报 2017年第4期39卷 518-524页

作者：郭倩朱宁卜萌萌郭思超闫雪静陈倩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制... 详细信息

目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率。在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA(miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果。基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结果由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录。基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率。构建了一个容量为1.8×10~7的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结论构建了一个大容量的新型随机shRNA文库。

关键词：微小RNA 短发夹RNA 随机文库

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