检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2013年第6期33卷 694-698页

作者：赵阿妮朱丽媛吴朝刘雪梅阴彬张靖中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 河北北方学院病理及病理生理学实验室河北张家口075000

目的从EST鉴定入手利用生物信息学方法筛选验证PCBP2基因内部UC.338基因座位附近的长非编码RNA。方法首先利用生物信息学方法筛选包含内含子转录区域的ESTs,经CPC分析和统计学比较,共筛选到4个(人、鼠各两个)可能的lncRNAs,用PCR方法进... 详细信息

目的从EST鉴定入手利用生物信息学方法筛选验证PCBP2基因内部UC.338基因座位附近的长非编码RNA。方法首先利用生物信息学方法筛选包含内含子转录区域的ESTs,经CPC分析和统计学比较,共筛选到4个(人、鼠各两个)可能的lncRNAs,用PCR方法进行鉴定,克隆到pGEM-T载体测序验证,并用PCR,real-time PCR的方法检测各ESTs在人源细胞系或小鼠不同组织,小鼠发育不同时间点大脑中的表达谱。结果筛选到4个ESTs中有3个ESTs均具有一定的非编码特征,并最终测序正确:1个人源,2个鼠源,并且其中有些lncRNAs具有一定的细胞、组织特异性,有些lncRNAs具有广谱表达模式。结论使用了一种新的寻找lncRNAs的方法,从EST鉴定入手,对现有数据库进行了挖掘。找到了可能在小鼠大脑发育过程中起作用的lncRNAs。

关键词： ESTs 生物信息学分析 long noncoding RNA 筛选鉴定表达谱分析

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DNA甲基化介导的microRNA-33b下调及其在胃癌中的作用

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基础医学与临床 2013年第10期33卷 1269-1274页

作者：阴海鑫王斌王芳余佳赵浩亮山西医科大学普外科山西太原030032 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学附属山西医学科学院山西大医院普外科山西太原030032

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌... 详细信息

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌临床病理特征间的关系,随后使用组织基因组DNA快速提取试剂盒提取胃癌组织及正常人血液基因组DNA,经重亚硫酸氢盐处理后,甲基化特异性PCR法检测其上游CpG岛的甲基化程度,PCR产物经琼脂糖凝胶检测,并进行统计分析。结果 miR-33b表达下调与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无脉管转移、肿瘤分型无相关性,但与肿瘤是否发生远处转移具有相关性(P<0.05),且其低表达与上游CpG岛的甲基化沉默修饰密切相关(P<0.05)。结论 miR-33b的表达在胃癌中受甲基化调控且与胃癌远处转移相关。

关键词： miR-33b 胃癌甲基化

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慢病毒介导的稳定表达人睾丸组织泛素连接酶TRIM69基因的细胞系的建立

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医学研究杂志 2013年第11期42卷 23-26页

作者：吴为李琴山宋伟缪时英王琳芳中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将... 详细信息

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将慢病毒质粒pLenti-TRIM69或其突变体与慢病毒辅助质粒(plp1,plp2,VSVG)共转染HEK293T包装细胞,产生有活性的病毒。包装后的重组慢病毒感染HEK293细胞,Western blot检测确认TRIM69及其突变体蛋白的表达。结果经Western blot检测证实,成功建立了稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系。结论利用慢病毒成功制备稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系,这些细胞为TRIM69生物学功能的研究提供了平台。

关键词： TRIM69 慢病毒稳定细胞株

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LIN28B的研究进展

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医学分子生物学杂志 2013年第3期10卷 177-179,183页

作者：屈婷婷(综述) 张业(审阅) 沈翊琲(审阅) 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

近些年，LIN28B的相关研究工作已引起研究人员的广泛关注，并开始对LIN28B展开多方面、多层次的深入研究。文章从LIN28B的基本性质、对let-7调控机制、与癌症发生的相关机制、对发育的调控及其他相关功能等研究进行较为全面的综述。

关键词： LIN28B LIN28A let-7 癌症发育

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HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系研究

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医学研究杂志 2013年第6期42卷 20-22页

作者：宋伟狄茜缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系100005

目的确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd(ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株。应用免疫荧... 详细信息

目的确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd(ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株。应用免疫荧光实验观察外源和内源表达的HSD1与微管蛋白α-tubulin在GC-2spd(ts)或小鼠原代生精细胞中的定位分布。结果成功构建稳定表达FLAG-HSD1融合蛋白的GC-2spd(ts)细胞株。外源表达HSD1在GC-2 spd(ts)中与α-tubulin明显共定位;内源表达HSD1与α-tubulin在GC-2spd(ts)和原代小鼠生精细胞中明显共定位。结论 HSD1与微管蛋白α-tubulin在生精细胞中存在明显的共定位关系。

关键词：精子发生 HSD1 微管细胞分裂

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RYBP慢病毒表达载体的构建及对结肠癌细胞HCT116增殖的影响

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医学研究杂志 2013年第9期42卷 37-41页

作者：马雯陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室100005

目的构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响。方法用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为... 详细信息

目的构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响。方法用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为pWPI-linker。采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从肝癌SK-Hep-1细胞总RNA中扩增RYBP的全长开放阅读框序列,克隆入pWPI-linker载体中,得到pWPI-RYBP。利用人胚肾细胞HEK293T包装重组慢病毒颗粒,分析该慢病毒颗粒感染HCT116细胞的效率、RYBP蛋白的表达,用MTS方法分析RYBP过表达对HCT116细胞增殖的影响。结果用改造的pWPI-linker载体成功构建慢病毒表达载体pWPI-RYBP包装的慢病毒颗粒能高效感染HCT116细胞,表达出Flag-RYBP融合蛋白。MTS方法分析表明,RYBP的过表达抑制HCT116细胞的增殖,增殖抑制率达26.1%。结论改建的慢病毒表达载体pWPI-linker带有可供选择的多个单克隆位点和标签蛋白序列,为今后基于pWPI载体的克隆构建和表达蛋白质的分析提供了极大的便利;RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP的构建为进一步研究RYBP的生物学功能及基因治疗奠定了基础。

关键词： RYBP 慢病毒载体 HCT116 细胞增殖

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RYBP基因启动子区的甲基化水平分析

RYBP基因启动子区的甲基化水平分析

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第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：赵乔佳杰杨霞陈等陈虹黄秉仁医学分子生物学国家重点实验室基础医学研究所中国医学科学院

目的:RYBP(Ring1 and YY1 binding protein)是一个潜在的抑癌基因,其mRNA水平在肝癌组织和部分肝癌细胞系中的表达降低。由于RYBP围绕第一个外显子区的CpG含量较高,因此,本研究利用分子生物学的方法从几株肝癌细胞出发,探索RYBP表达降... 详细信息

目的:RYBP(Ring1 and YY1 binding protein)是一个潜在的抑癌基因,其mRNA水平在肝癌组织和部分肝癌细胞系中的表达降低。由于RYBP围绕第一个外显子区的CpG含量较高,因此,本研究利用分子生物学的方法从几株肝癌细胞出发,探索RYBP表达降低与其启动子区甲基化水平的关系。方法:1.提取细胞基因组DNA,用重亚硫酸盐方法将DNA中未甲基化的C转变成U;2.利用甲基化引物设计网站获得重亚硫酸测序PCR(Bisulfite-sequencing PCR,BSP)引物,以上述修饰的基因组DNA为模板,进行PCR扩增;3.对BSP扩增的PCR产物测序,根据测序结果分析RYBP启动子区中各个CpG位点的甲基化状态。结果:检测到RYBP启动予区转录起始位点上游约-600至-400区域中的部分CpG位点存在甲基化修饰,但甲基化位点数量的分布在不同RYBP表达水平的肝癌细胞间无明显差异。结论:RYBP在部分肝癌细胞系中表达水平的降低可能与其启动子区的CpG位点的甲基化修饰无关。

关键词： RYBP基因启动子甲基化

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RYBP蛋白两种核定位信号的发现

RYBP蛋白两种核定位信号的发现

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第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：谭宽陈等黄秉仁陈虹医学分子生物学国家重点实验室基础医学研究所中国医学科学院

目标:RYBP(RING1 andYY1 BindingProtein)是1999年发现的参与多梳蛋白PcG复合物组成并有转录抑制子活性的锌指结构蛋白,后续研究已经证明其能够参与个体发育及表观遗传调控,在多种肿瘤组织中的表达降低并能诱导肿瘤细胞凋亡,因此RYBP蛋... 详细信息

目标:RYBP(RING1 andYY1 BindingProtein)是1999年发现的参与多梳蛋白PcG复合物组成并有转录抑制子活性的锌指结构蛋白,后续研究已经证明其能够参与个体发育及表观遗传调控,在多种肿瘤组织中的表达降低并能诱导肿瘤细胞凋亡,因此RYBP蛋白是一种新的重要的肿瘤抑制子。之前的研究已经发现,该蛋白主要定位于细胞核,而核定位的蛋白一般具有核定位信号(NuclearLocalization Signal,NLS),本研究进一步鉴定其具有核定位功能的肽段,并确定该蛋白所含有的NLS。方法:利用RYBP的结构域和序列特征,构建不同的融合了EGFP的截短体。随后将重组载体在肿瘤细胞内表达,利用荧光共聚焦显微镜观察其荧光定位,确定具有核定位功能的区域。然后利用生物信息学软件预测该蛋白可能具有的核定位信号,结合之前的结果,构建缺失突变体,并将可能的NLS连接到胞质定位的蛋白上,观察其定位情况。结果:RYBP第6-14位以及47-56位肽段缺失导致该EGFP融合蛋白主要定位于细胞质。将这两段短肽分别连接到胞质定位蛋白,转染肿瘤细胞后发现融合蛋白主要定位于细胞核。结论:综上所述,RYBP蛋白内第6-14位以及47-56位肽段为两个NLS。

关键词： RYBP NLS

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SIRT1在血管内皮细胞中抑制PMA和Ionomycin诱导的COX-2表达

SIRT1在血管内皮细胞中抑制PMA和Ionomycin诱导的COX-2表达

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第15届中国南方国际心血管病学术会议

作者：王旭徐静贾玉艳陈厚早刘德培中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1对环氧合酶-2(COX-2)在血管内皮细胞中的表达调控及其分子机制,探讨SIRT1抑制内皮细胞炎症反应以及动脉粥样硬化(AS)发生发展的可能机制。方法本实验首先采用Real-timePCR和Western blotting的方法检... 详细信息

目的研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1对环氧合酶-2(COX-2)在血管内皮细胞中的表达调控及其分子机制,探讨SIRT1抑制内皮细胞炎症反应以及动脉粥样硬化(AS)发生发展的可能机制。方法本实验首先采用Real-timePCR和Western blotting的方法检测PMA/Ionomycin(Io)在血管内皮细胞中是否能够诱导炎症分子COX-2的表达。为了证明SIRT1在血管内皮细胞中调控COX-2的表达,我们在PMA/Io处理的内皮细胞中,过表达或干扰SIRT1,用

关键词：内皮细胞 SIRT1 COX-2 Ionomycin PMA

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RYBP蛋白两种核定位信号的发现

RYBP蛋白两种核定位信号的发现

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第八届全国医学生物化学与分子生物学、第五届全国临床应用生物化学与分子生物学、2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：谭宽陈等黄秉仁陈虹医学分子生物学国家重点实验室基础医学研究所中国医学科学院北京中国

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