检索结果-内蒙古大学图书馆

2012全国发育生物学大会

作者：孟姣邹小停张勇朱大海中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系

骨骼肌干细胞在骨骼肌损伤再生中起着十分重要的作用,而各种细胞因子和细胞间的相互作用为骨骼肌干细胞的活化、增殖、分化以及融合提供了关键的微环境。因此,研究微环境对骨骼肌干细胞功能的调控作用具有十分重要的理论意义和临床价值... 详细信息

骨骼肌干细胞在骨骼肌损伤再生中起着十分重要的作用,而各种细胞因子和细胞间的相互作用为骨骼肌干细胞的活化、增殖、分化以及融合提供了关键的微环境。因此,研究微环境对骨骼肌干细胞功能的调控作用具有十分重要的理论意义和临床价值。最近我们实验室发现了一个在转录和翻译水平都受Myostatin上调,而且在骨骼肌损伤早期高表达的泛素连接酶基因MRG(Mmyostatin Regulated Gene)。为了研究MRG在骨骼肌发育以及再生中的功能,我们建立了MRG基因敲除小鼠。利用MRG基因敲除小鼠进行的骨骼肌再生研究表明,与野生型相比MRG基因敲除小鼠骨骼肌损伤后再生速度加快。有趣的是,我们发现单个肌纤维上骨骼肌干细胞的数目在野生型和MRG基因敲除小鼠间并没有明显差异。同时,我们还发现CTX损伤2小时后MRG的表达就迅速升高。基于以上结果我们假设,MRG很可能是通过影响细胞因子的分泌从而改变骨骼肌干细胞的微环境进而影响其活化增殖和再生过程。为了验证这一假设,我们检测了损伤后血清中细胞因子的浓度变化,发现在MRG基因敲除小鼠中大部分细胞因子浓度均低于野生型小鼠,而这些细胞因子在mRNA水平的表达却没有明显差异。以上结果为我们的假设提供了部分理论依据。同时,分子机制研究表明,MRG对骨骼肌干细胞微环境的影响可能是通过泛素化它的底物Snapin来调节细胞因子的分泌来实现的。

关键词：骨骼肌干细胞细胞因子野生型 MRG 基因敲除小鼠干细胞微环境

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盲肠结扎穿孔术建立急性肺损伤小鼠模型

盲肠结扎穿孔术建立急性肺损伤小鼠模型

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第九届中青年呼吸学者论坛

作者：郭峰邹镇蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系

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Myostatin信号调节的miR-A通过调控靶基因Eya4表达促进骨骼肌干细胞激活

Myostatin信号调节的miR-A通过调控靶基因Eya4表达促进骨骼肌干细...

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2012全国发育生物学大会

作者：武日茂翟丽丽王威李婷婷于潇华李常银钟冉周玉长张勇朱大海中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系

Myostatin属于TGF-beta生长因子超家族成员之一,功能研究表明Myostatin是骨骼肌生长发育负调控因子。但是,目前对Myostatin在骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程中的功能及作用机制并不清楚。近年来的研究发现miRNA参与骨骼肌干细胞的... 详细信息

Myostatin属于TGF-beta生长因子超家族成员之一,功能研究表明Myostatin是骨骼肌生长发育负调控因子。但是,目前对Myostatin在骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程中的功能及作用机制并不清楚。近年来的研究发现miRNA参与骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程的调控。因此,我们利用Myostatin基因敲除小鼠通过miRNA芯片的分析,系统筛选了骨骼肌组织中受Myostatin信号调控的miRNAs,发现miR-A受Myostatin信号的负调控。采用C2C12细胞系的体外（In vitro）研究表明miR-A能够促进骨骼肌细胞的分化。为了进一步分析miR-A对骨骼肌干细胞功能的调控作用,我们制备了miR-A转基因小鼠。miR-A转基因鼠的骨骼肌组织发育正常,与野生型小鼠相比,miR-A转基因鼠的骨骼肌干细胞数量显著减少。采用Cardiotoxin（CTX）诱导的骨骼肌损伤-再生模型,发现骨骼肌组织损伤1.5天和3.5天后Pax7、MyoD及Pax7/MyoD的细胞数量在miR-A转基因小鼠中均高于野生型小鼠,这些数据提示miR-A能够促进骨骼肌干细胞的激活。进一步分析miR-A调控的靶基因,发现Eya4基因的3'-UTR含有miR-A的结合位点,通过报告基因分析表明miR-A可以靶向Eya4。miR-A转基因鼠骨骼肌组织中Eya4蛋白表达显著降低进一步证明miR-A可以调控Eya4基因的表达和功能。结论:总之,本研究发现Myostatin负调控的miR-A能够通过靶向Eya4基因促进骨骼肌干细胞的激活,从而促进骨骼肌再生。

关键词：骨骼肌干细胞 Myostatin miR-A 信号调节靶基因

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泛素连接酶LNX1的表达、活性测定和功能初探

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生物技术通讯 2012年第4期23卷 523-526页

作者：郭正光高友鹤中国医学科学院基础医学研究所生理学与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv1.4的泛素化作用。方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitrou... 详细信息

目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv1.4的泛素化作用。方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitroubiquitination)方法测定其泛素连接酶活性,同样用体外泛素化方法研究其对含有Kv1.4的C端的人工底物的泛素化。结果:获得了纯化的有泛素连接酶活性的重组人LNX1蛋白,重组LNX1可以在体外泛素化体系中泛素化含有Kv1.4的C端的人工底物。结论:重组人LNX1原核表达成功,具有泛素连接酶活性,并催化Kv1.4的泛素化。

关键词：泛素连接酶表达酶活性测定 LNX1 Kv1.4

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连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响

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中国计划生育学杂志 2012年第5期20卷 313-317页

作者：高小博马燕马旭彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口计生委科学技术研究所

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细... 详细信息

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细胞期的斑马鱼胚胎,通过显微镜观察斑马鱼晶状体表型,并利用全胚原位杂交技术分析过表达野生型和突变型Cx50对晶状体标志基因Cx23表达的影响。结果:与野生型胚胎相比,S258F突变型Cx50过表达引起斑马鱼胚胎白内障表型,过表达野生型Cx50也引起白内障表型,但是畸形数量明显少于突变型,野生型和突变型Cx50的过表达均下调了Cx23的表达。结论:连接蛋白Cx50S258F突变体可引起斑马鱼白内障表型,提示Cx50的S258F突变体是造成先天性白内障的原因。

关键词：先天性白内障晶状体连接蛋白 S258F 斑马鱼

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长期温和的能量限制改善C57BL/6小鼠高脂喂养后的脂代谢紊乱

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中国心血管杂志 2012年第2期17卷 124-127页

作者：李国平唐蔚青李红霞满永黎健陈保生卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨温和的能量限制对小鼠脂代谢的影响。方法给予3周龄C57BL/6小鼠高脂饮食12周后,按随机数字表法分组,对照组不限制饮食,实验组小鼠喂食对照组小鼠摄食量的85%,喂养12周后,收集小鼠血浆并冻存肝脏。抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质... 详细信息

目的探讨温和的能量限制对小鼠脂代谢的影响。方法给予3周龄C57BL/6小鼠高脂饮食12周后,按随机数字表法分组,对照组不限制饮食,实验组小鼠喂食对照组小鼠摄食量的85%,喂养12周后,收集小鼠血浆并冻存肝脏。抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量,油红O染色观察肝脏的脂质沉积;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏脂肪代谢相关基因的表达;并测定LDL、TG分泌速率和小鼠原代肝细胞脂肪酸氧化速率。结果实验组小鼠与对照组小鼠相比,在限食12周后:(1)体质量:(32.8±1.3)g比(38.9±3.5)g(P=0.007);(2)血浆TG水平:(0.26±0.01)mmol/L比(0.41±0.02)mmol/L(P=0.02),肝脏内TG含量:(435.7±26.3)μg/mg蛋白质比(812.4±38.2)μg/mg蛋白质(P=0.001);(3)实时定量聚合酶链反应结果显示,肝脏内长链脂肪酸和胆固醇合成相关基因mRNA表达水平无变化,但脂肪酸氧化基因mRNA表达水平显著增加(P=0.03)。肝脏原代细胞内脂肪酸的氧化速度增加了53.1%±7.2%(P=0.01),血浆游离脂肪酸水平:(0.41±0.04)mmol/L比(0.62±0.02)mmol/L(P=0.04);(4)肝脏中胆固醇:(85.2±9.8)μg/mg蛋白质比(169.3±13.5)μg/mg蛋白质(P=0.001),但血浆TC水平无显著改变。结论长期温和的能量限制可以有效缓解高脂饮食引起的小鼠肝脏的脂肪变性,这与肝脏中游离脂肪酸的氧化速度升高及摄取量降低密切相关;同时降低了小鼠血浆TG的水平,但没有改变血浆TC水平。

关键词：能量限制脂代谢脂肪酸氧化速率

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小鼠肝脏胰岛素受体的特异性敲除降低极低密度脂蛋白中三酰甘油分泌的研究

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心肺血管病杂志 2012年第3期31卷 320-323,344页

作者：李国平唐蔚青黎健陈保生卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室生化室北京100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的:建立肝组织特异性胰岛素受体急性缺失的动物模型,分析胰岛素信号缺失对三酰甘油代谢的影响。方法:在构建腺病毒时,利用Cre-LoxP系统机制,在Cre重组酶基因的上游插入肝组织特异性表达的白蛋白基因启动子。扩增纯化病毒,经小鼠尾静... 详细信息

目的:建立肝组织特异性胰岛素受体急性缺失的动物模型,分析胰岛素信号缺失对三酰甘油代谢的影响。方法:在构建腺病毒时,利用Cre-LoxP系统机制,在Cre重组酶基因的上游插入肝组织特异性表达的白蛋白基因启动子。扩增纯化病毒,经小鼠尾静脉注射病毒14 d后,收集小鼠血浆,测定极低密度脂蛋白三酰甘油分泌速率,抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量,用免疫印迹法分析胰岛素受体和脂代谢相关基因在肝脏内的表达。结果:成功构建了肝脏特异性胰岛素受体急性缺失动物模型。胰岛素信号缺失显著降低了小鼠肝脏的极低密度脂蛋白三酰甘油的分泌速度,同时也下调了肝脏脂肪酸合成相关基因和极低密度脂蛋白形成相关基因的表达。结论:肝脏胰岛素信号急性缺失降低极低密度脂蛋白中三酰甘油的分泌速度,这种变化可能和肝脏内脂肪酸的合成速度下降有关。

关键词：肝脏胰岛素受体极低密度脂蛋白三酰甘油

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细胞色素c氧化酶亚基IV表达载体的构建及其在NB4细胞中的过表达

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齐齐哈尔医学院学报 2012年第16期33卷 2141-2143页

作者：李竹石史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国生物技术集团公司成都生物制品研究所有限责任公司

目的构建细胞色素c氧化酶亚基IV(COXIV)的表达载体并在NB4细胞进行过表达。方法 RT-PCR扩增COXIV编码序列并克隆到pcDNA6/His A质粒中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序;将鉴定正确的pcDNA6-COXIV表达载体转染到NB4细胞中,Western blot鉴定... 详细信息

目的构建细胞色素c氧化酶亚基IV(COXIV)的表达载体并在NB4细胞进行过表达。方法 RT-PCR扩增COXIV编码序列并克隆到pcDNA6/His A质粒中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序;将鉴定正确的pcDNA6-COXIV表达载体转染到NB4细胞中,Western blot鉴定COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达。结果所构建的pcDNA6-COXIV表达载体转染NB4细胞后,COXIV蛋白表达水平显著高于对照细胞。结论 COXIV表达载体构建成功,可介导COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达,为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：细胞色素c氧化酶凋亡活性氧

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在超负荷诱导的心脏疾病中心肌细胞自噬

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国际心血管病杂志 2012年第2期39卷 77-78,82页

作者：张岩刘伟孙寒松胡盛寿中国医学科学院阜外心血管病医院心血管外科卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100037

由各种原因引起的心室压力超负荷是导致心力衰竭的始动因素,如高血压或心肌梗死后,导致心肌能量代谢和心肌纤维蛋白组成的改变,进而心室扩张、泵功能降低最终发生心力衰竭。研究表明,在某些病理状态下,自噬活动在心肌病中被激活。超负... 详细信息

由各种原因引起的心室压力超负荷是导致心力衰竭的始动因素,如高血压或心肌梗死后,导致心肌能量代谢和心肌纤维蛋白组成的改变,进而心室扩张、泵功能降低最终发生心力衰竭。研究表明,在某些病理状态下,自噬活动在心肌病中被激活。超负荷的压力使细胞自噬活动增加,会使疾病进一步恶化。随着对自噬分子机制的深入研究,自噬活动对于心室重塑及其在心脏疾病中的潜在作用逐渐被认识。

关键词：自噬压力超负荷心肌肥厚心力衰竭

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树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析

树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析

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第11届全国脂质与脂蛋白学术会议

作者：李国平王艳满永王抒黎健陈保生卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室

目的研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响。方法前期我们实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948 bp和1937 bp,在GenBank中的注册号分别为HQ... 详细信息

目的研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响。方法前期我们实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948 bp和1937 bp,在GenBank中的注册号分别为HQ913636.1和HQ913637.1。我们对该基因cDNA全长在人、小鼠、大鼠中做了比较,并对其推演的编码氨基酸序列进行了蛋白质的一级和二级结构分析;据此,利用常规的内切酶技术和PCR定点突变技术,构建一系列

关键词：细胞内定位细胞质内突变体

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