目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小鼠随机分为4组,每组7只:1)NW组:饲养以N鼠料和水;2)ND组:饲养以N鼠料和1.8%DSS;3)CW组:饲养以C鼠料和水;4)CD组:饲养以C鼠料和1.8%DSS。以7 d 1.8%DSS溶液之后换10 d蒸馏水为1个周期,共进行3个周期完成建模。匹拉米洞法测定小鼠粪便隐血进行DAI评分,选取结肠组织HE染色及粪便微生物16S rRNA高通量测序。结果青稞酥油饮食可提高正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,其中别样棒菌属增加。加入DSS诱导溃疡性结肠炎模型后,青稞酥油饮食组DAI评分显著增高(P<0.05),组织学检测结肠黏膜糜烂溃疡且肠组织腺体排列混乱,小鼠肠道菌群丰度和多样性降低(P<0.05),但梭菌属、萨特氏菌属增加(P<0.05)。结论青稞酥油饮食可增加正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,但对于DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎炎性反应无显著改善。
目的建立阵列式标签标记的高通量测序方法并结合多克隆预筛选实现对点突变单克隆细胞株的高效鉴定。方法通过CRISPR/Cas9介导的同源重组修复(HDR)在K562细胞的rs826415位点引入G到T点突变。侯选细胞按每孔10~20个的密度接种培养多克隆,以带有标签(barcode)的引物区分各多克隆细胞,PCR扩增含rs826415位点的区段,产物合并进行二代测序。生物信息学分析各多克隆细胞的同源重组率及插入/缺失率。将阳性率最高孔内的细胞进一步单克隆培养并鉴定基因型。结果通过CRISPR/Cas9同源重组法和有限稀释获得96个rs826415位点打靶的多克隆细胞。经阵列式标签高通量测序法分析各孔细胞同源重组且不伴随插入/缺失(HDR without indel)的比率,96个多克隆的平均阳性率为0.21%,最高达4.35%,将该多克隆细胞进一步单克隆培养,从30个单克隆中成功获得rs826415位点由G/G突变为T/G的杂合型细胞株。结论通过阵列式标签高通量测序策略结合多克隆细胞预筛选,实现了定点突变单克隆细胞株的高效鉴定,相比常规方法显著降低了工作量和成本。
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