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基础医学与临床 2024年第2期44卷 154-158页

作者：陈恩惠杨佳卉赵微解相宏郭艳芳刘晓军闫莉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理生理学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005 山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001

目的探讨小鼠双微体同源基因2(MDM2)抑制剂Nutlin-3a对小鼠脂肪脂代谢功能的影响。方法建立C57BL/6J小鼠高脂饮食诱导肥胖(DIO)模型,随机分为对照组:腹腔注射DMSO,实验组:腹腔注射顺式咪唑啉类似物3a(Nutlin-3a)。实验期间进行葡萄糖耐... 详细信息

目的探讨小鼠双微体同源基因2(MDM2)抑制剂Nutlin-3a对小鼠脂肪脂代谢功能的影响。方法建立C57BL/6J小鼠高脂饮食诱导肥胖(DIO)模型,随机分为对照组:腹腔注射DMSO,实验组:腹腔注射顺式咪唑啉类似物3a(Nutlin-3a)。实验期间进行葡萄糖耐量(GTT)以及胰岛素耐量(ITT)实验。实验结束后,分离小鼠附睾脂肪组织(eWAT)、皮下脂肪组织(iWAT)与棕色脂肪组织(BAT),对白色脂肪组织进行苏木精-伊红(HE)染色,观察脂肪细胞形态变化;RT-qPCR和Western blot检测eWAT中脂代谢相关基因表达。结果与对照组相比,给予小鼠Nutlin-3a处理,增加DIO小鼠的体质量(P<0.001);对葡萄糖耐量和胰岛素敏感性没有影响;脂肪细胞体积减小;下调白色脂肪中脂滴结合蛋白诱导细胞凋亡DFF45样效应因子C(CIDEC)的表达。结论Nutlin-3a通过下调白色脂肪组织中CIDEC的表达抑制脂滴的形成。

关键词： Nutlin-3a 脂肪代谢脂肪组织诱导细胞凋亡DFF45样效应因子C(CIDEC)

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肝细胞特异性Sirt1缺失加重小鼠肝脏炎性反应

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基础医学与临床 2022年第2期42卷 282-285页

作者：杨佳卉赵微解相宏李春美刘晓军姚红山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国点重点实验室北京100005

目的探究沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的缺失对小鼠肝脏炎性反应的影响及其作用机制。方法每周记录在高脂喂养下的野生型C57BL/6J雄性小鼠和肝脏特异性Sirt1敲除(Sirt1-LKO)雄性小鼠的体质量,用Western blot和q-PCR检测炎性因子的表达... 详细信息

目的探究沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的缺失对小鼠肝脏炎性反应的影响及其作用机制。方法每周记录在高脂喂养下的野生型C57BL/6J雄性小鼠和肝脏特异性Sirt1敲除(Sirt1-LKO)雄性小鼠的体质量,用Western blot和q-PCR检测炎性因子的表达;给小鼠腹腔注射20 mg/kg LPS,用生存曲线来反映小鼠对炎性反应的敏感性。结果与对照组WT小鼠相比,Sirt1-LKO小鼠表现为体质量明显减轻(P<0.05)。另外,生存曲线KaplaneMeier图显示Sirt1-LKO小鼠对LPS刺激呈现低敏感性(P<0.05)。Sirt1-LKO小鼠原代肝细胞中NF-κB蛋白水平增高(P<0.05),及NF-κB下游靶基因炎性因子Tnfα和IL6明显上调(P<0.05)。结论肝细胞特异性Sirt1缺失加重肝脏炎性反应。

关键词： Sirt1 肝细胞炎性反应 NF-κB

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4,4'-二甲氧基查耳酮改善高脂饲养小鼠的胰岛素敏感性

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基础医学与临床 2021年第1期41卷 77-81页

作者：张伟虹赵微李春美解相宏姚红刘晓军山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察黄酮类药物4,4'-二甲氧基查耳酮(DMC)在高脂饲养的小鼠中胰岛素敏感性的变化,并探讨其作用机制。方法将高脂喂养的野生型C57/BL 6小鼠分为对照组和实验组每隔1 d按3μg/kg腹腔分别注射药物DMC和溶剂DMSO。每周检测记录两组... 详细信息

目的观察黄酮类药物4,4'-二甲氧基查耳酮(DMC)在高脂饲养的小鼠中胰岛素敏感性的变化,并探讨其作用机制。方法将高脂喂养的野生型C57/BL 6小鼠分为对照组和实验组每隔1 d按3μg/kg腹腔分别注射药物DMC和溶剂DMSO。每周检测记录两组小鼠进食和体质量,在第6周检测小鼠糖耐量(GTT)、胰岛素耐量(ITT)和丙酮酸钠耐量(PTT)实验;用免疫组化和HE染色检测小鼠脂肪组织变化。结果与对照组小鼠相比,DMC实验组小鼠在给药后体质量及进食差异无统计学意义。ITT实验结果显示DMC实验组小鼠胰岛素水平得到改善(P<0.05),GTT和PTT实验结果差异无统计学意义。脂肪组织HE染色显示对照组小鼠脂肪组织内有炎性细胞渗出,F4/80免疫组化染色结果提示DMC实验组小鼠脂肪组织内巨噬细胞浸润减少。结论药物DMC可以通过减少脂肪组织内巨噬细胞浸润改善高脂饲养小鼠的胰岛素敏感性。

关键词： 4 4'-二甲氧基查耳酮(DMC) 脂肪组织炎性反应胰岛素敏感性

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青稞酥油饮食对小鼠肠道菌群以及葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎症状的影响

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基础医学与临床 2021年第2期41卷 203-208页

作者：李春美赵微解相宏张伟虹杨佳卉李军刘晓军中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 北京大学第三医院消化科北京100191

目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小... 详细信息

目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小鼠随机分为4组,每组7只:1)NW组:饲养以N鼠料和水;2)ND组:饲养以N鼠料和1.8%DSS;3)CW组:饲养以C鼠料和水;4)CD组:饲养以C鼠料和1.8%DSS。以7 d 1.8%DSS溶液之后换10 d蒸馏水为1个周期,共进行3个周期完成建模。匹拉米洞法测定小鼠粪便隐血进行DAI评分,选取结肠组织HE染色及粪便微生物16S rRNA高通量测序。结果青稞酥油饮食可提高正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,其中别样棒菌属增加。加入DSS诱导溃疡性结肠炎模型后,青稞酥油饮食组DAI评分显著增高(P<0.05),组织学检测结肠黏膜糜烂溃疡且肠组织腺体排列混乱,小鼠肠道菌群丰度和多样性降低(P<0.05),但梭菌属、萨特氏菌属增加(P<0.05)。结论青稞酥油饮食可增加正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,但对于DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎炎性反应无显著改善。

关键词：青稞酥油饮食 DSS诱导溃疡性结肠炎 16S rRNA高通量测序肠道菌群

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MST1通过促进PEPCK的表达调控小鼠肝脏糖异生

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基础医学与临床 2020年第12期40卷 1656-1660页

作者：解相宏耿超赵微李春美张伟虹杨佳卉刘晓军中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制。方法RT-qPCR检测MST1 mRNA在糖尿病模型db/db小鼠和对照db/m小鼠肝脏组织中的表达。通过腺病毒感染小鼠肝原代细胞,检测MST1过表达后肝细胞的糖输出能... 详细信息

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制。方法RT-qPCR检测MST1 mRNA在糖尿病模型db/db小鼠和对照db/m小鼠肝脏组织中的表达。通过腺病毒感染小鼠肝原代细胞,检测MST1过表达后肝细胞的糖输出能力。在HepG2细胞中,运用荧光素酶报告基因实验检测MST1对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)编码基因的启动子活性的作用。利用干扰腺病毒在小鼠肝原代细胞中敲低叉头盒转录因子O1(FOXO1),检测MST1过表达对PEPCK mRNA水平的影响。结果MST1 mRNA在糖尿病db/db小鼠的肝脏组织中高表达(P<0.001)。在小鼠肝原代细胞过表达MST1促进了葡萄糖的输出(P<0.05)。在HepG2中,过表达MST1促进了PEPCK mRNA的表达(P<0.001)和启动子活性(P<0.01)。进而,当敲低FOXO1表达后,MST1诱导PEPCK mRNA表达的作用消失。结论MST1促进PEPCK表达参与调控小鼠肝脏糖异生依赖于FOXO1。

关键词：肝脏糖异生哺乳动物不育系20样激酶1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶叉头盒转录因子O1

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双特异性融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE的构建及抗非小细胞肺癌活性研究

双特异性融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE的构建及抗非小细胞肺癌活性研究

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：郭晓芳朱小飞钟根深曹海英苗庆芳新乡医学院基础医学院微生物学教研室新乡医学院医学检验学院临床免疫学教研室新乡医学院第一附属医院中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

目的表皮生长因子受体（EGFR）和胰岛素样生长因子受体I（IGF-IR）在人非小细胞肺癌中呈过表达状态,且二者之间可发生多种形式的相互作用,是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）治疗的理想靶点;力达霉素（LDM）是一种强... 详细信息

目的表皮生长因子受体（EGFR）和胰岛素样生长因子受体I（IGF-IR）在人非小细胞肺癌中呈过表达状态,且二者之间可发生多种形式的相互作用,是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）治疗的理想靶点;力达霉素（LDM）是一种强效的抗肿瘤抗生素,它与抗体或配体的偶联物显示了良好的抗肿瘤疗效。本研究的目的是构建一种以EGFR和IGF-1R为靶点的双特异性融合蛋白,并探讨其对NSCLC的体内外抗肿瘤活性。方法将EGFR和IGF-1R的配体EGF和IGF-1基因与LDM辅基蛋白基因LDP通过拼接PCR进行连接,并克隆至pET30a得到重组表达载体pET-egf-ldp-igf,将其转化到大肠杆菌中进行诱导表达,获得融合蛋白EGF-LDP-IGF。采用ELISA检测融合蛋白与EGFR和IGF-1R的亲和活性。融合蛋白与LDM发色团分子（AE）体外组装,得到强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。采用MTT法检测强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE对NSCLC细胞的体外杀伤活性,并与两种单靶向性强化融合蛋白EGF-LDP-AE和LDP-IGF-AE的体外细胞毒活性进行比较。PI染色法检测EGF-LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测EGF-LDP-IGF-AE蛋白对细胞凋亡的诱导活性。结果重组载体pET-egf-ldp-igf转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示EGF-LDP-IGF以包涵体形式存在于大肠杆菌胞质中。提取包涵体组分采用Ni亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,经复性后获得有活性的EGF-LDP-IGF蛋白。经ELISA检测EGF-LDP-IGF蛋白与EGFR和IGF-1R均有很高的亲和活性。将AE分子与EGF-LDP-IGF体外组装后,HPLC检测在350nm处出现了特定的吸收峰,表明分子组装成功获得了强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。MTT试验显示EGF-LDP-IGF-AE对A549、H520、H460和H1299细胞的IC值分别为:3.15×10mol/L、7.51×10mol/L、3.38×10mol/L和2.51×10mol/L,其杀伤活性显著高于LDM和两种单靶向性的强化融合蛋白EGF-LDP-AE和LDP-IGF-AE。细胞周期检测显示,EGF-LDP-IGF-AE导致细胞显著的G2/M期阻滞。细胞凋亡结果显示,EGF-LDP-IGF-AE在O.1nM、0.5nM、1nM和2nM的浓度下,A549细胞的凋亡比率分别为13.35%±1.39%、15.39%±0.81%、22.39%±3.35%、55.95%±9.26%,与对照组相比均具有显著性差异。结论本研究以EGFR和IGF-IR的天然配体EGF和IGF作为导向载体,以LDM作为弹头药物,制备了一种兼具双靶向、小型化和高效化的新型融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。该融合蛋白可高亲和性地与EGFR和IGF-1R结合,对体外培养的NSCLC细胞具有强烈杀伤作用,并可显著诱导NSCLC细胞发生周期阻滞与细胞凋亡。

关键词： EGFR IGF-1R 双特异性融合蛋白 NSCLC

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短寡核苷酸链高效转染体外培养恶性疟原虫的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第6期31卷 487-489页

作者：周洪昌高宇辉邵圣文张慧张婷湖州师范学院医学院病原生物与免疫学教研室湖州313000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院微生物与寄生虫学系北京100005

5%山梨醇连续2次同步化恶性疟原虫培养物(8 h窗口),培养16 h后,直接孵育组(A组)将50μl含寡核苷酸培养基与450μl恶性疟原虫培养物(5%虫血率,1%血压积)混合孵育,Entranster-R试剂转染组(B组)将50μl转染复合物(含寡核苷酸链和转染试剂)... 详细信息

5%山梨醇连续2次同步化恶性疟原虫培养物(8 h窗口),培养16 h后,直接孵育组(A组)将50μl含寡核苷酸培养基与450μl恶性疟原虫培养物(5%虫血率,1%血压积)混合孵育,Entranster-R试剂转染组(B组)将50μl转染复合物(含寡核苷酸链和转染试剂)与450μl恶性疟原虫培养物混合孵育,培养5 h后重悬,分别取出250μl,1 500×g离心3 min,收集沉淀,进行荧光显微镜观察和流式细胞术检测转染效率。剩余细胞经RPMI 1640培养基洗涤1次后,加入500μl含2%新鲜红细胞的培养基,继续培养12 h至第2个细胞周期,再次进行流式细胞术检测。荧光显微镜观察结果显示,Entranster-R试剂转染组可明显观察到感染红细胞中标记探针的绿色荧光,而直接孵育组未观察到绿色荧光。流式细胞术检测结果表明,Entranster-R试剂转染组小分子寡核苷酸转染疟原虫的效率可达(47.40±3.39)%,高于普通孵育法[(0.60±0.27)%],且该组在第2个周期中维持转染率约(26.85±2.90)%,而直接孵育组在第2个细胞周期则几乎检测不到。提示利用纳米转染试剂Entranster-R能提高寡核苷酸转染疟原虫的效率。

关键词：恶性疟原虫 Entranster-R转染寡核苷酸链

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进化树指导的腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模

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高等学校化学学报 2011年第8期32卷 1838-1844页

作者：袁晓辉王迎晨曲章义任家毅王靖飞郭莹莹王雅贤华东吴晓敏杨志伟高虹中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所北京100730 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室哈尔滨150081 黑龙江中医药大学基础医学院微生物与免疫学研究室哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提... 详细信息

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提供的信息确定最佳六邻体家族蛋白渐进式建模路径,然后利用Modeler与Charmm程序实现六邻体家族蛋白的快速建模.新的建模方法与传统方法相比,需要的计算量大大减少,经过结构评估以及与传统方法建模所得到的结构进行比较,证实基于进化树的快速建模结果是可靠的.人腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模对于实现快速高通量的表位预测及开发多价人腺病毒疫苗与腺病毒分型诊断试剂都具有重大的意义.

关键词：同源建模进化树人腺病毒六邻体家庭蛋白

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HBV重组抗原表位抗原性的研究

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 163-165,171页

作者：潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎大理学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000 中国医学科学院医学生物研究所中心实验室昆明650118

目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pE... 详细信息

目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。以表达产物为包被抗原对其抗原性进行研究。结果嵌和蛋白与抗-HBs血清可发生特异性结合反应。结论在外源抗原表位表达系统中表达的HBV抗原表位具有良好的抗原性。

关键词： HBV 抗原表位抗原性 FHV-RNA2载体系统

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一种制备高效感受态细胞的方法

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大理学院学报（综合版） 2007年第2期6卷 27-27页

作者：潘云华周东霞陈元鼎大理学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000 中国医学科学院医学生物研究所中心实验室云南昆明650118

感受态是细菌最易吸收外源DNA的状态，感受态细胞是基因工程中外源DNA转化必不可少的材料，通常是用新鲜的CaCl2溶液诱导产生，但制备时对实验条件要求较高，本方法制备感受态细胞操作简便，价格便宜，而且转化效率高。

关键词：质粒转化感受态细胞细菌

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