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天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷对阿尔茨海默病模型小鼠脑内β-淀粉样多肽表达的影响及其机制

中华病理学杂志 2016年第11期45卷 780-785页

作者：周楠楠朱燃赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L）... 详细信息

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L），黄芪总皂苷高、低剂量组（黄芪总皂苷-H、黄芪总皂苷-L）及芍药苷高、低剂量组（芍药苷-H、芍药苷-L），阳性对照组，每组10只；另取同窝阴性小鼠10只作为阴性对照组。药物干预4个月后，观察各组小鼠行为学变化及脑部病理学变化情况，并用模型细胞探讨其相关的作用机制。结果与阳性对照组相比，在行为学水迷宫试验中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组隐形平台寻找时间分别缩短，平台撤后在原目标象限停留时间分别延长（ P＜0.01）；在病理形态学检测中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组海马区Aβ斑块阳性面积分别降低70.1％、62.4％和57.6％（ P＜0.01），皮层区Aβ斑块阳性面积分别降低81.0％、69.6％和66.6％（ P＜0.01）；各干预组小鼠行为学改善和脑部Aβ斑块减少呈药物剂量依赖性；各干预组小鼠脑匀浆中及模型细胞培养上清液中Aβ水平均有降低；分泌酶表达结果显示，天麻素降低模型细胞β分泌酶基因转录水平达32.9％（ P＜0.01），降低β分泌酶蛋白表达水平达47.9％（ P＜0.01），黄芪总皂苷和芍药苷对β分泌酶在转录和蛋白表达水平无影响。结论天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷均可明显改善5XFAD模型小鼠的学习认知及记忆能力，且均可明显抑制小鼠脑内Aβ斑块及脑组织中Aβ多肽，其中天麻素-H作用效果最好；天麻素抑制Aβ斑块可能与抑制β分泌酶进而减少Aβ的产生有关，而黄芪总皂苷和芍药苷未观察到对β分泌酶的影响。

关键词：阿尔茨海默病淀粉样β蛋白前体天麻属黄芪芍药属大脑皮质海马

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中国人脑组织库标准化操作方案

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解剖学报 2017年第3期48卷 334-341页

作者：仇文颖马超包爱民竺可青黄越严小新章京钟春玖周江宁申勇郑晓瑛张力伟舒友生唐北沙张振馨段树民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100005 浙江大学医学院神经生物学系杭州310058 澳大利亚新南威尔士大学医学部医学科学系中南大学湘雅医学院人体解剖学与神经生物学系长沙410014 北京大学医学部病理学系北京100191 复旦大学附属中山医院神经内科上海200032 中国科技大学生命科学院合肥230071 北京大学-APEC健康科学研究院/人口研究所/WHO合作中心北京100871 首都医科大学北京天坛医院北京100050 北京师范大学脑与认知研究院北京100875 中南大学湘雅医院长沙410008 中国医学科学院北京协和医院神经内科北京100730

人脑组织库是神经科学和神经系统疾病研究的基础,中国的人脑组织库建设尚处于起步阶段。为了推动国内人脑组织库建设,实现资源共享,国内10家医学院所共同发起和成立了"中国人脑组织库协作联盟"。参考国内外同行实践经验,结合... 详细信息

人脑组织库是神经科学和神经系统疾病研究的基础,中国的人脑组织库建设尚处于起步阶段。为了推动国内人脑组织库建设,实现资源共享,国内10家医学院所共同发起和成立了"中国人脑组织库协作联盟"。参考国内外同行实践经验,结合国内现有脑组织库的现状,联盟学术委员会组织修订了符合中国国情的人脑组织库标准化操作方案,为在我国建立具备国际水准的人脑组织库标准化平台网络和相应的管理规范奠定基础。

关键词：人脑组织库神经科学中国

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与小鼠小脑发育相关的一种长非编码RNA Gm2694的鉴定

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基础医学与临床 2016年第4期36卷 492-497页

作者：刘春英张伟龙牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系中国医学科学院基础医学研究所神经科学中心北京100005 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室北京100021

目的鉴定与小鼠小脑发育相关的长非编码RNA,并验证其各剪接变异体的存在。方法用芯片技术分析小鼠小脑发育不同阶段RNA的表达差异;用实时定量PCR技术对芯片结果加以验证;针对目的 RNA,验证其各剪接变异体的存在及在小鼠小脑中的表达量... 详细信息

目的鉴定与小鼠小脑发育相关的长非编码RNA,并验证其各剪接变异体的存在。方法用芯片技术分析小鼠小脑发育不同阶段RNA的表达差异;用实时定量PCR技术对芯片结果加以验证;针对目的 RNA,验证其各剪接变异体的存在及在小鼠小脑中的表达量。结果 1)长非编码RNA Gm2694在小鼠小脑发育过程中呈动态变化趋势;2)其在小鼠小脑中特异性表达;3)在小鼠小脑中检测到Gm2694有8种表达水平各不相同的剪接变异体,其中除Ensembl数据库预测的7个之外,发现了1个新的表达于小脑的剪接变异体。结论 Gm2694是一种在小鼠小脑特异性表达的长非编码RNA,存在8种表达量各不相同的剪接变异体。

关键词：长非编码RNA Gm2694 小鼠小脑发育剪接变异体

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抗CD20单克隆抗体治疗B细胞淋巴瘤的效应机制

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现代生物医学进展 2016年第5期16卷 950-955页

作者：孙蕊朱琰冯海凉卞晓翠顾蓓王春景刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞资源中心北京100005

B细胞淋巴瘤是一种主要的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL),95%以上的B细胞淋巴瘤均表达B细胞分化抗原CD20。尽管目前CD20在B细胞分化发育过程中的具体功能尚未阐明,但其特有的表达方式和在细胞膜上的分布特点决定了其成... 详细信息

B细胞淋巴瘤是一种主要的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL),95%以上的B细胞淋巴瘤均表达B细胞分化抗原CD20。尽管目前CD20在B细胞分化发育过程中的具体功能尚未阐明,但其特有的表达方式和在细胞膜上的分布特点决定了其成为B细胞淋巴瘤靶向治疗的主要靶点。近十年来,随着抗CD20单克隆抗体的不断发展和进步,联合传统的CHOP化疗方案,在NHL的治疗中显示出良好的效果。虽然,近年来抗CD20单抗逐渐被用于B细胞相关的自身免疫病的治疗,但相关作用机制尚不明确。在针对NHL的临床治疗中,抗CD20单抗的疗效被认为依赖于效应器机制,主要有ADCC、CDC和细胞凋亡。虽然抗CD20在淋巴瘤的治疗中具有显著的免疫疗效,但部分瘤荷较大的病人出现了耐药和复发,循环中大量B细胞由于单抗的结合而被机体的单核巨噬细胞吞噬或NK细胞杀伤,机体出现成熟B细胞空缺期,同时单核巨噬细胞、NK细胞和补体大量消耗,造成机体免疫效应功能饱和和效应器耗竭。本文就抗CD20单克隆抗体在治疗淋巴瘤中的具体作用机制及可能造成的机体效应器耗竭问题做一简要的概述。

关键词： B细胞淋巴瘤 CD20 抗CD20单克隆抗体效应机制效应器耗竭

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抗CD20单链抗体融合显性抗原肽的原核表达和其抑瘤活性研究

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中国免疫学杂志 2015年第4期31卷 501-508页

作者：孙蕊朱琰冯海凉卞晓翠顾蓓王春景刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系和细胞资源中心北京100005

目的:人工设计并表达美罗华(C2B8)单链可变区抗体与李斯特菌溶细胞素O(Listeriolysin O,LLO)显性抗原表位构成的重组融合蛋白(Sc Fv-p LLO),初步分析其抗淋巴瘤细胞活性。方法:查询数据库获得美罗华(C2B8)单抗VH和VL基因序列,构建抗CD2... 详细信息

目的:人工设计并表达美罗华(C2B8)单链可变区抗体与李斯特菌溶细胞素O(Listeriolysin O,LLO)显性抗原表位构成的重组融合蛋白(Sc Fv-p LLO),初步分析其抗淋巴瘤细胞活性。方法:查询数据库获得美罗华(C2B8)单抗VH和VL基因序列,构建抗CD20单链抗体(Sc Fv)基因序列,选取LLO的2个CD4+T细胞表位,构建单链抗体融合抗原表位的重组蛋白基因序列,克隆至原核表达载体,经诱导表达纯化,流式细胞术和免疫共沉淀分析其与淋巴瘤细胞结合能力,细胞增殖实验测定其对淋巴瘤细胞生长的影响,凋亡实验分析其诱导淋巴瘤细胞凋亡的能力,淋巴细胞增殖实验分析其免疫原性。结果:成功诱导表达重组蛋白Sc Fv-p LLO。Sc Fv-p LLO可不同程度地靶向结合不同淋巴瘤细胞系,并明显抑制Raji细胞生长和诱导其凋亡。Sc Fv-p LLO可刺激免疫小鼠脾细胞增殖。结论:重组蛋白Sc Fv-p LLO保留了Sc Fv的功能,可靶向结合和抑制CD20阳性淋巴瘤细胞的生长,同时可激活机体免疫应答,为进一步研究其模拟瘤细胞表面抗原和作为瘤细胞疫苗佐剂的功能奠定基础。

关键词： CD20 单链抗体 B细胞淋巴瘤抗原表位李斯特菌溶细胞素O

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荧光探针及流式分选法追踪胰腺癌细胞增殖的研究

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医学研究杂志 2016年第6期45卷 29-32页

作者：米蕊芳潘春晓张俊文刘福生金贵善首都医科大学附属北京天坛医院、北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心 100050 中国医学科学院基础医学研究所/清华大学医学部北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺... 详细信息

目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺癌全基因组突变文库细胞增殖;并于一定的时间点,应用流式分选法分选增殖速度减慢细胞群;通过CCK-8法检测分选前后的细胞增殖曲线。结果 CFSE探针可均匀染色胰腺癌细胞,呈现较强的绿色荧光;在CFSE荧光探针染色后的不同时间点(0、48、96及144h),胰腺癌细胞荧光强度呈现逐级衰减趋势;应用细胞饥饿法对细胞进行同步化后,细胞呈现更好的同步化衰减趋势;在一定的荧光衰减时间点(144h),通过流式分选从细胞突变文库中获得了胰腺癌增殖减慢细胞群;CCK-8实验显示,相对于分选前的细胞,分选出的荧光强度强的胰腺癌细胞群增殖速度明显减慢(P=0.006)。结论 CFSE荧光探针可很好追踪胰腺癌细胞增殖,结合流式分选法可获得肿瘤突变文库中的增殖减慢细胞群。

关键词：胰腺癌荧光探针流式分选 ASPC-1细胞

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长链非编码RNA Gm15577参与小鼠小脑神经元增殖与分化

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中华病理学杂志 2015年第7期44卷 504-508页

作者：岳永松张伟龙刘春英牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所神经科学中心北京协和医学院基础学院病理学系 100005 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室

目的鉴定新的参与奈美亨综合征（NBS）小鼠模型中与小脑发育缺陷相关的长链非编码RNA（1ncRNA），并探讨其与小脑增殖分化相关的功能。方法利用芯片技术分析野生型（野生组，Nbsl^CNS-ctr）小鼠及Nbs1神经元特异性敲除（突变组，Nbsl^CN... 详细信息

目的鉴定新的参与奈美亨综合征（NBS）小鼠模型中与小脑发育缺陷相关的长链非编码RNA（1ncRNA），并探讨其与小脑增殖分化相关的功能。方法利用芯片技术分析野生型（野生组，Nbsl^CNS-ctr）小鼠及Nbs1神经元特异性敲除（突变组，Nbsl^CNS-ctr）小鼠小脑中RNA的表达差异；利用即时荧光定量PCR技术对芯片结果加以验证；针对目的RNA，检测其全身表达及小脑中表达模式、细胞内定位以及对母基因的表达调控模式。结果IncRNA Gm15577是由神经生长调节因子一1（Negrl）基因内部的内含子区反向转录而成，特异性表达于小脑，且在其发育过程中呈动态变化趋势，而Nbs1缺失之后整体表达水平显著降低；同时，与未分化期比较，分化后的小鼠小脑原代神经前体细胞中Gm15577及其母基因Negrl均有显著升高；Gm15577敲低之后导致Negr1以及小脑增殖分化相关因子Shh与β-catenin在RNA水平的表达显著下调；人髓母细胞瘤临床样本数据分析表明Negr1基因在正常人群与肿瘤患者之间有显著的表达差异。结论从神经特异性敲除Nbs1小鼠模型出发报道了一个新的与小鼠小脑发育相关的IncRNA Gm15577，初步结果表明Gm15577通过调控Negr1进而影响小脑神经元增殖与分化进程中的Shh与β—catenin信号通路，其基因行为异常有可能与髓母细胞瘤发病有一定的相关性。

关键词：小脑 Nbs1 细胞增殖细胞分化长链非编码RNA

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载有槲皮素的PEG-PE胶束对乳腺癌细胞耐药性的逆转效应

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基础医学与临床 2015年第2期35卷 174-177页

作者：吴金花段金虹许海燕杨先达中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学与病理生理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物医学工程学系北京100005

目的探索载有槲皮素的PEG-PE聚合物胶束(M-Q)能否在体外逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7 ADRr)的耐药性。方法将PEG-PE聚合物与槲皮素混合制备脂膜,加0.9%氯化钠注射液形成胶束,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,并将其和阿霉素与MCF-7... 详细信息

目的探索载有槲皮素的PEG-PE聚合物胶束(M-Q)能否在体外逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7 ADRr)的耐药性。方法将PEG-PE聚合物与槲皮素混合制备脂膜,加0.9%氯化钠注射液形成胶束,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,并将其和阿霉素与MCF-7 ADRr细胞共孵育72 h,用MTS方法检测对肿瘤细胞的杀伤率。结果PEG-PE聚合物胶束能有效运载槲皮素,其包封率高达74%以上,平均粒径为11.11 nm左右,与游离槲皮素相比,M-Q能在体外更大程度地逆转MCF-7 ADRr细胞对于阿霉素的耐药性(P<0.05),且PEG-PE胶束自身对靶细胞无明显杀伤作用。结论载有槲皮素的PEG-PE胶束在逆转肿瘤耐药性方面具有应用潜能。

关键词： PEG-PE 胶束槲皮素 MCF-7 ADRr细胞

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分泌IL-21的白血病细胞系的建立及其抑瘤作用

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 961-967页

作者：朱琰孙蕊王春景刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和EL... 详细信息

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和ELISA法鉴定建立的4种细胞系。以稳定分泌IL-21白血病细胞为抗原刺激外周血单个核细胞增殖,细胞分析计数仪检测增殖倍数,流式细胞仪分析淋巴细胞的表型,细胞计数试剂盒(CCK8)检测增殖后的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果建立稳定表达IL-21的4种细胞系:K562-IL-21、THP-1-IL-21、jurkat E6-1-IL-21和RPMI8226-IL-21。3份人PBMC在4种分泌IL-21的白血病细胞的作用下都有增殖,增殖倍数在1.147±0.057~2.725±0.345倍之间。不同数量的IL-21分泌白血病细胞都可激活淋巴细胞增殖,增殖的倍数在1.127±0.152~2.213±0.200之间。增殖后CD3+T淋巴细胞和CD56+NK细胞的比例降低(P<0.05),CD19+B淋巴细胞比例增加(P<0.05);由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞的杀伤作用明显高于对照组。由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞和其他7种肿瘤细胞均有杀伤作用,杀伤率在(28.68±9.31)%^(78.45±0.61)%之间。结论 4种分泌IL-21的白血病细胞可刺激PBMC增殖并激活其对肿瘤细胞的杀伤作用。

关键词：白血病细胞系白介素21 肿瘤治疗

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髓母细胞瘤中DNA损伤修复机制的研究进展

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中华病理学杂志 2014年第6期43卷 430-432页

作者：张琪佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

髓母细胞瘤是儿童最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤之一,有研究提示髓母细胞瘤可能由原始神经干细胞演化而成,此类细胞有向神经元及神经胶质细胞等多种细胞分化的潜能,属于原始神经外胚层肿瘤（primitive neuroectodermal tumors,PNE... 详细信息

髓母细胞瘤是儿童最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤之一,有研究提示髓母细胞瘤可能由原始神经干细胞演化而成,此类细胞有向神经元及神经胶质细胞等多种细胞分化的潜能,属于原始神经外胚层肿瘤（primitive neuroectodermal tumors,PNET）.髓母细胞瘤的治疗主要是手术切除与术后放射治疗,部分病例可辅以化疗.目前对髓母细胞瘤的研究着重于探讨肿瘤形成的细胞起源和发病机制,从而在治疗方案上寻找新的靶点.

关键词：髓母细胞瘤 DNA损伤修复机制中枢神经系统恶性肿瘤原始神经外胚层肿瘤术后放射治疗神经胶质细胞神经干细胞

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