检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2009年第7期29卷 737-741页

作者：王月圆高云周汪兆琦沈岩佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室德国耶纳07745 Leibniz衰老研究所德国耶纳07745 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系德国耶纳07745 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院实验动物中心北京100005

目的建立表达PARP-1和P53基因双缺失的小鼠髓母细胞瘤细胞系,为研究髓母细胞瘤(MB)发生机制提供细胞模型。方法对小鼠髓母细胞瘤细胞进行原代培养,体外传代观察,传代30次以上对培养细胞进行形态学观察及细胞标志性蛋白的免疫荧光分析,用... 详细信息

目的建立表达PARP-1和P53基因双缺失的小鼠髓母细胞瘤细胞系,为研究髓母细胞瘤(MB)发生机制提供细胞模型。方法对小鼠髓母细胞瘤细胞进行原代培养,体外传代观察,传代30次以上对培养细胞进行形态学观察及细胞标志性蛋白的免疫荧光分析,用Western blot法检测PARP-1蛋白的表达,用含有PARP-1蛋白功能区域的重组质粒pEGFP-C1-Hparp-1和绿色荧光蛋白空质粒pEGFP-C1转染细胞进行检测。结果新建立的小鼠髓母细胞瘤细胞系呈多角形、短梭形,免疫荧光分析可见未成熟神经元标志性蛋白Vimentin、Dcx、βⅢ-Tubulin等表达阳性,Western blot检测PARP-1蛋白阴性,导入外源PAPR-1基因后呈阳性。结论成功建立了DNA损伤修复蛋白功能缺陷的小脑神经源性髓母细胞瘤细胞系,有助于深入研究髓母细胞瘤的病因及发病机制。

关键词：基因敲除 PARP—I 髓母细胞瘤细胞神经标记物

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载有槲皮素的PEG-PE胶束对乳腺癌细胞耐药性的逆转效应

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基础医学与临床 2015年第2期35卷 174-177页

作者：吴金花段金虹许海燕杨先达中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学与病理生理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物医学工程学系北京100005

目的探索载有槲皮素的PEG-PE聚合物胶束(M-Q)能否在体外逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7 ADRr)的耐药性。方法将PEG-PE聚合物与槲皮素混合制备脂膜,加0.9%氯化钠注射液形成胶束,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,并将其和阿霉素与MCF-7... 详细信息

目的探索载有槲皮素的PEG-PE聚合物胶束(M-Q)能否在体外逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7 ADRr)的耐药性。方法将PEG-PE聚合物与槲皮素混合制备脂膜,加0.9%氯化钠注射液形成胶束,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,并将其和阿霉素与MCF-7 ADRr细胞共孵育72 h,用MTS方法检测对肿瘤细胞的杀伤率。结果PEG-PE聚合物胶束能有效运载槲皮素,其包封率高达74%以上,平均粒径为11.11 nm左右,与游离槲皮素相比,M-Q能在体外更大程度地逆转MCF-7 ADRr细胞对于阿霉素的耐药性(P<0.05),且PEG-PE胶束自身对靶细胞无明显杀伤作用。结论载有槲皮素的PEG-PE胶束在逆转肿瘤耐药性方面具有应用潜能。

关键词： PEG-PE 胶束槲皮素 MCF-7 ADRr细胞

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植物血凝素-ECM830细胞融合法融合黑色素瘤细胞

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中国医学科学院学报 2013年第5期35卷 515-518页

作者：米蕊芳刘福生金贵善首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。... 详细信息

目的以黑色素瘤细胞为模型,研究高效率肿瘤细胞融合方法。方法慢病毒荧光标记黑色素瘤细胞,ECM830电融合法及改良的植物血凝素(PHA)-ECM830电融合仪细胞融合法融合黑色素瘤细胞,流式分选黑色素瘤融合细胞,碘化亚啶染色法测定DNA含量。结果荧光标记带有绿色和红色荧光的黑色素瘤细胞,通过PHAECM830细胞融合法获得黑色素瘤融合细胞,细胞融合效率较ECM830电融合法从0.50%提升到7.18%,流式分选得到单一的黑色素瘤融合细胞,DNA含量分析显示黑色素瘤融合细胞的DNA含量翻倍,体内外实验表明黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。结论运用改良的PHA-ECM830细胞融合法成功高效得到黑色素瘤融合细胞,黑色素瘤融合细胞增殖速度降低。

关键词：植物血凝素 ECM830 细胞融合法黑色素瘤细胞

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与小鼠小脑发育相关的一种长非编码RNA Gm2694的鉴定

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基础医学与临床 2016年第4期36卷 492-497页

作者：刘春英张伟龙牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系中国医学科学院基础医学研究所神经科学中心北京100005 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室北京100021

目的鉴定与小鼠小脑发育相关的长非编码RNA,并验证其各剪接变异体的存在。方法用芯片技术分析小鼠小脑发育不同阶段RNA的表达差异;用实时定量PCR技术对芯片结果加以验证;针对目的 RNA,验证其各剪接变异体的存在及在小鼠小脑中的表达量... 详细信息

目的鉴定与小鼠小脑发育相关的长非编码RNA,并验证其各剪接变异体的存在。方法用芯片技术分析小鼠小脑发育不同阶段RNA的表达差异;用实时定量PCR技术对芯片结果加以验证;针对目的 RNA,验证其各剪接变异体的存在及在小鼠小脑中的表达量。结果 1)长非编码RNA Gm2694在小鼠小脑发育过程中呈动态变化趋势;2)其在小鼠小脑中特异性表达;3)在小鼠小脑中检测到Gm2694有8种表达水平各不相同的剪接变异体,其中除Ensembl数据库预测的7个之外,发现了1个新的表达于小脑的剪接变异体。结论 Gm2694是一种在小鼠小脑特异性表达的长非编码RNA,存在8种表达量各不相同的剪接变异体。

关键词：长非编码RNA Gm2694 小鼠小脑发育剪接变异体

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氧化低密度脂蛋白下调血管内皮细胞表达Rictor

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 685-689页

作者：于淼吕宏娟尹洪超中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005

目的探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响。方法分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,... 详细信息

目的探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响。方法分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化的变化,用硝酸还原酶还原法测定NO释放量。结果氧化低密度脂蛋白显著降低Rictor的mRNA及蛋白的表达量(P<0.01),使Rictor-mTOR复合物形成减少。转染Rictor后,不仅Rictor表达增加而且使蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化增加;内皮细胞NO释放量增多(P<0.05)。结论影响内皮细胞表达Rictor,是氧化低密度脂蛋白诱发血管内皮细胞功能不良的重要机制之一。

关键词：血管内皮细胞氧化低密度脂蛋白 Rictor eNOS

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联合使用聚合酶链式反应和培养法可以提高培养细胞支原体的检出率

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医学研究杂志 2018年第6期47卷 28-34页

作者：卞晓翠王晓婉杨振丽赵晓梅李姜刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的分析国家实验细胞资源共享服务平台及其他实验室细胞支原体污染的情况,探讨聚合酶链式反应(PCR)和培养法在实验细胞支原体检测中的一致性。方法通过PCR法对245例细胞培养上清进行了支原体检测,并检测了阳性样品支原体感染的种类;对... 详细信息

目的分析国家实验细胞资源共享服务平台及其他实验室细胞支原体污染的情况,探讨聚合酶链式反应(PCR)和培养法在实验细胞支原体检测中的一致性。方法通过PCR法对245例细胞培养上清进行了支原体检测,并检测了阳性样品支原体感染的种类;对其中127例新鲜上清同时进行了培养法检测,通过Mc Nemar检验分析了二者的一致性。对二者检测不一致的细胞进行复检,同时使用生物发光法进行验证。结果国内培养细胞支原体感染率在19%~66%;培养法和PCR法检测支原体只有假阴性,没有假阳性;延长取样前细胞在无抗生素培养基中的培养时间至96h,可以提高低效价支原体感染样品的检出率。结论 PCR法和培养法检测支原体具有较好的一致性,应联合使用两种方法对培养细胞进行定期检测,提高支原体的检出率。在细胞培养过程中使用合格制剂,严格无菌操作,预防为主。

关键词：细胞培养质量控制支原体污染 PCR 培养法

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稳定表达Cas9蛋白质、荧光蛋白质和荧光素酶的胰腺癌细胞株的建立及鉴定

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基础医学与临床 2024年第10期44卷 1419-1427页

作者：代娣杨振丽夏雨佳卞晓翠刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、病理学系北京100005

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞... 详细信息

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞系(AsPC-1、CFPAC-1、HPAC、BxPC-3、HS 766T、MIA PaCa-2、PANC-1和SW 1990)、小鼠胰腺癌细胞系(Pan02)中,感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9m1.1-Puro,挑选单细胞克隆培养扩增,提取总蛋白质后,Western blot验证Cas9的表达水平;感染荧光蛋白质表达质粒pLv-EF1α-EGFP、pLv-EF1α-mCherry、pLv-EF1α-tdTomato、pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取每种细胞Cas9稳定表达的一个克隆感染pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取其中2个细胞株感染Lv-EF1a-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况;5只BALB/c Nude小鼠皮下接种MIA PaCa-2-Luc2-tdT细胞(1.0×10^(7)个/只),36 d后活体成像。结果筛选到48个Cas9稳定表达的胰腺癌细胞株(其中表达Cas9m1.1的细胞23株,表达Cas9m1.1-Luc2-tdT的细胞25株),筛选到33个荧光蛋白质稳定表达的胰腺癌细胞株(表达EGFP的细胞8株,表达mCherry的7株,表达Luc2-tdT和tdTomato的各9株)。表达mCherry和Cas9的细胞感染mCherry gRNA后,mCherry被敲除。活体成像显示,表达Luc2-tdT的MIA PaCa-2细胞生物发光和荧光发光均存在。结论成功建立了33个荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,其中表达Luc2-tdT的细胞株具有荧光素酶活性;成功建立了48个Cas9稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,Cas9具有基因编辑活性,基因编辑活性因原始细胞系不同而存在差异。

关键词： Cas9 荧光素酶胰腺癌活体成像基因编辑

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乳腺癌类器官的培养及鉴定

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1223-1228页

作者：夏雨佳杨振丽代娣刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、... 详细信息

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、顺铂药敏测试。结果共培养建立了44例乳腺癌类器官,均呈实性类球状生长。类器官ER、PR、HER-2、CK表达情况与患者临床样品一致。乳腺癌类器官对化疗药紫杉醇、多柔比星、顺铂具有一定敏感性。结论乳腺癌类器官作为新型体外模型,具有一定异质性,再现体内病生理功能特性。

关键词：乳腺癌类器官药敏实验

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器官芯片——更具前景的体外模型

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1202-1207页

作者：杨振丽夏雨佳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内... 详细信息

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内各系统角度介绍器官芯片的研究进展和应用,同时提出目前器官芯片发展过程中存在的局限性和未来的发展方向。

关键词：器官芯片类器官疾病模型

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胆管癌中异柠檬酸脱氢酶基因突变潜在靶基因的鉴定

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基础医学与临床 2020年第4期40卷 512-517页

作者：王迪李晴佟伟民牛亚梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系/中国医学科学院分子病理中心北京100005

目的鉴定胆管癌中异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变的潜在靶基因。方法下载TCGA胆管癌项目的DNA甲基化、转录组数据。将IDH突变型肿瘤与IDH野生型肿瘤进行比较,分别通过limma和DESeq2进行差异甲基化位点和差异表达分析。对差异表达基因的表... 详细信息

目的鉴定胆管癌中异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变的潜在靶基因。方法下载TCGA胆管癌项目的DNA甲基化、转录组数据。将IDH突变型肿瘤与IDH野生型肿瘤进行比较,分别通过limma和DESeq2进行差异甲基化位点和差异表达分析。对差异表达基因的表达量进行标准化处理并与相应差异甲基化位点的甲基化水平进行Spearman相关性分析。筛选出高甲基化、低表达且两者呈负相关的基因进行富集分析以探究其功能。构建蛋白质互作网络并通过MCODE筛选出核心模块。结果分析得到11605个差异甲基化位点,其中10427个位点高甲基化;而735个差异表达基因中有651个基因下调,其中的143个基因与328个高甲基化位点形成330对强负相关组合。上述143个基因富集于表皮生长因子受体信号通路、细胞外渗及细胞分裂的调控,通过构建蛋白质相互作用(PPI)网络筛选出核心模块的10个基因,分别参与了上皮细胞的分化发育、细胞蛋白质定位等生物学过程。结论本研究通过整合TCGA胆管癌DNA甲基化和转录组数据,得到了IDH突变所影响的潜在靶基因并确定其PPI网络核心模块,为阐明IDH突变在胆管癌发生发展中的作用提供了新的线索。

关键词：胆管癌异柠檬酸脱氢酶突变靶基因 DNA甲基化基因表达

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