检索结果-内蒙古大学图书馆

验证性筛选PDZ结构域结合配体文库快速研究HtrA2/Omi PDZ结构域的结合特性

中国科学（C辑） 2007年第1期37卷 107-116页

作者：马素参宋婀莉高诗娟田瑞高友鹤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室蛋白质组学研究中心病理生理学系北京100005

HtrA2/Omi是一种线粒体丝氨酸蛋白酶,在哺乳动物细胞中具有双重功能,即诱导细胞凋亡和参与维持线粒体活性的动态平衡.PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一,参与多种生物学过程,如细胞信号转导、蛋白质降解、细胞骨架组织等.最... 详细信息

HtrA2/Omi是一种线粒体丝氨酸蛋白酶,在哺乳动物细胞中具有双重功能,即诱导细胞凋亡和参与维持线粒体活性的动态平衡.PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一,参与多种生物学过程,如细胞信号转导、蛋白质降解、细胞骨架组织等.最近研究发现,HtrA2/Omi蛋白的PDZ结构域与配体的相互作用,可以调节HtrA2/Omi蛋白自身的水解酶活性.以HtrA2/Omi PDZ结构域为研究对象,用酵母双杂交系统验证性筛选PDZ结构域结合配体文库,快速研究该结构域的结合特性,并在人类全蛋白质组范围内预测并发现该结构域新的相互作用蛋白,最后分析这些新的相互作用所能够形成的最小相互作用网络来评估其可信度.研究结果揭示了HtrA2/Omi PDZ结构域新的结合特性,即:不仅能够结合已报道的II类PDZ配体而且还可以结合I类和III类PDZ配体,并且配体-3位氨基酸具有一定范围内的可变性.而且,发现了7个新的HtrA2/Omi PDZ结构域相互作用蛋白,为进一步阐明HtrA2/Omi蛋白的生物学功能提供了重要线索.同时证明了验证性筛选目的结构域结合配体文库,这一结构域结合特性研究新策略的实用性和高效性.

关键词： HtrA2/Omi PDZ结构域结构域结合特性验证性筛选蛋白质相互作用生物信息学

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基于自转运蛋白Ag43的HPV16L1蛋白的细菌表面展示

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第3期42卷 178-184页

作者：蔡锟王哲黄丕英韦良婉王星媛许雪梅储引娣朱沛沛范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国人民解放军总医院第二医学中心神经内科二病区国家老年疾病临床医学研究中心北京100036

目的:通过构建含有不同大小乘客结构域的Ag43表面展示载体,观察其将外源蛋白HPV16L1展示在细菌细胞表面的效率。方法:(1)利用基因工程手段将不同长度的Ag43基因序列连接到pET22b载体,获得4种Ag43表面展示载体:Ag43/138、Ag43/551、Ag43/... 详细信息

目的:通过构建含有不同大小乘客结构域的Ag43表面展示载体,观察其将外源蛋白HPV16L1展示在细菌细胞表面的效率。方法:(1)利用基因工程手段将不同长度的Ag43基因序列连接到pET22b载体,获得4种Ag43表面展示载体:Ag43/138、Ag43/551、Ag43/552、Ag43/700;(2)克隆HPV16L1编码基因序列,利用基因工程手段将其分别连接到上述4种Ag43表面展示载体,获得4种重组蛋白表达载体;(3)HPV16L1-Ag43融合蛋白表达及SDS-PAGE分析;(4)利用胰蛋白酶消化验证HPV16L1蛋白在大肠埃希菌的表面展示。结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增获得的Ag43和HPV16L1条带与预期大小一致,表面展示载体和重组蛋白表达载体的基因序列均通过基因测序验证无误。经IPTG诱导后,构建的4种Ag43表面展示载体均能表达HPV16L1蛋白。胰蛋白酶消化后,4种重组蛋白条带均减弱,且Ag43/700-HPV16L1条带减弱最明显。结论:成功构建了基于自转运蛋白Ag43的细菌表面展示载体,HPV16L1蛋白可通过构建的4种Ag43表面展示载体表达并展示在大肠埃希菌表面,且仅保留α-螺旋和β-桶状结构域部分的Ag43表达载体即Ag43/700的表面展示效果最优。

关键词：自转运蛋白细菌表面展示 HPV16L1 Ag43

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mRNA电转抗CD3抗体刺激的PBMC方法的建立

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 782-786页

作者：胡愉赵慧王准何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国食品药品检定研究院病毒三室北京100050

目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p ... 详细信息

目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p GEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500μs、400 V 500μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转最佳条件。结果 p GEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论电转参数为500 V 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞。

关键词：信使RNA 电转外周血单个核细胞加强型绿色荧光蛋白

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中国南方健康女性跟骨超声骨密度测量评估

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基础医学与临床 2007年第4期27卷 382-385页

作者：余跃刘伟朱自强徐成丽朱广瑾中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京100005

目的了解我国南方地区健康女性跟骨超声骨密度随年龄、身高、体重等变化的规律及骨质疏松患病率的情况，为确定我国南方地区女性超声骨密度的参考值和骨质疏松症的诊断标准提供科学依据。方法用美国Lunar公司生产的Achilles Express... 详细信息

目的了解我国南方地区健康女性跟骨超声骨密度随年龄、身高、体重等变化的规律及骨质疏松患病率的情况，为确定我国南方地区女性超声骨密度的参考值和骨质疏松症的诊断标准提供科学依据。方法用美国Lunar公司生产的Achilles Express跟骨超声骨密度测定仪，测定2498名年龄在10～87岁的女性跟骨硬度指数（SI），每10岁为一个年龄组，69岁以上合并为1组，共7组，对相关数据进行相应的统计学分析。结果 SI随年龄增长呈现先升后降的变化趋势，骨峰值年龄出现在20～29岁年龄组。Pearson相关分析显示，SI与年龄呈显著负相关，与身高、体重呈正相关。骨质疏松患病率随年龄增加逐步升高。结论我国南方地区女性硬度指数与年龄、身高、体重均有显著相关性，本研究获得的硬度指数将为确定我国女性超声骨密度的参考值和骨质疏松症的诊断标准提供重要的参考依据。

关键词：跟骨骨质疏松症定量超声

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基因组学与人类疾病

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遗传 2011年第8期33卷 807-808页

作者：周钢桥张学中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室基因组学与蛋白质组学研究室北京100850 中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室医学遗传学系北京100730

近年来,以高密度基因芯片和高通量测序为核心的基因组学技术迅速发展,已广泛应用到生物医学的各个领域并取得突出进展,使我们对于疾病的分子与遗传学基础的认识达到了一个新的水平。

关键词：基因组学技术人类疾病高密度基因芯片遗传学基础生物医学高通量领域并测序

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衰老相关miRNAs的筛选及鉴定

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基础医学与临床 2015年第5期35卷 674-679页

作者：刘伟刘畅阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005

目的以快速老化模型SAM小鼠的海马组织作为研究对象,通过miRNA芯片大规模筛选与衰老相关的miRNAs,为探讨衰老的机制提供线索。方法随机各选取3只4、8和12月龄SAMP8及SAMR1小鼠,提取海马组织RNA进行芯片检测;以snRNA U6作为内参,SYBR Gr... 详细信息

目的以快速老化模型SAM小鼠的海马组织作为研究对象,通过miRNA芯片大规模筛选与衰老相关的miRNAs,为探讨衰老的机制提供线索。方法随机各选取3只4、8和12月龄SAMP8及SAMR1小鼠,提取海马组织RNA进行芯片检测;以snRNA U6作为内参,SYBR Green作为染料,用real-time PCR方法进行验证,对miRNA的表达进行相对定量分析。结果对比miRNA芯片和real-time PCR验证结果,证实芯片结果具有相对较好的重复性和真实度。对3张miRNA芯片结果进行综合分析,在4和8月龄均表现出表达差异的miRNA共7个,在8和12月龄均表现出表达差异的miRNA共8个,4和12月龄均表现出表达差异的miRNA共3个,在3个月龄间均表现出明显表达差异的1个(miR-9*)。结论 miRNAs在SAMP8及SAMR1的差异表达提示其在SAMP8衰老进程中发挥重要作用。

关键词：衰老 miRNAs SAM小鼠海马

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小鼠脾脏来源的调节性表型γδT细胞的存在和体外诱导

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中国免疫学杂志 2008年第6期24卷 488-491页

作者：杨静琳康宁汤龙陈兴明刘庆丰崔莲仙胡云章何维北京协和医学院医学生物研究院中国医学科学院医学生物研究所疫苗室昆明650118 北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京101005 北京协和医院耳鼻喉科北京101005

目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-... 详细信息

目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)和免疫荧光染色分析初始的γδT细胞以及TGFβ-(5ng/ml)诱导后的γδT细胞中Foxp3及部分调节性T细胞表面分子和细胞因子的表达情况。结果:与CD4+CD25+T细胞相比,初始的γδT细胞Foxp3表达量很低;活化的γδT细胞经过TGFβ-诱导后Foxp3表达量明显增加,同时与免疫调节相关的表面分子如GITR、CTLA-4和细胞因子TGFβ-、IL-10的表达量也相应增加,IFNγ-的表达有所降低。结论:初始的γδT细胞低表达Foxp3,在体外可经TGFβ-诱导产生具有调节性T细胞表型的亚群。

关键词： γδT细胞调节性T细胞 Foxp3 免疫调节

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2023年γδT细胞肿瘤治疗领域重大进展述评

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年

作者：赵跃祺张建民陈慧何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室T细胞与免疫治疗重点实验室常州西太湖细胞治疗前沿技术研究院

γδT细胞是一类表达γδT细胞受体(γδTCR)的特殊的固有免疫样T细胞，在机体抗感染免疫和肿瘤的免疫监视中发挥重要的作用[1，2]。γδT细胞在外周血和次级淋巴器官中含量很少，但富集于皮肤、消

关键词：

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shRNA干扰eIF4A1基因对胶质瘤细胞体内外生物学特征的影响

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中国科学：生命科学 2019年第8期49卷 987-995页

作者：张俊文范文华方胜陈虹黄秉仁刘福生北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心首都医科大学附属北京天坛医院北京100050 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质... 详细信息

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库(Chinese glioma genome altas,CGGA)分析了真核生物翻译起始因子中eIF4A1与脑胶质瘤的关系.生物信息学分析显示,eIF4A与胶质瘤病理分级相关并且在胶质瘤细胞中高表达.eIF4A1的抑制剂Silvestrol明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力.利用慢病毒感染胶质瘤细胞建立shRNA干扰eIF4A1基因的胶质瘤细胞株,进行了一系列体内外生物学特征的实验,研究结果发现,shRNA干扰eIF4A1基因后能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、细胞侵袭和迁移.因此,本实验研究证实eIF4A1是胶质瘤治疗的有效靶点,为胶质瘤的临床治疗提供可靠的理论基础.

关键词：胶质瘤 eIF4A1 增殖克隆形成侵袭迁移

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HLA-DRB1及HLA-DQA1单倍型与乙型肝炎病毒感染结局的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2006年第4期23卷 427-430页

作者：卢亮平李兴旺刘英孙国常陈志海朱席琳胡全有李辉中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院流行病学与卫生统计学系北京100005 北京地坛医院内科协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室北京顺义区医院检验科

目的探讨中国北方汉族人群HLA-DRB1、DQA1单倍型与乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染不同结局的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(sequencespecificprimerspolymerasechainreaction,PCR-SSP)技术检测HLA-DRB1、DQA1等位基因,并比较207例慢性乙型肝炎患者,212名无症状HBV慢性携带者(HBV携带者),148例自限性HBV感染者的单倍型频率。结果自限性HBV感染组单倍型DRB1*04-DQA1*0301的频率为10.03%,显著高于慢性乙肝组的3.66%(P=0.0005);DRB1*15/*16-DQA1*0102的频率为6.80%,显著高于慢性乙肝组的1.94%(P=0.0012)和无症状HBV慢性携带者组的1.65%(P=0.004);DRB1*04-DQA1*0302单倍型在慢性乙型肝炎组的频率为3.10%,明显高于自限性HBV感染组的0.39%(P=0.0077)。结论HLA-DRB1、DQA1单倍型与个体感染HBV后的不同结局存在显著关联。

关键词：乙型肝炎人类白细胞抗原-DRB1 人类白细胞抗原-DQA1 单倍型

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