检索结果-内蒙古大学图书馆

实验生物学报 2002年第1期35卷 21-25页

作者：孙晓冬俞作仁马静葛晔华李赛薛社普韩代书中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学系北京100005

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生过程中的成熟以及功能,我们首先通过RT-PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克... 详细信息

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生过程中的成熟以及功能,我们首先通过RT-PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克隆抗体,然后利用免疫荧光染色、Western Blot和半定量RT-PCR方法,研究了大鼠精子发生过程中Cenexin蛋白和基因的表达特征。结果显示Cenexin mRNA水平在精原细胞和精母细胞中较高,随后表达水平下降,而蛋白质分子在精原细胞到精子细胞中都定位于细胞的一个中心粒上,表示有成熟中心粒的存在,在长形精子细胞中该蛋白位于鞭毛的基体部。附睾的绝大多数成熟精子中Cenexin免疫染色消失。中心体蛋白Cenexin在精子变态期的表达变化可能与精子鞭毛形成的起始有关。

关键词： Cenexin 中心体蛋白成熟中心粒精子发生大鼠

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低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响

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基础医学与临床 2002年第4期22卷 358-362页

作者：王岚叶惟三刘霄郭燕薛社普中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织胚胎教研室北京100005

采用检测细胞凋亡的微核 (MN)、原位末端标记检测 (ISEL)及单细胞凝胶电泳 (SCGE)等方法 ,研究低剂量棉酚与激素组合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响 ,分析不同剂量棉酚 (高剂量 10 0mg/(kg·d)、中剂量 6 0mg/(kg·d)及低剂量 12... 详细信息

采用检测细胞凋亡的微核 (MN)、原位末端标记检测 (ISEL)及单细胞凝胶电泳 (SCGE)等方法 ,研究低剂量棉酚与激素组合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响 ,分析不同剂量棉酚 (高剂量 10 0mg/(kg·d)、中剂量 6 0mg/(kg·d)及低剂量 12mg/(kg·d) )及维持量棉酚对生精细胞凋亡及DNA的作用。结果表明不同剂量的棉酚G与单剂量激素H(甲基睾丸素 2 0mg/(kg·d)、炔雌醇 10 0 (g/(kg·d) )合并用药 6周后 ,生精细胞的凋亡系数和微核率随棉酚剂量的增大而增加。高和中剂量棉酚组的凋亡系数分别为 3 5 2 0± 0 4 6 5和 2 0 2 0± 0 0 17,显著高于对照组 (0 2 33± 0 0 88)(P <0 0 5 )。微核率在高剂量组为 2 7 6 33± 3 75 5 ,显著高于对照组 (5 6 0 0± 1 137) (P <0 0 5 ) ;而低剂量组 (3 5 6 7±0 86 9)反而显著低于对照组。服低剂量棉酚G +H 6周后继续服单独低剂量棉酚 (12mg/(kg·d) ) 12周 ,单细胞凝胶电泳未见生精细胞出现DNA单链断裂的彗星状细胞核 ,与高、中剂量组较多的出现率形成明显对照。结果提示低剂量棉酚与甾体激素组合用药在睾丸生精过程中互为调节。

关键词：低剂量棉酚甾体激素联合用药大鼠生精细胞细胞凋亡单细胞凝胶电泳

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胆红素诱导神经细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响——胆红素对中枢神经细胞损伤机理的研究

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中华耳鼻咽喉科杂志 2002年第4期37卷 243-246,T001页

作者：韩张胡萍倪道凤中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院耳鼻咽喉科北京100730 中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所药理室

目的　观察胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡及对其线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential,MMP)的影响 ,探讨高胆红素血症对中枢神经细胞损伤的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法　将胆红素 (0 0 2g/L)直接作用... 详细信息

目的　观察胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡及对其线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential,MMP)的影响 ,探讨高胆红素血症对中枢神经细胞损伤的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法　将胆红素 (0 0 2g/L)直接作用于体外培养的SH SY5Y细胞 ,在不同时间点通过倒置显微镜观察细胞形态的变化及存活情况 ;经Hoechst332 5 8染色后 ,在荧光显微镜下观察细胞核的形态变化 ;利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率 ;经罗丹明 12 3染色后 ,用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。结果　在 0 0 2g/L胆红素作用下 ,SH SY5Y细胞 2h后即可见较多细胞皱缩、变圆 ,4h可见有少数细胞飘起 ,细胞轮廓不清 ,6h可见大部分细胞飘起 ,并已开始崩解 ;染色质在胆红素作用 6h出现典型的凋亡样改变 ;细胞凋亡率随作用时间的延长明显增加 ,3h为 19 4 % ,4h为 76 4 % ,6h达到 79 0 % ;在胆红素作用 1h后反映线粒体膜电位相对荧光强度即由 (16 6± 1 5 5 6 )U下降到 (7 11± 0 70 1)U ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,并随作用时间的延长而进一步降低。结论　胆红素作用早期即可导致SH SY5Y细胞线粒体膜电位下降 ,既而发生凋亡 ,提示通过诱导听觉中枢神经元凋亡可能在高胆红素血症所致的听力损伤和听神经病发病中起重要作?

关键词：胆红素脱噬作用线粒体膜电位 MMP 神经母细胞瘤听神经疾病细胞凋亡

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弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导ECV304组织因子基因表达及银杏内酯B的抑制作用

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基础医学与临床 2002年第3期22卷 241-244页

作者：陆晓茜李晓冬祖淑玉朱广瑾中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京100005

为研究弱氧化修饰低密度脂蛋白 (mmLDL)对ECV30 4组织因子 (TF)蛋白含量和mRNA水平的影响、对胞浆游离钙离子 ([Ca2 + ]i)的影响 ,以及银杏内酯B等的干预作用。采用ELISA法检测细胞内TF蛋白含量 ,用RT PCR法检测细胞内TFmRNA水平 ,用激... 详细信息

为研究弱氧化修饰低密度脂蛋白 (mmLDL)对ECV30 4组织因子 (TF)蛋白含量和mRNA水平的影响、对胞浆游离钙离子 ([Ca2 + ]i)的影响 ,以及银杏内酯B等的干预作用。采用ELISA法检测细胞内TF蛋白含量 ,用RT PCR法检测细胞内TFmRNA水平 ,用激光共聚焦显微镜观察 [Ca2 + ]i 的变化。结果显示 ,4 0mg LmmLDL作用ECV30 4 4h ,能使TF蛋白含量及mRNA水平显著增加 ,并迅速升高 [Ca2 + ]i。抗氧化剂银杏内酯B及PKC抑制剂Staurosporine可拮抗mmLDL的上述诱导反应。以上结果提示 ,mmLDL可诱导ECV30 4TF表达 ,Ca2 + 与PKC参与mmLDL诱导ECV30 4TF基因表达过程。

关键词：弱氧化修饰低密度脂蛋白组织因子钙 ECV304 银杏内酯B 抑制作用基因表达

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MAPK和Ca^(2+)通路对介导弱氧修饰LDL增强HUVECPAI-1活性

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基础医学与临床 2002年第6期22卷 530-533页

作者：祖淑玉李晓冬陆晓茜朱广瑾中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京10005

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白 (mmLDL)对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)活性的影响及促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)级联反应及第二信使Ca2 + 在其中作用。用mmLDL作用于传代培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,发色底物法检测PA... 详细信息

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白 (mmLDL)对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)活性的影响及促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)级联反应及第二信使Ca2 + 在其中作用。用mmLDL作用于传代培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,发色底物法检测PAI 1活性的变化 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化。结果显示 ,几种不同浓度的mmLDL(12 5～ 2 0 0mg/L)作用HUVEC 12h ,PAI 1活性显著增加。PD980 5 9(6 0 μmol/L)能阻断mmLDL对PAI 1活性的诱导反应。mmLDL(5 0mg/L)能显著诱导HUVEC胞内游离钙离子浓度增高。表明mmLDL作用HUVEC能诱导PAI 1活性明显增加 ;MAPK级联反应和胞内Ca2 + 可能起到重要作用。

关键词：内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂促分裂原活化蛋白激酶钙

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基因治疗与影像学

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中华放射学杂志 2002年第12期36卷 1151-1153页

作者：陆菁菁金征宇卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院放射科 100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

在临床医学研究领域，基因治疗代表了令人振奋的前沿，基因治疗的研究正在飞速地发展。到目前，外源基因的表达多是通过体外的实验来检测，比如聚合酶链反应、原位杂交和免疫组织化学染色等。但随着基因治疗从基础走向临床，这些体外方... 详细信息

在临床医学研究领域，基因治疗代表了令人振奋的前沿，基因治疗的研究正在飞速地发展。到目前，外源基因的表达多是通过体外的实验来检测，比如聚合酶链反应、原位杂交和免疫组织化学染色等。但随着基因治疗从基础走向临床，这些体外方法显示了较大的缺陷，即在临床试验中，不能无创、动态地获知转基因表达的部位、幅度和时间。因此，如何用体外的成像方法来监测转入基因的表达，这是基因治疗大规模进入试验前必须解决的问题。新近在影像技术方面的发展和突破，有望解决如上问题。放射学家只有熟悉基因治疗的原因、策略和新进展，才能跟进并从事这方面的前沿研究工作。笔者拟对基因治疗的原理和方法作简单介绍，并对影像学技术在基因治疗中的应用和进展作一综述。

关键词：基因治疗影像学免疫组织化学

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全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

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癌症 2002年第5期21卷 473-479页

作者：张雪峰任祖渊方福德左瑾苏长保王任直马文斌中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科北京100730 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

关键词：全反式维甲酸单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷胶质瘤基因治疗

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亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及血中同型半胱氨酸和叶酸水平与冠心病的关系

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中华心血管病杂志 2002年第9期30卷 515-519页

作者：方理刚朱文玲朱广瑾鄢盛凯中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院心内科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730

目的　观察高同型半胱氨酸 (HCY)血症是否为中国人冠心病 (CHD)的一个独立危险因素 ,以及探讨亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因多态性与冠心病的联系 ,并分析HCY、叶酸与MTHFR基因多态性间的相互关系。方法　选择CHD患者 16 1例 ,其中 ... 详细信息

目的　观察高同型半胱氨酸 (HCY)血症是否为中国人冠心病 (CHD)的一个独立危险因素 ,以及探讨亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因多态性与冠心病的联系 ,并分析HCY、叶酸与MTHFR基因多态性间的相互关系。方法　选择CHD患者 16 1例 ,其中 15 4例行冠状动脉造影证实。正常对照 12 5例。应用荧光免疫偏振法测定血浆HCY ,放免法测定血清叶酸 ,分析MTHFR基因多态性。结果　CHD患者血浆HCY浓度显著高于对照组 [分别为 (15 2 4± 9 5 9)与 (11 4 3± 6 4 4 ) μmol L ,P <0 0 1]。logistic回归分析显示性别、年龄、脂蛋白B和高HCY血症是CHD发病的独立危险因素 ,高HCY血症的优势比 (OR)为 2 5 70 7,其 95 %的可信区间 1 30 0 3～ 5 0 82 5。CHD组MTHFR基因C6 77T突变TT型的频率为 2 9 2 % ,明显高于对照组 16 8% (P =0 0 15 )。CHD组T等位基因频率显著高于对照组 (P =0 0 0 4 )。CHD组和对照组TT型的血浆HCY水平明显高于CT和CC型 (P <0 0 0 1)。CHD组各基因型的HCY水平均高于对照组 (P <0 0 0 1～ 0 0 1)。多元逐步回归显示 :血清叶酸浓度、TT型与血浆HCY浓度独立相关。CHD组和对照组的TT型中 ,血清叶酸水平 <对照组中位数时的HCY水平显著高于叶酸≥中位数时的HCY值。叶酸 <中位数时。

关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性同型半胱氨酸叶酸冠心病

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遗传性乳光牙本质家系致病基因的染色体定位

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中华口腔医学杂志 2002年第6期37卷 408-411页

作者：赵军吴丽更贾智张青松邢晓艳张晓海天津医科大学口腔医院牙体牙髓科 300070 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的　研究一个在天津塘沽地区发现的遗传性乳光牙本质回族家系致病基因是否与染色体 4q2 1连锁。方法　提取该家系 1 3名成员的外周血DNA ,选择染色体 4q2 1上的 8个短串联重复序列多态性标记 (shorttandemrepeatpolymorphisms ,STRPs... 详细信息

目的　研究一个在天津塘沽地区发现的遗传性乳光牙本质回族家系致病基因是否与染色体 4q2 1连锁。方法　提取该家系 1 3名成员的外周血DNA ,选择染色体 4q2 1上的 8个短串联重复序列多态性标记 (shorttandemrepeatpolymorphisms ,STRPs)做荧光标记PCR等位片段分析 ,用lod连锁分析法分析该家系致病基因位点与上述 8个STRPs的连锁关系。结果　得到 1 3名个体 8个位点的基因型和单体型 ,连锁分析结果显示 :8个STRPs的最大lod值均大于 0 ,其中 5个STRPs的lod值大于 1。结论　该家系致病基因定位在染色体 4q2 1上 ,表明中国回族人和报道的欧美人的DGI

关键词：遗传性乳光牙本质染色体定位牙本质生成不全遗传学串联重复序列多态性标记家系调查致病基因

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基因工程乳腺癌特异性人单链抗体的表达与特性

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基础医学与临床 2002年第4期22卷 324-327,329页

作者：张云王树蕙郭彩云李文辉扬帆中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所微生物及病原学室北京100005

研究解决分泌人单抗的杂交瘤细胞系难于稳定持久分泌抗体的难题 ,制备单链抗体 ,使单抗分子小型化 ,为进一步研究其在肿瘤诊断和治疗中的应用作准备。从分泌抗乳腺癌人单抗的杂交瘤细胞CM 1总RNA中 ,利用RT PCR技术分别扩增出人单抗重... 详细信息

研究解决分泌人单抗的杂交瘤细胞系难于稳定持久分泌抗体的难题 ,制备单链抗体 ,使单抗分子小型化 ,为进一步研究其在肿瘤诊断和治疗中的应用作准备。从分泌抗乳腺癌人单抗的杂交瘤细胞CM 1总RNA中 ,利用RT PCR技术分别扩增出人单抗重链可变区VH 基因和轻链可变区VL 基因 ,将扩增产物纯化后克隆于pGEM T载体中 ,进行DNA测序和序列比较分析后 ,将两者共克隆于表达载体中诱导表达 ,利用斑点免疫印迹及竞争抑制法检测表达产物的抗原性。所克隆的CM 1人单抗重链可变区和轻链可变区基因片段 ,分别属于人免疫球蛋白IgMⅢ亚群 ,和鼠κ轻链V亚群 ,ⅩⅦ家族 ,用斑点免疫印迹法检测可见表达产物能与人乳腺癌细胞特异结合 ;人CM 1单克隆抗体对此单链抗体与人乳腺癌细胞的结合有竞争性抑制作用 ,抑制率为 75 7%。结论成功地制备了可特异结合乳腺癌细胞的CM

关键词：基因工程乳腺癌人单克隆抗体CM-1 单链抗体斑点免疫印迹竞争抑制法

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