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中国生物化学与分子生物学报 2006年第6期22卷 484-490页

作者：田瑞李英娜宋婀莉高诗娟黄海明张玲马素参高友鹤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理学系北京100005

选择ZO-1的PDZ1结构域作为研究对象,以酵母双杂交为筛选系统,筛选随机多肽文库和与其它PDZ结构域的配体进行相互作用,阐明ZO-1PDZ1的配体结合特性.ZO-1PDZ1识别配体C末端保守的氨基酸序列通式可以表示为[S/T][F/Y/W][V/I/L/C]-COOH、[S/... 详细信息

选择ZO-1的PDZ1结构域作为研究对象,以酵母双杂交为筛选系统,筛选随机多肽文库和与其它PDZ结构域的配体进行相互作用,阐明ZO-1PDZ1的配体结合特性.ZO-1PDZ1识别配体C末端保守的氨基酸序列通式可以表示为[S/T][F/Y/W][V/I/L/C]-COOH、[S/T][K/R]V-COOH、V[F/Y/W][L/C]-COOH、EYV-COOH.研究发现ZO-1PDZ1的配体同时具有3种传统PDZ结构域配体的特点,不同的是其结合配体-1位对芳香族氨基酸具有强烈的偏好性.并且某些PDZ结构域配体的-1位和-3位对结构域与配体相互作用的特异性和亲和力有重要的作用.随后通过生物信息学的方法在Swiss-Prot数据库找到与此识别规律相符合的天然人类蛋白质.根据蛋白质的功能和细胞定位等性质选择10个配体用酵母双杂交验证相互作用.证实的相互作用配体有4个.本研究希望用这样的研究策略建立一种有效的研究蛋白质相互作用的方法,通过在全蛋白质组规模上对含有结合配体保守氨基酸序列的蛋白质的查询,理论上可以找到现有数据库中所有可能与目的结构域结合的潜在配体蛋白,特别是那些筛选cDNA文库不容易获得的低丰度配体.

关键词：蛋白质相互作用 PDZ结构域酵母双杂交生物信息学

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肿瘤休眠

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中华病理学杂志 1997年第3期26卷 187-189页

作者：刘玉琴高进中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理研究室

肿瘤休眠刘玉琴高进一、肿瘤休眠的概念及历史肿瘤休眠（ｔｕｍｏｒｄｏｒｍａｎｃｙ）最早是临床上观察到的一种现象。早在１９５４年，Ｈａｄｆｉｅｌｄ就指出乳腺癌、黑色素瘤、直肠癌等实体瘤在原发肿瘤被切除以后，继发瘤的出现超... 详细信息

肿瘤休眠刘玉琴高进一、肿瘤休眠的概念及历史肿瘤休眠（ｔｕｍｏｒｄｏｒｍａｎｃｙ）最早是临床上观察到的一种现象。早在１９５４年，Ｈａｄｆｉｅｌｄ就指出乳腺癌、黑色素瘤、直肠癌等实体瘤在原发肿瘤被切除以后，继发瘤的出现超过２年以上，甚至在４年、１４年或４...

关键词：肿瘤休眠动物模型

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α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

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中华医学杂志 2009年第4期89卷 266-270页

作者：于晓红王小明斯琴郭恒怡吴其夏大连医科大学附属第一医院心内科 116011 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理系

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定... 详细信息

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定细胞内ROS的产生量；用RT-PCR测定p47^phox mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47^phox蛋白的表达；用Western印迹测定ERK2及核因子（NF）-κB、应激蛋白（SP-1）和活化因子蛋白的表达。结果TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155，4％；α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF—α对ROS的诱导效应。TNF-α作用细胞24h后，p47^phox的mRNA表达水平较对照组高212．8％，蛋白的表达也明显高；α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47^phox mRNA表达水平低63．0％，蛋白表达水平也明显下降。p47^phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生。α-玉米赤霉醇预处理和p47^phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位，明显地抑制了NF—κB的核转位。结论α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF—α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路，主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47^phox亚基的表达。

关键词：活性氧肿瘤坏死因子α 内皮细胞 α-玉米赤霉醇

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血小板源生长因子可促进低氧的牛肺动脉平滑肌细胞核内NF-κB表达

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中国病理生理杂志 2000年第5期16卷 428-431,I000页

作者：黄群华孙仁宇中国医学科学院基础医学研究所北京100005 中国协和医科大学基础医学院病理生理研究室北京100005

目的：为探讨血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）受体信号转导途径的介质分子之一过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）在低氧的肺动脉平滑肌细胞（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｙ　ｓｍ... 详细信息

目的：为探讨血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）受体信号转导途径的介质分子之一过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）在低氧的肺动脉平滑肌细胞（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｙ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌ，　ＰＡＳＭＣ）增殖中是否起作用。方法：应用共聚焦显微镜、细胞免疫组织化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交等方法，检测了低氧的ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ受体途径中的Ｈ２Ｏ２的变化及ＰＤＧＦ和Ｈ２Ｏ２对细胞核内与增殖作用相关的核转录日子ＮＦ－κＢ表达量的影响。结果：ＰＤＧＦ可使常氧的ＰＡＳＭＣ中Ｈ２Ｏ２浓度增高，但明显降低低氧的ＰＡＳＭＣ中Ｈ２Ｏ２的量；同一浓度的Ｈ２Ｏ２，作用于常氧的ＰＡＳＭＣ，则引起核ＮＦ－κＢ的表达量增加，但对低氧的ＰＡＳＭＣ核ＮＦ－κＢ有明显的抑制作用；同时加入ＰＤＧＦ和Ｈ２Ｏ２的低氧的ＰＡＳＭＣ较仅以Ｈ２Ｏ２作用的低氧的ＰＡＳＭＣ，核ＮＦ－κＢ的量显著增加。结论：ＰＤＧＦ受体的信号转导途径在低氧的ＰＡＳＭＣ同常氧的ＰＡＳＭＣ相反，Ｈ２Ｏ２为抑制因子，对细胞可能产生损伤作用，ＰＤＧＦ可抑制低氧的ＰＡＳＭＣ产生Ｈ２Ｏ２并达到促进ＮＦ－κＢ表达增强的目的，

关键词：血小板源生长因子 NF-kB 肺动脉平滑肌细胞

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载脂蛋白AⅠ基因启动子G/A置换多态性和饮酒的联合作用对凉山地区彝汉人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响

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中华病理学杂志 2000年第5期29卷 343-346页

作者：赵庆伟申萍张华周梦玲佘铭鹏武警医学院病理学教研室 300162 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理研究室北京100005

目的　探讨载脂蛋白AⅠ (apoAⅠ )启动子 - 75bp处G/A嘌呤置换和少量饮酒对凉山地区彝族及汉族人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响。方法　现场调查随机抽样 742名凉山州 15周岁以上彝汉健康居民 ,包括 3个人群样本 :彝族农民、彝族移民、... 详细信息

目的　探讨载脂蛋白AⅠ (apoAⅠ )启动子 - 75bp处G/A嘌呤置换和少量饮酒对凉山地区彝族及汉族人群血浆载脂蛋白AⅠ水平的影响。方法　现场调查随机抽样 742名凉山州 15周岁以上彝汉健康居民 ,包括 3个人群样本 :彝族农民、彝族移民、汉族居民。根据饮酒折合的乙醇量将两民族人群分为 4组 :不饮酒者、1～ 2 5g/d的饮酒者、2 6～ 75g/d的饮酒者、75g/d以上的饮酒者。采集每人清晨空腹血样 10ml作有关血脂和脂蛋白水平测定。此外 ,还自冷冻血凝块中抽提基因组DNA ,经PCR扩增 ,进行片段长度多态性分析。结果　随饮酒量的一定增加 ,血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL C)和apoAⅠ水平呈轻度升高。在彝族农民样本和汉族居民样本中差异有非常显著性意义。 3组人群样本间的A等位基因频率相似。在A等位基因携带者和GG基因型携带者的各项血脂水平间差异未见显著性意义。但在不饮酒人群中 ,A等位基因携带者的apoAⅠ水平明显高于GG基因型携带者 ;在饮酒人群中 ,A等位基因携带者的apoAⅠ和HDL C水平明显低于GG基因型携带者 ,这一差异在城镇居民中有显著性意义 (P <0 .0 5 )。在不饮酒的人群中 ,G/A置换可以解释 18%的个体间apoAⅠ水平变异 (F =8.94,P <0 .0 1)。结论　适量饮用低度酒

关键词：载脂蛋白AI 乙醇冠心病 G/A置换多态性启动子

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人白细胞介素2基因转移对小鼠B_（16）黑色素瘤细胞生长转移特性的影响

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中华病理学杂志 1996年第5期25卷 280-283页

作者：牛桂莲龚伊红董继红北京，中国医学科学院基础医学研究所 100005 中国协和医科大学基础医学院病理室

人白细胞介素２基因转移对小鼠Ｂ_（１６）黑色素瘤细胞生长转移特性的影响牛桂莲龚伊红董继红人白细胞介素２基因转移对小鼠Ｂ_（１６）黑色素瘤细胞生长转移特性的影响@牛桂莲@龚伊红@董继红... 详细信息

人白细胞介素２基因转移对小鼠Ｂ_（１６）黑色素瘤细胞生长转移特性的影响牛桂莲龚伊红董继红人白细胞介素２基因转移对小鼠Ｂ_（１６）黑色素瘤细胞生长转移特性的影响@牛桂莲@龚伊红@董继红...

关键词：黑色素瘤白细胞介素2 基因转移

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恶性肿瘤体内外生长和发展过程与细胞外基质相关性的研究

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中华肿瘤杂志 1998年第2期20卷 112-115页

作者：王芳高进昆明医学院病理学教研室中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所病理研究室

目的探讨细胞外基质在肿瘤侵袭转移中的作用。方法利用小鼠肺腺癌细胞母系ＬＡ７９５移植于Ｔ７３９小鼠皮下和肾包膜下，以及人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ移植于裸小鼠皮下等体内移植模型，通过间接免疫酶标和间接免疫荧光技术，测定纤... 详细信息

目的探讨细胞外基质在肿瘤侵袭转移中的作用。方法利用小鼠肺腺癌细胞母系ＬＡ７９５移植于Ｔ７３９小鼠皮下和肾包膜下，以及人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ移植于裸小鼠皮下等体内移植模型，通过间接免疫酶标和间接免疫荧光技术，测定纤维粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）与Ⅳ型胶原（ⅣＣ）在肿瘤移植后不同时间的表达，并利用多种体外实验方法（琼脂糖滴瘤细胞移动实验、软琼脂上瘤细胞集落生长速度测定、斑点杂交等），分析瘤细胞运动能力、瘤细胞集落生长速度等与ＬＮ、ＦＮ和ⅣＣ之间的关系。结果随着肿瘤的生长，ＦＮ、ＬＮ与ⅣＣ的表达均增强，且呈不同的分布；外源性ＦＮ、ＬＮ及ⅣＣ能提高瘤细胞的体外运动能力和促进瘤细胞集落的体外生长。结论细胞外基质的分布及其合成和降解的变化，与恶性肿瘤的侵袭和转移有关，对预测肿瘤生物学行为有参考价值。观察细胞外基质与瘤细胞侵袭的关系。

关键词：恶性肿瘤肿瘤移植细胞外基质动物模型

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脐静脉内皮细胞组织因子及其抑制物表达中银杏内酯B的干预效应

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第6期11卷 1053-1056页

作者：刘伟朱自强祖淑玉朱广瑾中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理学系北京市100005

目的:观察银杏内酯B在氧化低密度脂蛋白诱导的脐静脉内皮细胞组织因子及其抑制物表达中的干预作用。方法:实验于2005-08/12在中国协和医科大学基础医学院病理生理学系实验室进行。采用Ⅰ型胶原酶消化分离脐静脉内皮细胞,进行原代培养至2... 详细信息

目的:观察银杏内酯B在氧化低密度脂蛋白诱导的脐静脉内皮细胞组织因子及其抑制物表达中的干预作用。方法:实验于2005-08/12在中国协和医科大学基础医学院病理生理学系实验室进行。采用Ⅰ型胶原酶消化分离脐静脉内皮细胞,进行原代培养至2～4代。实验分组如下:①正常对照组。②氧化低密度脂蛋白刺激组(60mg/L,氧化低密度脂蛋白作用12h)。③银杏内酯B+氧化低密度脂蛋白刺激组(预先给予20,40,80,100mg/L的银杏内酯B作用1h后,再给予60mg/L氧化低密度脂蛋白作用12h)。每组实验重复3次。分别采用发色底物法和RT-PCR技术检测脐静脉内皮细胞中组织因子和组织因子途径抑制物蛋白活性及mRNA水平的变化。结果:正常对照组脐静脉内皮细胞组织因子表达量很低,氧化低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞12h后,组织因子蛋白活性[(17.770±1.721),(2.352±0.240)U/mL,P<0.05]及mRNA水平(1.21±0.06,0.32±0.03,P<0.05)明显升高,银杏内酯B可呈剂量依赖性地抑制组织因子蛋白活性升高;组织因子途径抑制物的变化与组织因子相反,氧化低密度脂蛋白作用脐静脉内皮细胞12h后,组织因子途径抑制物蛋白活性及mRNA水平分别比对照组降低了33.8%和64.2%,但预先给予不同浓度的银杏内酯B,对组织因子途径抑制物的表达无显著影响。结论:银杏内酯B呈剂量依赖性抑制氧化低密度脂蛋白诱导的脐静脉内皮细胞组织因子蛋白活性和mRNA的表达,但对氧化低密度脂蛋白所致组织因子抑制物蛋白活性和mRNA水平的降低无显著影响。

关键词：银杏内酯B 氧化低密度脂蛋白组织因子组织因子途径抑制物

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尼古丁对脐静脉内皮细胞蛋白激酶C和Ras蛋白活性及胞浆钙浓度的影响

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基础医学与临床 2001年第5期21卷 428-431页

作者：周卫辉陈祥银中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化 ,用γ 32 P ATP掺入法检测PKC活性 ,用GST RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含... 详细信息

为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化 ,用γ 32 P ATP掺入法检测PKC活性 ,用GST RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含量。观察到 (1～ 5 ) 10 - 4 mol L尼古丁使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i 迅速增加 ,峰值约超过基础值 5 0 %～ 2 0 0 % ,钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应 ;10 - 4 mol L尼古丁作用 1～ 12h后胞浆PKC活性明显降低 ;而胞膜PKC活性则升高。 10 - 4 ～ 10 - 3 mol L尼古丁作用于人脐静脉内皮细胞 10～ 30min可使活化的Ras蛋白含量增加。以上结果提示尼古丁可使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i

关键词：尼古丁钙蛋白激酶C Ras蛋白内皮细胞

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顺式调控元件NF-κB在尼古丁诱导ICAM-1表达中的作用

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中国病理生理杂志 2003年第2期19卷 145-149页

作者：周卫辉陈祥银中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测... 详细信息

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测尼古丁刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果 :成功构建了 6种含有不同长度ICAM - 1基因启动子序列以及启动子中NF -κB和Sp - 1位点突变序列的荧光素酶报告基因质粒。与对照组相比尼古丁可促进含有启动子序列 - 579bp(pGL3E - 579/ +36) (P <0 .0 5) ,- 2 30bp (pGL3E - 2 30 / +36) (P<0 .0 5)以及启动子Sp- 1位点突变体 (pGL3E -Sp - 1 -MU) (P <0 .0 5)的荧光素酶基因表达 ,而下游NF -κB位点的删切重组体 (pGL3E - 1 34/ +36)和含有NF -κB位点突变体 (pGL3E -NF -κB -MU)的重组荧光素酶报告基因质粒在尼古丁诱导下与对照组相比荧光素酶表达量无明显差异。结论 :ICAM - 1基因启动子顺式作用元件下游NF -κB位点在尼古丁诱导ICAM -

关键词：烟碱 NF-κB 细胞粘着因子

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