检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2005年第7期25卷 653-656页

作者：文中伟狄文娜董秀华阴彬强伯勤袁建刚彭小忠中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表... 详细信息

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C,再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较。结果每升培养产物可获得纯度≥90%的重组融合蛋白约50 mg,重组GST-3C在4℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性。结论GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化(TAP)系统提供又一种酶切工具。

关键词：人鼻病毒 3C蛋白酶表达纯化

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HLA-DRB基因启动子区多态性与肺结核合并2型糖尿病的相关性

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基础医学与临床 2005年第6期25卷 521-524页

作者：时广利岳思东邱长春胡秀玲宋长兴北京市结核病胸部肿瘤研究所免疫室北京101149 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的研究HLADRB基因启动子区序列与肺结核合并2型糖尿病的相关性。方法用PCRSSP法进行HLADRB基因分型,启动子区扩增产物直接测序。结果病例组DRB109等位基因的频率显著高于对照组(P<0.05)。病例组中DRB基因启动子区-65位碱基T和-8位A... 详细信息

目的研究HLADRB基因启动子区序列与肺结核合并2型糖尿病的相关性。方法用PCRSSP法进行HLADRB基因分型,启动子区扩增产物直接测序。结果病例组DRB109等位基因的频率显著高于对照组(P<0.05)。病例组中DRB基因启动子区-65位碱基T和-8位AG杂合子的频率明显增加(P<0.05)。病例组中DRB109阳性标本-65位碱基T的频率明显增加,G明显减少(P<0.01);+39位碱基C明显增加,T明显减少(P<0.01)。结论DRB109等位基因及HLADRB启动子区多态性与肺结核合并2型糖尿病密切相关。

关键词：启动子区多态性 2型糖尿病肺结核相关性 HLA-DRB基因分型 PCR-SSP法基因启动子区等位基因病例组直接测序扩增产物阳性标本对照组频率杂合子碱基

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三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病

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基础医学与临床 2005年第11期25卷 982-985页

作者：陶玉斌许琪中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

三核苷酸重复序列扩增是三核苷酸重复序列的拷贝数在世代传递中逐渐增加的一种基因动态突变,现已发现近20种疾病的发生与这一突变相关。本文就近年来国际上关于三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病研究的一些成果进行综述,主要内容包括... 详细信息

三核苷酸重复序列扩增是三核苷酸重复序列的拷贝数在世代传递中逐渐增加的一种基因动态突变,现已发现近20种疾病的发生与这一突变相关。本文就近年来国际上关于三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病研究的一些成果进行综述,主要内容包括:①三核苷酸重复序列扩增相关疾病的分类;②三核苷酸重复序列扩增与疾病的早现遗传现象;③三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病的发病机制研究;④精神系统疾病相关基因内三核苷酸重复序列的研究。

关键词：三核苷酸重复序列扩增精神系统疾病

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FasL N-端编码序列对其表达的影响

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基础医学与临床 2005年第7期25卷 624-627页

作者：李健郑德先刘彦信中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨Fas配体(Fas ligand, FasL)胞内区氨基酸组成对膜型FasL蛋白表达的影响.方法 PCR技术扩增FasL胞内区产生不同缺失的cDNA,构建重组表达质粒;使用脂质体转染法将表达质粒导入靶细胞;RT-PCR分析FasL mRNA水平;荧光抗体染色、流式... 详细信息

目的探讨Fas配体(Fas ligand, FasL)胞内区氨基酸组成对膜型FasL蛋白表达的影响.方法 PCR技术扩增FasL胞内区产生不同缺失的cDNA,构建重组表达质粒;使用脂质体转染法将表达质粒导入靶细胞;RT-PCR分析FasL mRNA水平;荧光抗体染色、流式细胞仪和Western免疫印迹技术检测细胞中FasL蛋白的表达.结果 FasL N-端缺失第2～16氨基酸残基后,FasL蛋白在细胞中的表达水平显著增加,但mRNA水平不变.结论 FasL N-端第2～16氨基酸残基对FasL蛋白表达水平具有自我调节作用.

关键词： FasL 胞内区表达调控

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核心组蛋白及染色质组装相关因子的分离、表达及纯化

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基础医学与临床 2005年第10期25卷 948-952页

作者：莫志成张勇李宏帆吴宁华沈(王羽)琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并... 详细信息

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并用离子交换或亲和层析方法进行了纯化。结果本实验报道了制备几种核内蛋白因子的表达与纯化方法和条件,为体外组装染色质模板提供了必要基础。

关键词：染色质组装组蛋白 NAP-1 Acf-1 ISWI

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用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA

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基础医学与临床 2005年第3期25卷 214-218页

作者：盛德乔陆瑜李宏帆吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和... 详细信息

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。

关键词： NIRS 结合蛋白人IL-2 筛选 Ra基因杂交系统酵母白细胞介素2受体人外周血淋巴细胞 DNA结合结构域 Jurkat细胞相互作用 HTLV-1 cDNA文库 cDNA克隆反式作用因子 RNA聚合酶阳性克隆 Ku抗原杂交体 gal 假阳性 SAP C末端

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成体干细胞

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基础医学与临床 2005年第10期25卷 5-10页

作者：吴皖陈建河赵春华中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程研究中心实验血液学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程研究中心实验血液学国家重点实验室

在胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞统称成体干细胞。成体干细胞具有自我更新的能力,并且可以分化成与其来源不同的其他组织类型的细胞。一种组织来源的干细胞可分化成各种类型的细胞,即干细胞可塑性。成体干细胞可塑性是成体... 详细信息

在胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞统称成体干细胞。成体干细胞具有自我更新的能力,并且可以分化成与其来源不同的其他组织类型的细胞。一种组织来源的干细胞可分化成各种类型的细胞,即干细胞可塑性。成体干细胞可塑性是成体干细胞应用于临床的基础,但对干细胞可塑性机制的认识学术界仍存在较大的争议,先后有学者提出脱分化、异质细胞群体和细胞融合等学说,但都不能完全解释成体干细胞的可塑性。近年来的研究提示,成体组织中存在多潜能干细胞,我们发现在胚胎发育后的多种组织中都存在一类原始干细胞群体,在体内、外的特殊环境下,这类原始干细胞可分化为不同胚层的组织细胞,我们称其为亚全能干细胞。亚全能干细胞是存在于人体多种组织中的分化潜能介于从人体胚胎干细胞逐渐形成组织多能干细胞的发育过程中的一种原始干细胞亚群。

关键词：成体干细胞可塑性亚全能干细胞

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鼻咽癌患者外周血γδT细胞对鼻咽癌细胞的细胞毒活性测定

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005年第6期40卷 466-468页

作者：王小路何维张素梅何洪彬张连山姜鸿武警总医院耳鼻咽喉科北京100039 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫研究室北京协和医院耳鼻咽喉科

T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽... 详细信息

T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者及6例健康人外周血的γδT细胞,经原代NPC细胞同步培养,得到高纯度的NPC细胞.流式细胞仪检测γδT细胞纯度,研究两种来源的γδT细胞对Daudi、CNE1、CNE2和新建的传代培养NPC细胞的细胞毒作用,探讨NPC患者外周血中γδT细胞的抗肿瘤作用.

关键词： γδT细胞鼻咽癌细胞鼻咽癌患者活性测定主要组织相容性复合体 carcinoma receptor 流式细胞仪检测抗原呈递分子 T细胞受体免疫球蛋白抗体固相法 Daudi 细胞毒作用抗肿瘤作用 C细胞 cell γδ表型识别抗原抗原分子

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多聚丙氨酸延展突变与人类遗传病

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基础医学与临床 2005年第11期25卷 986-991页

作者：赵秀丽张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

三核苷酸重复的延展突变是导致遗传病的重要机制之一。根据产生机制和遗传特点的不同,可将其分为2类:一类是引起多种神经系统遗传病的动态突变;另一类就是本文重点介绍的多聚丙氨酸延展(polyalanine expan-sion,PAE)突变。PAE是指编码... 详细信息

三核苷酸重复的延展突变是导致遗传病的重要机制之一。根据产生机制和遗传特点的不同,可将其分为2类:一类是引起多种神经系统遗传病的动态突变;另一类就是本文重点介绍的多聚丙氨酸延展(polyalanine expan-sion,PAE)突变。PAE是指编码多聚丙氨酸的不完全GCN(N为A、C、G或T中任意一种)三核苷酸重复的延展,其结果是蛋白中多聚丙氨酸链的氨基酸数增多。PAE突变能在世代间稳定传递,其产生机制可能为等位基因间的不等交换。迄今为止,已在9种遗传病中发现PAE突变。本文将对PAE突变及所致遗传病作一介绍。

关键词：遗传病突变多聚丙氨酸延展三核苷酸重复

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BALB/c小鼠衰老过程中大脑皮质组织基因表达的改变

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中华老年医学杂志 2005年第3期24卷 205-208页

作者：陈等张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

　目的　鉴别和克隆小鼠衰老相关基因,为揭示人体衰老机制提供线索。　方法　利用改进逆转录多聚酶链反应 (DDRT PCR) 技术分析了 4 月龄和 24 月龄 BALB/c小鼠大脑皮质组织中mRNA的差异表达。　结果　确定了42个差异表达 cDNA片段,在... 详细信息

　目的　鉴别和克隆小鼠衰老相关基因,为揭示人体衰老机制提供线索。　方法　利用改进逆转录多聚酶链反应 (DDRT PCR) 技术分析了 4 月龄和 24 月龄 BALB/c小鼠大脑皮质组织中mRNA的差异表达。　结果　确定了42个差异表达 cDNA片段,在衰老小鼠中表达上调和下调者各21个。其中17个为已知编码蛋白功能的基因片段,12个为已知基因序列但未知功能的基因片段,13个可能为新基因片段。在已知蛋白功能的基因中,与氧化应激、能量产生和蛋白质代谢等相关的基因分别为2个、3个和4个,此外还有参与细胞凋亡、神经退行性变和生长发育调节等基因表达的改变。　结论　小鼠衰老可能与机体氧化应激状态、能量产生和蛋白质代谢等的改变有关。

关键词：改变大脑皮质 BALB/c小鼠基因表达氧化应激差异表达基因片段衰老相关基因新基因克隆

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