检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：韩张胡萍倪道凤中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所

目的:观察 P38激酶特异性抑制剂 SB203580及反义 P38激酶 cDNA 对胆红素诱导人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响,探讨 P38激酶信号转导通路在胆红素诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听... 详细信息

目的:观察 P38激酶特异性抑制剂 SB203580及反义 P38激酶 cDNA 对胆红素诱导人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响,探讨 P38激酶信号转导通路在胆红素诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法:分别经 SB203580和二甲基亚砜预处理的 SH-SY5Y 细胞在胆红素作用3h 和5h 后, 在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义 P38cDNA 的真核表达载体 pcDNA3.0-antiP38导入 SH-SY5Y 细胞,建立稳定低表达 P38蛋白的细胞株,经 Western blotting 鉴定后命名为 SH-SY5Y-antiP38,而转染空载体 pcD-NA3.0的 SH-SY5Y 细胞株则命名为 SH-SY5Y-pcDNA3.0;SH-SY5Y-antiP38细胞和 SH-SY5Y-pcD-NA3.0细胞分别经胆红素作用3h 和5h,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果:在0.02g/L 胆红素作用下,流式细胞仪显示与对照相比 SB203580预处理的 SH-SY5Y 细胞在胆红素作用 3h 后,其凋亡细胞由19.4%下降到12.1%,5h 后由66.2%降到39.3%;与 SH-SY5Y-pcDNA3.0细胞相比,SH-SY5Y-antiP38细胞在胆红素作用3h 后,其凋亡细胞由11.1%降到8.02%,5h 后67%降到23.4%。结论:P38激酶参与了胆红素诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡的信号转导。P38通路的激活可能在高胆红素血症导致的神经细胞损伤中(包括听神经细胞)发挥重要作用。

关键词：胆红素凋亡信号转导 P38激酶神经母细胞瘤听神经病

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内皮抑素和血管生成抑素融合基因的裂解病毒对C6胶质瘤的实验研究

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中华神经外科杂志 2008年第1期24卷 69-72页

作者：王建交杨立庄刘福生金贵善柴奇彭小忠(点评) 北京市神经外科研究所首都医科大学附属北京天坛医院100050 哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angi... 详细信息

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angio融合蛋白的表达。建立大鼠C6模型，当肿瘤体积≥2mm^3时，治疗组瘤腔内注射10^7pfu（10μl）病毒，对照组注射等剂量生理盐水。MRI动态观察肿瘤体积变化，组织病理行微血管计数，并记录荷瘤鼠生存时间。结果体外实验示：当感染率（MOI）=1000时，99％的C6细胞死亡；头部MRI发现治疗组胶质瘤生长减慢；荷瘤鼠存活期：对照组（20．3±0．45）d，治疗组（38．3±0．96）d，中位生存期延长（P〈0．01）；HE染色见瘤细胞分散，体积较小，无出血坏死；病理染色示：治疗组和对照组新生血管均值分别为（5．3±1．7）／HP和（15．6±2．8）／HP（P〈0．01）。结论重组单纯疱疹病毒介导的Endo-Angio融合基因不仅通过抑制肿瘤的新生血管生成，而且通过裂解肿瘤细胞双重作用治疗颅内胶质瘤。

关键词：内皮抑素血管生成抑素血管生成 C6胶质瘤病毒-基因治疗

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人干燥综合征A抗原重组体的构建及鉴定

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医学研究杂志 2008年第2期37卷 47-49页

作者：李倩高扬倪安平于孟学朱立平刘音李永哲林嘉友甘晓丹中国医学科学院/中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730 中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学研究所免疫研究室北京100005

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-52kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSA-52kDcDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取人源Hela细胞总RNA作为模板,... 详细信息

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-52kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSA-52kDcDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取人源Hela细胞总RNA作为模板,反转录RT-PCR扩增人干燥综合征SSA-52kD抗原cDNA。PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠杆菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSA-52kD。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对DNA测序结果进行鉴定分析。结果RT-PCR扩增产物为1447bp。重组质粒PET-30a-SSA-52kD经BglⅡ和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段。序列分析提示与GenBank中检索到的一致。结论成功克隆人SSA-52kD基因,并构建重组质粒PET-30a-SSA-52kD。

关键词：人干燥综合征A抗原 cDNA克隆重组体

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重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

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中国现代医药杂志 2008年第3期10卷 8-11页

作者：王胜芬韩佩珍穆传杰赵明辉卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所核医学室天津市分子核医学重点实验室天津300192 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至... 详细信息

目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实。将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在***中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。

关键词：重组脂联素融合蛋白可溶性生物学活性

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慢性鼻-鼻窦炎细菌生物膜形态观察

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2008年第11期43卷 840-844页

作者：张孜李云川韩晔华戴威张盛忠周兵张罗王德云韩德民张永杰首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科北京市耳鼻咽喉科研究所耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室 100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所电镜室新加坡国立大学医学院耳鼻咽喉科研究室

目的观察慢性鼻一鼻窦炎患者，鼻内镜所取钩突、筛泡或上颌窦黏膜样本是否存在细菌生物膜及其形态特征。方法本实验共取鼻内镜术中黏膜样本12份，实验组为慢性鼻．鼻窦炎鼻内镜手术患者6例，对照组为阻塞性睡眠呼吸暂停综合征鼻内镜手... 详细信息

目的观察慢性鼻一鼻窦炎患者，鼻内镜所取钩突、筛泡或上颌窦黏膜样本是否存在细菌生物膜及其形态特征。方法本实验共取鼻内镜术中黏膜样本12份，实验组为慢性鼻．鼻窦炎鼻内镜手术患者6例，对照组为阻塞性睡眠呼吸暂停综合征鼻内镜手术患者6例。样本用标准的扫描电镜方法处理。实验组详细记录患者的年龄、性别、症状、鼻窦cT、鼻内镜检查和变应原皮肤点刺试验结果。结果扫描电镜下见慢性鼻一鼻窦炎患者鼻腔鼻窦黏膜纤毛缺失、倒伏、排列紊乱，实验组中5例可见不同形成阶段、各种形态的细菌生物膜，1例可见丝状真菌样结构。实验组细菌生物膜出现率为83．3％。对照组6例均未观察到细菌生物膜。结论慢性鼻一鼻窦炎鼻腔鼻窦黏膜纤毛有不同程度的损伤，黏膜表面存在处于生命周期不同阶段的细菌生物膜。

关键词：鼻窦炎鼻黏膜生物膜显微镜检查电子扫描

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α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY所致血管内皮调节机制的比较研究

α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY所致血管内皮调节机制的比较...

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：洪倪段金虹张彦东吴云清蒋东桥戴顺龄王雯中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院首都医科大学病理生理教研室

复制去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)模型,比较植物雌激素α-玉米赤霉孵(α-ZAL)、大豆异黄酮主要成分染料木素(GST)和17β雌二醇(17βE2)对血管内皮的保护作用。雌性大鼠行OVX后分组:①正常对照;②假手术+2.5%蛋氨酸;③OVX+蛋氨... 详细信息

复制去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)模型,比较植物雌激素α-玉米赤霉孵(α-ZAL)、大豆异黄酮主要成分染料木素(GST)和17β雌二醇(17βE2)对血管内皮的保护作用。雌性大鼠行OVX后分组:①正常对照;②假手术+2.5%蛋氨酸;③OVX+蛋氨酸;④OVX+蛋氨酸+GST;⑤OVX+蛋氨酸+α-ZAL。GST和α-ZAL分别隔日肌注250μg/0.25 mL/12周。测定HCY和ET-1浓度,RT-PCR法检测血管内皮ET-1 mRNA表达;主动脉作病理制片。结果显示:血浆HCY含量(μmol/L)按组序①3.19±0.19*;②20.624±1.771*;③49.9±5.01;④14.41±0.15*,21.83±1.80*⑤20.06±3.33*,*与③比较,P<0.01。ET-1 (pg/mL)含量按组序①100.46±13.12*;②93.23±11.05*;③244.22±23.30;④80.92±12.46*;⑤94.56±11.93*,*与③组比较P<0.01,血管内皮ET-1 mRNA的表达与③组比较P<0.01。病理:OVX+蛋氨酸组血管内皮明显损伤,部分内膜增厚,有泡沫样细胞浸润,聚集呈小团状,肌层正常,假手术组、β-ZAL、GST和17βE2组血管内膜大致正常,未见明显的炎性细胞浸润。结论:α-ZAL、GST和17βE2均能降低HCY含量,α-ZAL低于GST。α-ZAL、GST和17βE2减少ET-1分泌和ET-1 mRNA表达调节血管内皮助能。主动脉血管病理显示α-ZAL、GST和17βE2在内皮保护作用相似。

关键词： α-ZAL 17βE2 GST HHCY ET-1mRNA

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α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY模型子宫内膜和乳腺上皮作用的病理学比较

α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY模型子宫内膜和乳腺上皮作用...

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：张彦东段金虹洪霓吴云清蒋东桥王雯戴川页龄中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院首都医科大学病理生理教研室

植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)、大豆异黄酮中主要成分染料木素(GST)和17βE2对血管内皮的保护作用相类似,本文从病理学角度比较三种激素对去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)子宫内膜和乳腺上皮的增殖作用。用雌性大鼠行去势术... 详细信息

植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)、大豆异黄酮中主要成分染料木素(GST)和17βE2对血管内皮的保护作用相类似,本文从病理学角度比较三种激素对去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)子宫内膜和乳腺上皮的增殖作用。用雌性大鼠行去势术后分组,①正常对照组;②假手术组+2.5%蛋氨酸;③OVX +蛋氨酸;④OVX+蛋氨酸+GST;⑤OVX+蛋氨酸+α-ZAL,且GST和α-ZAL分别隔日肌注250μg/ 0.25 mL/12周。测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度;子宫和乳腺作病理制片。结果显示:血浆HCY含量(μmol/L)按组序①3.25±0.14*;②20.62±1.78*;③51.58±4.58;④14.38±0.14*;⑤22.59±1.60*,*与③比较P<0.01。子宫指数按组序①0.18±0.07;②0.19±0.05;③0.03±0.01*;④0.04±0.01*;⑤0.07±0.02*,*与③比较P<0.01。病理:OVX+蛋氨酸组乳腺萎缩,腺体明显减少,纤维增生:子宫内膜萎缩,腺体减少,平滑肌萎缩;17βE2组乳腺上皮明显增生,腺体增多;子宫内皮明显增生、增厚,腺体明显增多部分鳞化,肌层明显增厚;α-ZAL和GST两组乳腺上皮与子宫内膜略增生,腺体增生不明显,肌层大致正常,其余各组基本正常。结论:α-ZAL、GST和17βE2均能降低HHCY大鼠血浆的HCY含量,α-ZAL略优于GST。17βE2组子宫指数明显升高,α-ZAL和GST组略高于正常组。α-ZAL和GST在促进子宫内膜和乳腺增生方面明显低于17βE2,与GST相比α-ZAL略优于GST。

关键词： α-ZAL 17βE2 GST HHCY 子宫内膜乳腺

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NeuroD在神经细胞分化中的调控作用

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医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 278-282页

作者：方洪波张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游... 详细信息

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程。这些研究为NeuroD参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据。

关键词： NeuroD 胰腺全反式维甲酸

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人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李倩高扬李永哲倪安平于孟学刘音朱立平林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再... 详细信息

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再以此为模板扩增目的基因.将PCR产物与表达载体PET-30a双酶切后进行连接反应,构建重组表达载体,转化大肠杆菌*** BL21,碱裂解法进行质粒小量制备,通过双酶切鉴定和PCR扩增鉴定,并经测序证实为SSA60KD目的基因。表达载体构建成功后。在大肠杆菌宿主菌*** DH5α中表达,产生了大量重组融合蛋白。利用金属螯合亲和层析法,对其进行纯化。得到了高纯度的具有Ro抗原活性的重组蛋白.达到ELISA检测要求。建立ELISA检测方法。对592例风湿病患者血清进行了检测分析。结果抗Ro60KD抗体对pSS诊断的敏感性为49.19%.特异性为60.46%;对SLE诊断的敏感性为57.69%,特异性为64.06%;该抗体在pSS、SLE、RA、SSc、MCTD中的阳性率分别为49.19%、57.69%、8.33%、15.00%、16.67%.抗体阳性率在pSS与SLE两组间无差异(P=0.200);在RA、SSc、MCTD三组间无差异(P=0.888);但在(pSS+SLE)组与(RA+SSc+MCTD)组间有显著性差异(P<0.001)。为SS、SLE等疾病的临床诊断、鉴别诊断、病程监控及改善预后提供有效工具:为探讨其与特定风湿性疾病的关系提供新的手段。结论本研究成功地构建了SSA 60KD重组表达载体,表达并纯化了60KD重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ELISA方法.检测了风湿病患者血清中抗60KD抗体.为进一步探讨自身抗体与疾病的相关性、了解抗原抗体相互作用及其在发病机制中的作用:为使用重组抗原用于临床检测;为进行抗原表位的定位研究、小肽的筛选及蛋白功能的研究奠定了基础。随着分子生物学和免疫学技术的进步,以重组蛋白或合成多肽为抗原用于自身抗体检测,具有广阔的临床应用前景。目前国内尚无使用重组抗原ELISA法检测SSA60KD抗体试剂盒问世。本研究正进一步扩大样本量进行临床检测。除SSA60KD外。用同样方法还完成了SSA52KD、SSB、rRNP基因的克隆表达。为建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等满足不同临床需求多种检测方法继续探索。

关键词：干燥综合征 ELISA 重组抗原 SLE 重组蛋白临床应用研究基因克隆表达

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人干燥综合征B抗原重组体的构建及融合表达

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医学分子生物学杂志 2008年第2期5卷 133-136页

作者：李倩高扬倪安平于孟学朱立平刘音李永哲林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北京市100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学研究室北京市100005

目的克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren’s syndrome antigen B,SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取... 详细信息

目的克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren’s syndrome antigen B,SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,逆转录RT-PCR扩增人干燥综合征B抗原cDNA。PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠埃希菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSB。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。重组质粒导入大肠埃希菌BL21,阳性克隆经鉴定后在IPTG诱导下表达。结果RT-PCR扩增产物为1245bp。重组质粒PET-30a-SSB经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段。序列分析提示与GenBank中检索到的一致。SDS-PAGE和Western印迹结果显示融合蛋白相对分子量为73ku,具有天然SSB抗原活性。结论成功克隆SSB基因并表达融合蛋白。

关键词：人干燥综合征B抗原 cDNA克隆重组体融合表达

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