检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 947-951页

作者：李兴国严皓珩刘德培郝德龙梁植权北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺... 详细信息

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。

关键词：染色体整合位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因基因沉默

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异体垂体移植大鼠E_2诱致催乳素瘤的实验研究

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中国医学科学院学报 1998年第4期20卷 257-263页

作者：吴雪梅张荣许荣焜周远征狄安稞单惠敏黄曼影王悦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的探讨催乳素瘤的发病机理,验证其原发于腺垂体的假说。方法应用雄性S.D.大鼠进行异体垂体移植,并通过背部埋植17-β-雌二醇(E_2)药泵,观察E_2对大鼠原位垂体,异体移植于肾囊的垂体及血浆催乳素(prolactin,PRL)水平的影响。并利... 详细信息

目的探讨催乳素瘤的发病机理,验证其原发于腺垂体的假说。方法应用雄性S.D.大鼠进行异体垂体移植,并通过背部埋植17-β-雌二醇(E_2)药泵,观察E_2对大鼠原位垂体,异体移植于肾囊的垂体及血浆催乳素(prolactin,PRL)水平的影响。并利用上述垂体细胞原代培养及原位杂交组化方法,研究经E_2作用120d后的原位及移植垂体细胞中PRL基因表达水平的改变。结果经E_2作用60d及120d后,大鼠体重分别降至正常大鼠的74%(P<0.01)和50%(P<0.001),原位垂体及移植垂体的重量则较对照组增加达三倍以上(P<0.001),并伴高催乳素血症,血浆催乳素水平为对照组的100～200倍(P<0.001)。原位杂交结果表明,E_2作用120d后,原位及移植垂体细胞中PRL mRNA水平分别升高为正常大鼠垂体细胞的3.1倍和3.5倍(P<0.001),且二者的表达水平无显著差异。结论提示E_2也可不经下丘脑机制直接作用于腺垂体水平诱发催乳素瘤,即催乳素瘤有可能原发于腺垂体。但本工作尚未进一步排除催乳素瘤的形成涉及下丘脑机制的可能性。

关键词：催乳素瘤垂体移植原位杂交病理学

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应用体外器官培养研究人鼻咽癌不同克隆细胞株的侵袭特性

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中国医学科学院学报 1994年第4期16卷 317-322页

作者：郁多男高进中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

应用体外器官培养研究人鼻咽癌不同克隆细胞株的侵袭特性郁多男，高进（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）研究肿瘤细胞体外侵袭能力的方法很多，如利用单层内皮细胞［１］、人类羊膜［２，３］、... 详细信息

应用体外器官培养研究人鼻咽癌不同克隆细胞株的侵袭特性郁多男，高进（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）研究肿瘤细胞体外侵袭能力的方法很多，如利用单层内皮细胞［１］、人类羊膜［２，３］、小鼠膀胱［４］、眼晶状体囊［５］以...

关键词：鼻咽肿瘤体外器官培养细胞克隆株

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人染色体8p11.2亚带ANK1位点附近区域表达序列的分离与克隆

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中国医学科学院学报 1998年第5期20卷 326-333页

作者：伍勇汪俊华袁建刚梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的分离人染色体８ｐ１１．２亚带ＡＮＫ１位点附近区域基因的表达序列。方法采用ｃＤＮＡ选择法从定位于该区域的人工酵母染色体（ＹＡＣ）中分离基因的表达序列，并从分离的表达序列中选取１个序列用于筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库。结果... 详细信息

目的分离人染色体８ｐ１１．２亚带ＡＮＫ１位点附近区域基因的表达序列。方法采用ｃＤＮＡ选择法从定位于该区域的人工酵母染色体（ＹＡＣ）中分离基因的表达序列，并从分离的表达序列中选取１个序列用于筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库。结果获得７个表达序列，其中５个可与目的ＹＡＣ反杂交。所得的表达序列ＢＨＬＣ１５２与鼠的ＣＡｒＧ盒结合因子基因高度同源，ＢＨＬＣ７４与编码心室肌肌球蛋白的碱性轻链１（ＭＬＣ１）基因高度同源，表明ＢＨＬＣ７４可能编码一种ＭＬＣ１的同工蛋白。分离的其它表达序列与数据库内一些位置和功能尚不清楚的表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｅｄｓｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇ，ＥＳＴ）仅有部分同源性。用表达序列ＢＨＬＣ１１９筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库，获得１个插入片段长１９５１ｂｐ的克隆，序列分析表明它编码１７４个氨基酸，该序列与所有已知的蛋白质序列无同源性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析结果显示，在人胎脑总ＲＮＡ中呈现１条约３．５ｋｂ带；组织表达分析表明，此系一广泛表达的基因。结论ＢＨＬＣ７４可能作为与８ｐ相关的心脏病候选基因，其它序列至少可以作为定位在ＡＮＫ１位点附近区域的肿瘤抑制基因的初筛基因。

关键词： 8p11.2区带 ANK1位点染色体表达序列 cDNA选择

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抗运动神经元抗体对脊髓块生长的抑制及与人、鼠运动神经元的交叉反应

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中国医学科学院学报 1995年第1期17卷 41-46页

作者：朱羽凡曹承刚史卉王云万选才中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

以１：１０兔抗猪脊髓前角运动神经元血清（ｒａｂｂｉｔａｎｔｉ－ｓｗｉｎｅｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｅｒｕｍ，ＲＡＳ）、正常兔血清（ｎｏｒｍａｌｒａｂｂｉｔｓｅｒｕｍ，ＮＲＳ）、肌肉提出物（ｍｕｓｃｌｅｅｘｔｒａｃｔｓ，Ｍ... 详细信息

以１：１０兔抗猪脊髓前角运动神经元血清（ｒａｂｂｉｔａｎｔｉ－ｓｗｉｎｅｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｅｒｕｍ，ＲＡＳ）、正常兔血清（ｎｏｒｍａｌｒａｂｂｉｔｓｅｒｕｍ，ＮＲＳ）、肌肉提出物（ｍｕｓｃｌｅｅｘｔｒａｃｔｓ，ＭＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）、脑提出物（ｂｒａｉｎｅｘｔｒａｃｔｓ，ＢＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）分别作用于体外培养的新生大鼠脊髓组织块，５ｄ后观察神经突起的生长情况。结果表明，ＲＡＳ可明显抑制大鼠脊髓组织块生长（ＮＲＳ组有突起生长的脊髓块占３６．７％，ＲＡＳ组仅为１３．３％），而ＭＥＴ、ＢＥＴ均可明显促进大鼠脊髓组织块生长（ＭＥＴ及ＢＥＴ组有突起生长的脊髓块均占９６．７％）。同时比较ＲＡＳ对猪、人和大鼠脊髓的免疫组织化学交叉反应，证明ＲＡＳ对运动神经元（Ｍｎｓ）的免疫反应与动物的种属关系不大。

关键词：抗体运动神经元神经突起肌萎缩侧索硬化

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脊髓后角P物质在实验性自身免疫病发病中的作用

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中国医学科学院学报 1996年第3期18卷 183-188页

作者：陈娟李淑兰刘燕吴抒见季红张艳萍徐承焘中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

在实验性过敏性神经炎（ＥＡＮ）、实验性过敏性脑脊髓炎（ＥＡＥ）及佐剂性关节炎（ＡＡ）３种不同自身免疫病动物模型上，观察改变脊髓后角（ＳＤＨ）Ｐ物质（ＳＰ）水平对免疫功能及自身免疫病（ＩＤ）发病的影响。结果表明以辣椒素... 详细信息

在实验性过敏性神经炎（ＥＡＮ）、实验性过敏性脑脊髓炎（ＥＡＥ）及佐剂性关节炎（ＡＡ）３种不同自身免疫病动物模型上，观察改变脊髓后角（ＳＤＨ）Ｐ物质（ＳＰ）水平对免疫功能及自身免疫病（ＩＤ）发病的影响。结果表明以辣椒素（Ｃａｐ）耗竭ＳＤＨＳＰ或脊髓蛛网膜下腔注射（ｉｔｈ）ＳＰ受体拮抗剂均可使机体免疫反应亢进，ＩＤ发病率上升、发病潜伏期缩短、病情加重；相反ｉｔｈＳＰ受体激动剂可使机体免疫功能抑制，ＩＤ病情减轻。３种动物模型在发病高峰期ＳＤＨＳＰ含量均显著上升。提示ＳＤＨＳＰ参与ＩＤ的发病过程；在免疫应答高峰期ＳＤＨＳＰ含量的升高可经某种途径反馈性地抑制免疫反应，使后者不致过强。ＳＰ在免疫负反馈调节中起神经递质的作用，故提高ＳＤＨＳＰ水平对ＩＤ治疗可能有益。

关键词： P物质脊髓后角自身免疫病

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血管对激动剂脱敏的机制分析

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中国医学科学院学报 1996年第4期18卷 273-278页

作者：曹济民陈孟勤王群中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

用离体血管收缩功能实验法观察了大鼠数种动脉对不同激动剂的脱敏特征，并对脱敏的机制进行了初步分析。结果显示：（１）血管对肽类激动剂（ＡⅡ、ＡＶＰ）极易脱敏，而对儿茶酚胺类激动剂（ＮＥ、ＰＥ）不易脱敏；（２）在短时间（３... 详细信息

用离体血管收缩功能实验法观察了大鼠数种动脉对不同激动剂的脱敏特征，并对脱敏的机制进行了初步分析。结果显示：（１）血管对肽类激动剂（ＡⅡ、ＡＶＰ）极易脱敏，而对儿茶酚胺类激动剂（ＮＥ、ＰＥ）不易脱敏；（２）在短时间（３０ｍｉｎ）内，血管对肽类和儿茶酚胺类激动剂表现为同类脱敏；（３）内皮－ＥＤＲＦ－ｃＧＭＰ通路不参与脱敏，提示脱敏主要是平滑肌的功能变化；（４）用ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅｏｘｉｄｅ（ＰＡＯ，１０￣（－５）ｍｍｏｌ／Ｌ）抑制膜受体的胞内化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）可短暂阻抑脱敏的发展但不能长时阻抑脱敏，用ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ（ＣＱ，１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）抑制胞内受体向细胞膜的“再插入”（ｒｅｉｎｓｅｒｔｉｏｎ）可明显加快脱敏，但这种作用在不同血管有较大差异，表明膜受体循环参与脱敏，但不是脱敏的唯一机制；（５）在同类脱敏时，两类平滑肌（ｐｈａｓｉｃａｎｄｔｏｎｉｃ）细胞膜电压依赖性钙通道（ＶＤＣ）的功能未受到抑制；（６）脱敏后ＧＴＰ＿γＳ的量－效曲线下移，最大反应降低，表明脱敏时Ｇ蛋白发生了变化；（７）ＳＨＲ血管平滑肌对上述肽类和儿茶酚胺类激动剂的脱敏并未减弱。

关键词：脱敏膜受体循环钙通道 G蛋白内皮

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大鼠血管平滑肌胞内钙池及其与血管反应性的关系

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中国医学科学院学报 1996年第3期18卷 189-194页

作者：曹济民陈孟勤王群中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

以在无钙介质条件下激动剂引起的血管收缩作为胞内钙池释放指标，分析大鼠不同血管平滑肌胞内钙池容量的差异，不同激动剂敏感钙池间及其与咖啡因敏感钙池间的相互关系，以及钙池的差异与血管反应性的可能关系。结果表明：（１）不同血... 详细信息

以在无钙介质条件下激动剂引起的血管收缩作为胞内钙池释放指标，分析大鼠不同血管平滑肌胞内钙池容量的差异，不同激动剂敏感钙池间及其与咖啡因敏感钙池间的相互关系，以及钙池的差异与血管反应性的可能关系。结果表明：（１）不同血管平滑肌胞内钙池容量明显不同，富含平滑肌脏器动脉钙池较大血管钙池大；（２）不同激动剂敏感钙池并不完全利用同一钙池，即当一种激动剂敏感钙池被耗竭后，另一种激动剂仍能引起少量钙释放；（３）所试血管均不存在除极化诱发的钙释放，但均存在咖啡因敏感钙池，后者与激动剂敏感钙池并非完全是同一钙池；（４）钙池大小与单位湿重血管平滑肌的最大收缩张力呈正相关（ｒ＝０．９５６７），提示钙池容量与血管平滑肌收缩力可能有一定关系。

关键词：钙动员钙池钙释放血管平滑肌血管反应性

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血卟啉衍生物光动力作用对DNA分子的损伤

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中国医学科学院学报 1995年第2期17卷 139-144页

作者：琦祖和秦健赵晓剑闫珺李志高中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

从ＤＮＡ结构损伤探讨了血卟啉衍生物（ＨＰＤ）光动力作用杀伤细胞的机理。ＤＮＡ经ＨＰＤ＋光处理后，立即进行电泳未见断链发生，但经在碱性溶液中加热处理后出现降解。这是由于碱基基团发生变化所致。引物延伸反应表明ＤＮＡ分子发... 详细信息

从ＤＮＡ结构损伤探讨了血卟啉衍生物（ＨＰＤ）光动力作用杀伤细胞的机理。ＤＮＡ经ＨＰＤ＋光处理后，立即进行电泳未见断链发生，但经在碱性溶液中加热处理后出现降解。这是由于碱基基团发生变化所致。引物延伸反应表明ＤＮＡ分子发生聚合。序列测定也出现错误序列，４种碱基Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ均可出现改变。以小鼠艾氏腹水癌ＤＮＡ为材料，经ＨＰＤ＋光处理后再分别用ＢｇｌⅡ与ＢａｍＨⅠ降解，得到的片段比对照组变长。上述结果均说明ＨＰＤ光动力作用可使ＤＮＡ碱基发生突变。

关键词： DNA 损伤光动力作用血卟啉衍生物

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BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第5期21卷 480-485页

作者：史耕先刘音赵方萄朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学系

目的　采用形态学和分子生物学方法 ,分析转导 6A8α 甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法　用Giemsa染色、annexin Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法 ,分析细胞死亡的性质 ;应用ConA结合试验 ,检测... 详细信息

目的　采用形态学和分子生物学方法 ,分析转导 6A8α 甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法　用Giemsa染色、annexin Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法 ,分析细胞死亡的性质 ;应用ConA结合试验 ,检测转基因细胞 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变 ;应用Fluo 3探针测定细胞胞浆 [Ca2 +]i。结果　用重组腺相关病毒 (rAAV)颗粒成功地将反义 6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中 ,转导反义 6A8DNA的BJAB细胞在生长到 3～ 1 0个细胞时死亡 ,而野生型、转导空载或转导正义 6A8DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义 6A8DNA的BJAB细胞呈聚集状生长 ,且有大量细胞肿胀 ,最终死亡。Giemsa染色光镜观察、an nexin Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明 ,这种死亡是一种oncosis(肿胀死 )样死亡。ConA结合试验表明 ,BJAB细胞在转导反义 6A8DNA后的结合率升高 ,而转导正义 6A8DNA后的结合率则下降。另外 ,转导反义 6A8DNA的细胞胞浆 [Ca2 +]i升高。结论　转导反义 6A8DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡 ,这种死亡可能与 6A8α 甘露糖苷酶表达被抑制有关。

关键词： 6A8α-甘露糖苷酶反义6A8DNA BJAB细胞 Oncosis样死亡

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