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过表达CDK11^(p58)促进人胰腺导管腺癌MIAPaCa-2细胞增殖

中国生物化学与分子生物学报 2010年第4期26卷 341-346页

作者：余诗灏王辉丁婧孟雁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理学系北京100005

CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺... 详细信息

CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺导管腺癌细胞)单克隆细胞,并通过流式细胞分析、MTT检测及real-time PCR的方法检测了细胞周期、细胞增殖能力及G1/S期相关调控基因的转录水平.结果显示,该单克隆细胞(实验组)与空载体组细胞和空白对照组细胞相比G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期细胞比例明显上升(P<0.01);细胞增殖能力明显提高(P<0.01);cyclin D1、cyclin D3、p21基因mRNA水平较两组对照细胞明显升高(P<0.01).提示过表达的CDK11p58通过上调cyclin D1、cyclin D3和p21基因的mRNA水平促进MIAPaCa-2细胞通过细胞增殖的关键限速点G1/S期,加快细胞增殖.

关键词： CDK11p58 Cdc2L2 胰腺癌 MIAPaCa-2

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成年人体重指数、去脂体重指数、脂肪体重指数与深吸气量的关系

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中国医学科学院学报 2010年第1期32卷 85-89页

作者：冯逵陈莉韩少梅朱广瑾中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生理与病理生理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所流行病学与统计学系北京100005

目的研究肺功能正常成年人体重指数(BMI)、去脂体重指数(FFMI)和脂肪体重指数(FMI)与深吸气量(IC)的关系。方法以2008年7至10月在黑龙江省进行的人体生理常数调查人群资料为基础,选取通过基础体检(不限制BMI)且肺功能正常的19～81岁成... 详细信息

目的研究肺功能正常成年人体重指数(BMI)、去脂体重指数(FFMI)和脂肪体重指数(FMI)与深吸气量(IC)的关系。方法以2008年7至10月在黑龙江省进行的人体生理常数调查人群资料为基础,选取通过基础体检(不限制BMI)且肺功能正常的19～81岁成年被调查者2 050人,其中男性921人,女性1 129人,按照中国肥胖问题工作组推荐的中国成年人体重分类标准将检测对象分组,采用Pearson相关分析、单因素方差分析和多元逐步回归分析等统计方法分析BMI、FFMI、FMI和IC的关系。结果控制性别、年龄、身高等混杂因素后,IC与BMI、FFMI、FMI均呈显著正相关(r=0.320,r=0.303,r=0.204,P均=0.000);IC、FFMI和FMI值,肥胖组>超重组>正常体重组>低体重组,各组间差异有统计学意义(P均=0.000)。年龄、性别、身高、FFMI和FMI均是影响深吸气量IC的因素,其中身高、FFMI和FMI与IC呈正相关,性别(男=1,女=2)、年龄与IC呈负相关;影响程度由大到小依次为身高、FFMI、性别、FMI、年龄,其中FFMI对IC的影响约是FMI的2.23倍。结论在肺功能正常的成年人中,BMI与IC呈独立正相关;FFMI和FMI是影响IC的独立因素,均与IC呈正相关;FFMI对IC的影响大于FMI。BMI对IC的提升作用与FMI和FFMI有关,其中FFMI的作用大于FMI。

关键词：体重指数深吸气量去脂体重指数脂肪体重指数肺功能体重过低超重肥胖

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肝细胞极性与膜蛋白分选的分子机制

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中国科学：生命科学 2014年第1期44卷 1-13页

作者：聂萌王林中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理学系北京100730

肝细胞是高度特化的极性上皮细胞,细胞质膜蛋白的分选和极性转运对于肝细胞极性的建立与维持至关重要.首先,膜蛋白在内质网中合成,随后经高尔基体加工修饰,再由反面高尔基体进一步分选,最后通过膜泡运输等不同的机制分别转运到胆汁腔面... 详细信息

肝细胞是高度特化的极性上皮细胞,细胞质膜蛋白的分选和极性转运对于肝细胞极性的建立与维持至关重要.首先,膜蛋白在内质网中合成,随后经高尔基体加工修饰,再由反面高尔基体进一步分选,最后通过膜泡运输等不同的机制分别转运到胆汁腔面或窦状隙面,行使其特殊的功能.近些年来,细胞内负责转运的细胞器和主要的分选信号已逐步被揭示.特别是循环内体也被证明参与了胆汁腔面和窦状隙面膜蛋白的极性分选和转运.肝细胞的极性一旦遭到破坏,将会引起胆汁分泌障碍以及其他肝脏功能的损伤,从而可能导致肝脏糖脂代谢紊乱,甚至丧失正常的生理功能.因此,深入研究肝脏细胞极性的形成与维持机制,将为多种肝脏疾病的预防和治疗寻找到新的方向和靶点,具有重要的理论和临床实践意义.

关键词：肝细胞极性胆汁腔面窦状隙面膜蛋白极性转运循环内体胆汁淤积

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分泌IL-21的白血病细胞系的建立及其抑瘤作用

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 961-967页

作者：朱琰孙蕊王春景刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和EL... 详细信息

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和ELISA法鉴定建立的4种细胞系。以稳定分泌IL-21白血病细胞为抗原刺激外周血单个核细胞增殖,细胞分析计数仪检测增殖倍数,流式细胞仪分析淋巴细胞的表型,细胞计数试剂盒(CCK8)检测增殖后的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果建立稳定表达IL-21的4种细胞系:K562-IL-21、THP-1-IL-21、jurkat E6-1-IL-21和RPMI8226-IL-21。3份人PBMC在4种分泌IL-21的白血病细胞的作用下都有增殖,增殖倍数在1.147±0.057~2.725±0.345倍之间。不同数量的IL-21分泌白血病细胞都可激活淋巴细胞增殖,增殖的倍数在1.127±0.152~2.213±0.200之间。增殖后CD3+T淋巴细胞和CD56+NK细胞的比例降低(P<0.05),CD19+B淋巴细胞比例增加(P<0.05);由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞的杀伤作用明显高于对照组。由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞和其他7种肿瘤细胞均有杀伤作用,杀伤率在(28.68±9.31)%^(78.45±0.61)%之间。结论 4种分泌IL-21的白血病细胞可刺激PBMC增殖并激活其对肿瘤细胞的杀伤作用。

关键词：白血病细胞系白介素21 肿瘤治疗

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基因功能的抑制

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中华病理学杂志 2006年第5期35卷 298-301页

作者：卞晓翠刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

随着人类基因组测序工作的完成,人类基因组109碱基序列中具有功能的基因约3万个,其功能基因的序列已经明了,这些基因功能的研究正在轰轰烈烈的进行中.生物体内编码基因要执行其功能,需要经历DNA的复制、转录和翻译,即基因表达的过程.因... 详细信息

随着人类基因组测序工作的完成,人类基因组109碱基序列中具有功能的基因约3万个,其功能基因的序列已经明了,这些基因功能的研究正在轰轰烈烈的进行中.生物体内编码基因要执行其功能,需要经历DNA的复制、转录和翻译,即基因表达的过程.因而,要了解基因的功能,可以采用转基因、诱导突变观察基因缺失型的表现,进而推测它的功能;或是从基因的DNA、RNA或蛋白水平进行干预,抑制其表达,观察基因抑制后表型变化,研究其功能.转基因和诱导特异的基因突变效率低,相对而言,随着生物技术的发展,后一种方案就简单多了,因此生命科学研究中,出现了多种在DNA、RNA和蛋白水平上抑制某个或某些特定基因发挥功能的方法,而且这些方法也越来越多地应用于基因过度表达的疾病的治疗中。

关键词：基因功能人类基因组生命科学研究基因过度表达碱基序列蛋白水平基因缺失型 DNA 测序工作功能基因

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体外肿瘤细胞对血管内皮细胞影响的观察

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中华病理学杂志 2003年第4期32卷 360-363页

作者：刘玉琴顾蓓王春景张宏高进任民峰中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

目的　观察肿瘤细胞与血管内皮细胞的关系及其在体外直接接触培养时内皮细胞的形态变化。方法　免疫磁珠阳性选择法分离培养大鼠肺血管内皮细胞 ,生长至汇合状态时加入不同的肿瘤细胞 (小鼠树突状细胞肉瘤细胞DCS、人胃癌细胞MGC 80 3... 详细信息

目的　观察肿瘤细胞与血管内皮细胞的关系及其在体外直接接触培养时内皮细胞的形态变化。方法　免疫磁珠阳性选择法分离培养大鼠肺血管内皮细胞 ,生长至汇合状态时加入不同的肿瘤细胞 (小鼠树突状细胞肉瘤细胞DCS、人胃癌细胞MGC 80 3、小鼠肺腺癌细胞LA795 )共培养 ,光镜、扫描电镜、免疫组织化学、transwell法及荧光分子传递等方法观察内皮细胞的形态、功能的变化。结果　培养的内皮细胞部分呈卵石样 ,部分呈长梭形。长至汇合状态的内皮细胞再加入肿瘤细胞后 ,内皮细胞形态发生明显变化 ,汇合细胞中间出现许多圆形管腔样结构 ;肿瘤细胞往往分布在新形成的腔隙内 ;肿瘤细胞条件培养基可支持内皮细胞的生长 ,促进内皮细胞的运动 ;lucifferyellow分子可直接从肿瘤细胞传递到内皮细胞。结论　肿瘤细胞与内皮细胞可进行通讯。

关键词：体外肿瘤细胞血管内皮细胞功能表型细胞结构细胞运动

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胃肠道间质瘤细胞系建立及其对C-KIT下游抑制剂敏感性研究

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中华肿瘤防治杂志 2019年第11期26卷 764-770,777页

作者：周芳颖冯海凉卞晓翠康维明于健春宗静张丹刘玉琴中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞资源中心北京100005 北京协和医院普外科北京100730

目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶... 详细信息

目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶组织1例进行体外原代培养,连续传代培养>20代进行鉴定,绘制增殖周期生长曲线。免疫细胞化学检测CD117和DOG-1表达,进行染色体核型分析,PCR法检测C-KIT基因与PDGFRA基因突变,CCK8法观察C-KIT 2种通路抑制剂效果,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(short tandem repeats, STR)检测鉴定细胞身份。结果可在体外连续传代的人胃肠道间质瘤细胞命名为PUMC-GIST-1,连续传代后细胞可见分枝,呈神经细胞样生长,传代后于第5天到达平台期;CD117和DOG-1表达均阳性;不同代数细胞染色体核型有变化,在38~48条;细胞C-KIT基因11号外显子5'端突变热点区有突变V559D,PDGFRA基因12号外显子CCG-CCA突变。单独用药结果显示,不同浓度GDC-0941处理48 h后,PUMC-GIST-1 (F=8.96,P<0.001)和GIST-430细胞(F=3.19,P=0.03)增殖能力均下降,差异有统计学意义;不同浓度AZD-6244处理48h后,PUMC-GIST-1细胞增殖能力整体呈现上升趋势,差异有统计学意义,F=9.78,P<0.001;GIST-430细胞增殖能力整体呈现下降趋势,差异有统计学意义,F=6.61,P<0.001。联合用药结果显示,PUMC-GIST-1增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为0.41±0.01和0.37±0.03,差异有统计学意义,F=3.30,P=0.007;GIST-430增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为2.12±0.11和0.13±0.01,差异有统计学意义,F=158.61,P<0. 001。PUMC-GIST-1较GIST-430对联合用药低敏感。当AZD与GDC浓度分别为5μmol/L时二者具有协同抑制作用,金正均Q值检验PUMC-GIST-1与GIST-430的q值分别为3.08与3.91,均>1.15。裸鼠体内接种不成瘤;PUMC-GIST-1种属鉴定为人源性,STR结果与原代一致,无支原体污染。结论建立了C-KIT突变的PUMC-GIST-1细胞系,该细胞系对C-KIT靶向药低敏感,为胃肠肿瘤研究提供了新型细胞系。

关键词：胃肠道间质瘤 C-KIT 药物低敏感细胞系 PDGFRA

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氧化低密度脂蛋白诱导人载脂蛋白AI转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因的研究

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中华医学杂志 2003年第6期83卷 494-497页

作者：于淼谷素敏周礼赵高峰余立清张华佘铭鹏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

目的　为研究人载脂蛋白AI(h ApoA I)抗氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制 ,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h apoA I转基因小鼠血管平滑肌细胞 (vSMC)抗ox LDL所致AS过程中... 详细信息

目的　为研究人载脂蛋白AI(h ApoA I)抗氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所导致的平滑肌细胞增生及脂质浸润的分子机制 ,克隆并分析可明显抑制动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的h apoA I转基因小鼠血管平滑肌细胞 (vSMC)抗ox LDL所致AS过程中表达的相关基因。方法　以ox LDL为刺激物作用于培养的转基因小鼠vSMC ,应用抑制性差减杂交方法构建减除文库 ,筛选、克隆差异表达基因 ,并进行序列测定及同源性比较。同时用SMART技术构建了ox LDL诱导的转基因小鼠vSMC全长噬菌体文库。结果　从 5 7个差异克隆中随机选取 15个克隆测序并分析 ,得到 3个表达序列标签 (EST) ,均为与免疫系统有关的功能基因片段 ,即 :补体C1 抑制物 (C1 INH)、植物凝集素及T细胞受体 β(TCRβ)。有明显抗内膜脂质沉积能力的h apoA I转基因小鼠的vSMC在被ox LDL诱导后 ,筛选出的 3个EST均与免疫系统有关 ,其中C1 INH及植物凝集素与补体系统密切相关。结论　ox LDL致AS及h ApoA I抗AS可能有免疫机制参与 ,且与补体活化及其调控密切相关。其中C1 INH作为抗AS的潜在靶点值得关注。

关键词：氧化低密度脂蛋白诱导载脂蛋白AI 转基因小鼠血管平滑肌细胞差异表达基因动脉粥样硬化

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瘦素对大鼠胃运动的调节作用

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中华医学杂志 2006年第32期86卷 2266-2270页

作者：王礼建周吕袁勃王玲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生理学系北京100005

目的研究瘦素对大鼠消化间期移行性复合运动(MMC)和消化期胃运动的作用,并观察空腹MMC与餐后消化期胃运动的不同时程血中瘦素浓度的变化以及与胃动素变化的关系。方法50只Wister大鼠随机分为5组进行慢性实验。在胃体、胃窦和幽门浆膜植... 详细信息

目的研究瘦素对大鼠消化间期移行性复合运动(MMC)和消化期胃运动的作用,并观察空腹MMC与餐后消化期胃运动的不同时程血中瘦素浓度的变化以及与胃动素变化的关系。方法50只Wister大鼠随机分为5组进行慢性实验。在胃体、胃窦和幽门浆膜植入应力传感器记录清醒大鼠胃运动。颈外静脉内置慢性静脉插管供注射药物及取血样品。血清瘦素和胃动素用放免法测定,进餐用标准试餐。结果空腹胃运动出现典型的消化间期MMC运动,分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ时相,其Ⅲ相可传至幽门。进餐后胃运动呈持续有规则的蠕动性收缩的消化期运动。空腹MMC运动中血清瘦素的浓度分别为Ⅰ相(5．6±1．0)μg/L,Ⅱ相(11．4±2．1)μg/L,Ⅲ相(2．1±0．7)μg/L,显示MMCⅡ相瘦素浓度最高(P<0．01)。餐后消化期,血中瘦素浓度于进餐后3 min开始升高,至餐后10 min达到高峰(28．1±4．4)μg/L,随后30 min瘦素仍维持高水平(与餐前比较均P<0．01)。与瘦素相反,胃动素在MMCⅢ相时浓度最高,而餐后其浓度较低。静脉灌流瘦素(2．5μg·kg-1·10 min)可使空腹胃运动变为餐后胃体舒张、胃窦与幽门收缩的消化期运动类型。抗瘦素血清、阿托品及胆囊收缩素(CCK)-A受体阻断剂戊酰胺酸均可阻断瘦素对胃运动的作用。结论瘦素是启动空腹胃MMCⅡ相活动及餐后消化期运动的激素,其变化会导致与饱感有关的胃排空延迟。瘦素对胃运动的作用是通过胆碱能神经及CCK-A受体介导。

关键词：瘦素胃动素胃运动

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β-淀粉样蛋白在阿尔茨海默病发病和免疫治疗中的作用

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中华病理学杂志 2005年第2期34卷 113-114页

作者：于双妮刘立颖梁平作中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

阿尔茨海默病(Alzheimer's diseases, AD)于1907年由Alzheimer最先发现并因此得名.AD是一种最常见的老年性痴呆症,大约占典型的晚发型的痴呆症的50%以上,有资料显示全球65～85岁的人,平均有10%会发生AD,85岁以上的人,有一半会发生... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer's diseases, AD)于1907年由Alzheimer最先发现并因此得名.AD是一种最常见的老年性痴呆症,大约占典型的晚发型的痴呆症的50%以上,有资料显示全球65～85岁的人,平均有10%会发生AD,85岁以上的人,有一半会发生不同程度的AD[1]。

关键词：阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白发病免疫治疗痴呆症常见晚发型资料发现典型

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