检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2013年第1期33卷 77-81页

作者：韩永卿李容高晋兰缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性。方法把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性;另外构建了TR... 详细信息

目的验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性。方法把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性;另外构建了TRIM69基因的全长、RING结构域的点突变、以及RING结构域截短序列的真核细胞表达载体,瞬时转染293T细胞或稳定表达泛素的HeLa细胞株,通过免疫沉淀结合免疫印迹方法检测其是否具有催化多聚泛素链形成的活性。结果泛素化分析实验表明TRIM69具有催化多聚泛素链形成的活性并且其活性依赖于它的RING结构域。结论成功鉴定了人源TRIM69蛋白具有催化多聚泛素链形成的活性,为进一步证明其是一个新的E3泛素连接酶提供依据。

关键词：精子发生 E3泛素连接酶 TRIM RING finger

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重组表达人载脂蛋白(a)羧基末端kringle结构域抑制新生血管

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 655-660页

作者：申乐陈保生薛红中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100730

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒... 详细信息

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒;转染毕赤酵母X-33分泌表达RHAKA与RHAKB,RHAKs利用***亲和层析纯化,以及反相高效液相色谱与氨基酸残基测序鉴定;明确RHAKs的糖基化及二硫键形成情况后,利用细胞增殖实验与鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测RHAKs对新生血管和肿瘤细胞增殖的影响。结果毕赤酵母可以大量表达RHAKs,并对RHAKs进行翻译后修饰;RHAKA与RHAKB可以抑制血管内皮细胞的增殖和CAM的新生血管,但对肿瘤细胞增殖无直接的抑制作用。结论利用毕赤酵母高效重组表达人Apo(a)羧基末端kringle结构域可以显著抑制新生血管。

关键词：载脂蛋白 kringle结构域毕赤酵母新生血管

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SIRT1在内皮细胞中抑制PMA和ionomycin诱导的ICAM-1的表达

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中国科学：生命科学 2013年第2期43卷 112-118页

作者：贾玉艳高鹏陈厚早万言珍张然张祝琴杨瑞锋王旭徐静刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设... 详细信息

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设:SIRT1能够抑制内皮细胞中ICAM-1的表达.实验发现,PMA和ionomycin(PMA/Io)能够在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中明显诱导SIRT1和ICAM-1的表达.而且,腺病毒介导的SIRT1过表达在HUVECs中能显著抑制PMA/Io诱导的ICAM-1的表达,而敲低SIRT1的表达则导致ICAM-1表达上调.双荧光素酶报告基因分析表明,过表达SIRT1抑制基础水平和PMA/Io诱导下的ICAM-1的启动子活性.进一步通过染色质免疫共沉淀(ChIP)实验发现,SIRT1参与转录复合物结合在ICAM-1启动子区,而且SIRT1的干扰能够提高NF-κB的亚基p65结合到ICAM-1启动子区的能力.总之,这些数据提示,SIRT1在内皮细胞中抑制ICAM-1表达的作用可能有助于其对抗动脉粥样硬化的发生.

关键词： SIRT1 ICAM-1 PMA和ionomycin

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睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程

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基础医学与临床 2013年第2期33卷 179-183页

作者：宋伟胡廷徽缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化... 详细信息

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系,用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达,主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞系,过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达,其过表达能够加速细胞周期进程。

关键词： HSD13 精子发生细胞周期流式细胞术

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HSD1蛋白在精子发生过程中的空间特异性表达

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 325-329页

作者：宋伟陈迎春缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位... 详细信息

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位及其核质分布情况。结果 HSD1蛋白在初级精母细胞和圆形精子细胞的胞质中表达;在成熟精子细胞中主要表达于顶体和尾部。HSD1蛋白在CHO细胞中存在3种分布形式:细胞核型、细胞质型和核质分布型。进一步研究发现该蛋白在细胞中呈动态分布,存在细胞核-质间的穿梭特性。结论HSD1蛋白在生精细胞中呈空间特异性表达并且具有核质穿梭能力。

关键词： HSD1 精子发生免疫荧光核质穿梭

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主动免疫肌动蛋白样蛋白7a蛋白引起小鼠睾丸曲细精管的损伤

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 595-600页

作者：付俊宗书东缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口和计划生育委员会科学技术研究所生殖生理学实验室北京100081

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表... 详细信息

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔。结论成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的蛋白。发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤。

关键词：肌动蛋白样蛋白7a 表达纯化主动免疫抗精子抗体

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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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Kir4.1和AQP4基因多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 752-756页

作者：牛凤鹤林华李景云朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学宣武医院神经内科北京100053

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。... 详细信息

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。结果共选择Kir4.1基因上的5个SNP位点以及AQP4基因上的7个SNP位点,在病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,这些多态性位点与颞叶癫痫之间并无相关性,基因单倍型与疾病的关联无显著性的差异,结合临床表型进行分层分析,亦未有显著差异。结论在中国汉族人群中,Kir4.1和AQP4基因多态性在颞叶癫痫的发生和发展过程中无重要作用。

关键词：颞叶癫痫 Kir4 l AQP4 单核苷酸多态性

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新疆哈萨克族人Furin基因变异与中心性肥胖的相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2013年第2期30卷 227-232页

作者：王红梅沈岩洪静周玲罗文利王新玲朱沂李南方中国医学科学院北京协和医学院基础医学院博士后流动站北京100005 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室高血压诊疗研究中心新疆高血压诊疗研究中心新疆维吾尔自治区人民医院神经内科

目的研究哈萨克族人弗林蛋白基因（Furin）变异与中心性肥胖的相关性。方法以哈萨克族自然人群横断面流行病学调查为基础选取478例肥胖者和378名正常个体进行病例一对照研究。从肥胖者中随机选择66例，对其Furin启动子、外显子区测序筛... 详细信息

目的研究哈萨克族人弗林蛋白基因（Furin）变异与中心性肥胖的相关性。方法以哈萨克族自然人群横断面流行病学调查为基础选取478例肥胖者和378名正常个体进行病例一对照研究。从肥胖者中随机选择66例，对其Furin启动子、外显子区测序筛查其代表性变异；并采用TaqManPCR技术对筛查出的Furin代表性变异在856名哈萨克族个体中进行分型，分析其与哈萨克族人肥胖的相关性。结果在478例肥胖者中随机选择66例（男女各33例），共筛查出Furin的12个变异，其中rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178是代表性变异；这4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功（成功率≥99％）；在总体、男性、女性哈萨克族自然人群中，rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性位点的基因型、等位基因、单倍型频率在肥胖组及对照组分布差异无统计学意义（P〉0．05）；不同基因型携带者之间的腰围平均水平差异也无统计学意义（P〉0．05）。结论Furin变异与新疆哈萨克族中心性肥胖不相关，该变异可能不是哈萨克族人中心性肥胖的易感因素。

关键词： Furin基因中心性肥胖哈萨克族基因变异

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集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价

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中国生物工程杂志 2013年第7期33卷 8-12页

作者：田硕姚文兵徐晨中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国药科大学 210009 北京三元基因工程有限公司北京102600

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT。扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在L... 详细信息

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT。扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在LB培养基中培养,经IPTG诱导表达的IIFN/165S经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot和MALDI-TOF-MS分析,用WISH-VSV系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:IIFN/165S以包涵体形式表达。纯化后,IIFN/165S的纯度大于95%,分子量为18172,比活性(7.63±0.22)×108IU/mg,诱导细胞凋亡率呈剂量依赖。结论:构建了IIFN/165S的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高纯度高活性突变分子IIFN/165S。

关键词：集成干扰素定点突变高效抗肿瘤

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