检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2013年第10期33卷 1269-1274页

作者：阴海鑫王斌王芳余佳赵浩亮山西医科大学普外科山西太原030032 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学附属山西医学科学院山西大医院普外科山西太原030032

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌... 详细信息

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌临床病理特征间的关系,随后使用组织基因组DNA快速提取试剂盒提取胃癌组织及正常人血液基因组DNA,经重亚硫酸氢盐处理后,甲基化特异性PCR法检测其上游CpG岛的甲基化程度,PCR产物经琼脂糖凝胶检测,并进行统计分析。结果 miR-33b表达下调与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无脉管转移、肿瘤分型无相关性,但与肿瘤是否发生远处转移具有相关性(P<0.05),且其低表达与上游CpG岛的甲基化沉默修饰密切相关(P<0.05)。结论 miR-33b的表达在胃癌中受甲基化调控且与胃癌远处转移相关。

关键词： miR-33b 胃癌甲基化

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慢病毒介导的稳定表达人睾丸组织泛素连接酶TRIM69基因的细胞系的建立

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医学研究杂志 2013年第11期42卷 23-26页

作者：吴为李琴山宋伟缪时英王琳芳中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将... 详细信息

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将慢病毒质粒pLenti-TRIM69或其突变体与慢病毒辅助质粒(plp1,plp2,VSVG)共转染HEK293T包装细胞,产生有活性的病毒。包装后的重组慢病毒感染HEK293细胞,Western blot检测确认TRIM69及其突变体蛋白的表达。结果经Western blot检测证实,成功建立了稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系。结论利用慢病毒成功制备稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系,这些细胞为TRIM69生物学功能的研究提供了平台。

关键词： TRIM69 慢病毒稳定细胞株

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LIN28B的研究进展

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医学分子生物学杂志 2013年第3期10卷 177-179,183页

作者：屈婷婷(综述) 张业(审阅) 沈翊琲(审阅) 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

近些年，LIN28B的相关研究工作已引起研究人员的广泛关注，并开始对LIN28B展开多方面、多层次的深入研究。文章从LIN28B的基本性质、对let-7调控机制、与癌症发生的相关机制、对发育的调控及其他相关功能等研究进行较为全面的综述。

关键词： LIN28B LIN28A let-7 癌症发育

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HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系研究

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医学研究杂志 2013年第6期42卷 20-22页

作者：宋伟狄茜缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系100005

目的确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd(ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株。应用免疫荧... 详细信息

目的确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd(ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株。应用免疫荧光实验观察外源和内源表达的HSD1与微管蛋白α-tubulin在GC-2spd(ts)或小鼠原代生精细胞中的定位分布。结果成功构建稳定表达FLAG-HSD1融合蛋白的GC-2spd(ts)细胞株。外源表达HSD1在GC-2 spd(ts)中与α-tubulin明显共定位;内源表达HSD1与α-tubulin在GC-2spd(ts)和原代小鼠生精细胞中明显共定位。结论 HSD1与微管蛋白α-tubulin在生精细胞中存在明显的共定位关系。

关键词：精子发生 HSD1 微管细胞分裂

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RYBP慢病毒表达载体的构建及对结肠癌细胞HCT116增殖的影响

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医学研究杂志 2013年第9期42卷 37-41页

作者：马雯陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室100005

目的构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响。方法用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为... 详细信息

目的构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响。方法用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为pWPI-linker。采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从肝癌SK-Hep-1细胞总RNA中扩增RYBP的全长开放阅读框序列,克隆入pWPI-linker载体中,得到pWPI-RYBP。利用人胚肾细胞HEK293T包装重组慢病毒颗粒,分析该慢病毒颗粒感染HCT116细胞的效率、RYBP蛋白的表达,用MTS方法分析RYBP过表达对HCT116细胞增殖的影响。结果用改造的pWPI-linker载体成功构建慢病毒表达载体pWPI-RYBP包装的慢病毒颗粒能高效感染HCT116细胞,表达出Flag-RYBP融合蛋白。MTS方法分析表明,RYBP的过表达抑制HCT116细胞的增殖,增殖抑制率达26.1%。结论改建的慢病毒表达载体pWPI-linker带有可供选择的多个单克隆位点和标签蛋白序列,为今后基于pWPI载体的克隆构建和表达蛋白质的分析提供了极大的便利;RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP的构建为进一步研究RYBP的生物学功能及基因治疗奠定了基础。

关键词： RYBP 慢病毒载体 HCT116 细胞增殖

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人急性髓系白血病小鼠模型的建立

人急性髓系白血病小鼠模型的建立

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第四届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：林海双宋利张俊武中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的:为了在小鼠体内研究人白血病的发生发展机制,我们构建了人急性髓系白血病小鼠模型。方法:首先通过对NOD/SCID免疫缺陷小鼠进行亚致死剂量的X射线全身照射(剂量为300cGy),随后进行小鼠尾静脉注射人白血病细胞系HL-60(1×10～7个... 详细信息

目的:为了在小鼠体内研究人白血病的发生发展机制,我们构建了人急性髓系白血病小鼠模型。方法:首先通过对NOD/SCID免疫缺陷小鼠进行亚致死剂量的X射线全身照射(剂量为300cGy),随后进行小鼠尾静脉注射人白血病细胞系HL-60(1×10～7个/只)或从AML病人分离出的骨髓细胞(1×10～6个/只),对照组,注射HL60细胞实验组和病人骨髓细胞实验组各5只小鼠。期间随时观察小鼠的临床

关键词：小鼠模型阳性率 AML 人急性髓系白血病临床表征

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人急性髓系白血病小鼠模型的建立

人急性髓系白血病小鼠模型的建立

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第四届泛环渤海生物化学与分子生物学会2013年学术交流会

作者：林海双宋利张俊武中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的:为了在小鼠体内研究人白血病的发生发展机制,我们构建了人急性髓系白血病小鼠模型.方法:首先通过对NOD/SCID免疫缺陷小鼠进行亚致死剂量的X射线全身照射(剂量为300cGy),随后进行小鼠尾静脉注射人白血病细胞系HL-60(1×107个/只...

目的:为了在小鼠体内研究人白血病的发生发展机制,我们构建了人急性髓系白血病小鼠模型.方法:首先通过对NOD/SCID免疫缺陷小鼠进行亚致死剂量的X射线全身照射(剂量为300cGy),随后进行小鼠尾静脉注射人白血病细胞系HL-60(1×107个/只)或从AML病人分离出的骨髓细胞(1×106个/只),对照组,注射HL60细胞实验组和病人骨髓细胞实验组各5只小鼠.

关键词：

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雌激素受体作用的分子机制及靶向治疗研究进展

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医学研究杂志 2013年第3期42卷 182-185页

作者：黄卉许增禄黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院人体解剖与组织胚胎学教研室 100005 北京协和医学院生物化学与分子生物学研究室 100005 北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室 100005

雌激素通过雌激素受体一仅（estrogenreceptora，ERa）和雌激素受体-β（estrogenreceptorB，ERβ）起作用。此后又发现了一种新的G蛋白偶联的雌激素受体（Gprotein—coupledreceptor30／Gprotein—cou—piedestrogenreceptor-1，GPR30... 详细信息

关键词：激素受体作用靶向治疗分子机制雌激素受体 G蛋白偶联 GPR30 ERβ

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人载脂蛋白AV原核表达载体的构建与纯化研究

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心肺血管病杂志 2013年第4期32卷 499-502页

作者：李国平隋靖喆毕楠满永王抒陈保生黎健卫生部北京医院卫生部-北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所-中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白。方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段。PCR产物和原核... 详细信息

目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白。方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段。PCR产物和原核表达载体pET30b经核酸内切酶双切后连接,连接产物经转化至大肠杆菌感受态细胞Top10,挑选克隆测序。重组质粒pET30b-apoAV转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达条件,重组的apoAV经镍离子螯合树脂纯化获得。结果:经测序证实人apoAV目的基因成功克隆入pET30b原核表达载体中,经过IPTG诱导有约40KD的特异性蛋白表达,与预期大小一致。该蛋白在IPTG诱导下的最佳表达时间为5h,最佳浓度在31.3μmol/L。纯化的apoAV纯度在95%以上,产率约为15 mg/L。结论:成功构建人apoAV的原核表达载体,实现了高效表达和纯化,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。

关键词：载脂蛋白AV 原核表达蛋白纯化

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尿液有可能成为生物标志物的金矿吗?

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中国科学：生命科学 2013年第8期43卷 708-708页

作者：高友鹤中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所生理与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

生物标志物的研究没有像很多人预想的那样很快地取得很多成果．人们主要关注的还是血液中的标志物，毕竟血液和所有的器官都联系的那么直接和紧密．有可能寻找标志物的地方不合适吗？有可能有更好的生物标志物金矿吗？

关键词：生物标志物金矿尿液直接和血液

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