检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 618-621,F0004页

作者：倪冷刘昌伟刘暴宋伟李天佳王琳芳中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—x... 详细信息

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL构建成功，感染人脐静脉内皮细胞后可成功表达目的蛋白bcl—xL，膜联蛋白V／异硫氰酸荧光素（AnnexinV／FITC）荧光染色及碘化丙锭（PI）染色结果提示，在氧化应激下，重组腺病毒感染组早期及中晚期细胞凋亡率均较对照组（H2O2组）显著降低，两组早、中晚期凋亡率分别为（3．7±0．2）％、（10．3±0．5）％（P〈0．01）及（6．8±1．3）％、（18．3±2．8）％（P〈0．05）。结论成功构建重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL，它可显著降低氧化应激介导的血管内皮细胞凋亡。

关键词： B细胞淋巴瘤白血病-xL 腺病毒脐静脉内皮细胞氧化应激

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MicroRNA-125b在胃癌组织中的高表达并促进胃癌细胞系HGC-27和MGC-803的增殖

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基础医学与临床 2012年第5期32卷 500-504页

作者：阎文婷蒋凤兵王芳余佳冯涛重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨microRNA-125b(miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mi... 详细信息

目的探讨microRNA-125b(miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mimic转染胃癌细胞系HGC-27和MGC-803,确认过表达成功后,分别使用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测过表达miR-125b对细胞增殖和凋亡的影响。结果证实在胃癌患者组织中miR-125b的表达水平显著高于癌旁对照组(P<0.01)。在胃癌细胞系HGC-27和MGC-803中过表达miR-125b后,细胞增殖明显增加:转染72 h,HGC-27(scramble组:1.632±0.09,mimic组:2.473±0.08),MGC-803(scramble组:1.603±0.05,mimic组:2.554±0.07)),同时细胞凋亡也受到抑制。结论 miR-125b可能作为癌基因在胃癌中发挥作用,并对细胞增殖和凋亡具有显著影响。

关键词： microRNA-125b 胃癌细胞增殖细胞凋亡

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AIDS患者γδ T细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4^+ T细胞

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 778-782页

作者：李珍焦艳梅崔莲仙吴昊何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+... 详细信息

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+T细胞,加入植物血凝素(PHA)和白细胞介素-2(IL-2)共同培养,建立自体HIV感染的CD4+T细胞模型。流式细胞术检测HIV-P24+CD4+T细胞的比例。乳酸脱氢酶(LDH)法测定γδT细胞的细胞毒作用。结果培养到第10天时,HIV-P24+CD4+T细胞的比例达到最高值。AIDS患者的γδT细胞不仅能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞(细胞溶解率为71.1±97),而且对HIV也有一定的杀伤作用(细胞溶解率为24.2±18.2)。而健康志愿者γδT细胞对自体CD4+T细胞没有杀伤作用(细胞溶解率为4.3±10.1)。结论 AIDS患者γδT细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞,为采用γδT细胞过继免疫治疗AIDS提供了依据。

关键词： γδT细胞人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征

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2009甲型H1N1疫苗株与普通季节性H1N1疫苗株在呼吸道细胞中感染效率的比较

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基础医学与临床 2012年第6期32卷 613-617页

作者：王玉国洪小栩何丽芳杨宁王丽丽赵琼英蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家药典委员会北京100061 云南沃森生物技术股份有限公司云南昆明650106

目的探讨2009甲型H1N1疫苗株与季节性H1N1疫苗株在人呼吸道细胞中感染效率的差异。方法用间接免疫荧光法检测H1N1病毒感染A549、CNE-2Z、H1650、Hep-2和MRC-5细胞的效率;用间接免疫荧光法检测抑制因子对H1N1病毒侵入细胞的影响。结果 1)... 详细信息

目的探讨2009甲型H1N1疫苗株与季节性H1N1疫苗株在人呼吸道细胞中感染效率的差异。方法用间接免疫荧光法检测H1N1病毒感染A549、CNE-2Z、H1650、Hep-2和MRC-5细胞的效率;用间接免疫荧光法检测抑制因子对H1N1病毒侵入细胞的影响。结果 1)2009甲型H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率:H1650>A549>CNE-2Z>MRC-5>Hep-2;季节性H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率A549>CNE-2Z>H1650>MRC-5>Hep-2;2)2009甲型H1N1疫苗株和季节性H1N1疫苗株均依赖于内吞作用进入细胞。结论在A549细胞中,季节性H1N1疫苗株的感染效率明显高于甲型H1N1疫苗株;在H1650细胞中,甲型H1N1疫苗株的感染效率明显高于季节性H1N1疫苗株。

关键词：甲型H1N1病毒流感病毒呼吸道细胞感染效率

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EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中表达

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基础医学与临床 2012年第4期32卷 369-374页

作者：蒋凤兵阎文婷朱勇王斌马艳妮余佳施琼重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学第一附属医院普外科山西太原030001

目的研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控。方法氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达。生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点... 详细信息

目的研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控。方法氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达。生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点。并经染色质免疫共沉淀(ChIP)与双荧光报告基因实验验证EKLF与这些位点结合的生物学意义。结果 Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,miR-96表达显著升高,且在48 h表达最高(3.94±0.64,P<0.05)。生物信息学分析显示miR-96转录起始位点上游2.0 kb内含有多个EKLF结合位点。经ChIP验证这些位点有EKLF的结合,且EKLF与这些位点结合能募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)结合,起始转录。进一步的双荧光报告基因实验也证明EKLF对miR-96转录起始点上游序列具有转录激活作用。结论 EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中的表达。

关键词：红系分化 EKLF miR-96 染色质免疫共沉淀

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重组人p75NTR169-Fc抗酶裂嵌合体在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

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医学研究杂志 2012年第4期41卷 48-52页

作者：景丽玲王欣陈虹张俊文中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将... 详细信息

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将两组扩增产物混合变性、复性后再扩增,得到"p75NTR(1～169)-IgG Fc(216～433)"融合基因,缩写为p75NTR169-Fc。(2)应用DNA重组技术将p75NTR169-Fc融合DNA片段经NcoⅠ、EcoRⅠ酶切插入到pET28a(+)原核表达载体中,获得pET28a-p75NTR169-Fc重组质粒。(3)利用pET28a(+)/BL21(DE3)原核表达系统诱导表达目的蛋白,经protein A亲和层析纯化,得到纯度约96%的p75NTR169-Fc重组蛋白质。(4)用MTT方法,以PC12细胞检验不同剂量重组蛋白抗β-淀粉样肽(Aβ25～35)细胞毒的作用。结果 (1)成功构建了pET28a-p75NTR169-Fc/BL21(DE3)表达系统,其高效表达可溶性重组蛋白。实验表明:该重组蛋白p75NTR169-Fc稳定性好,不再被蛋白酶降解,为单一条带。亲和层析纯化后,分子质量均一。(2)p75NTR169-Fc与p75NTR竞争结合Aβ(25～35),拮抗Aβ(25～35)对PC12的细胞毒作用。结论重组人抗酶裂嵌合体蛋白p75NTR169-Fc具有生物学活性,在临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)上具有应用前景,系针对神经退行性疾病的新的候选药物。

关键词： p75NTR169-Fc p75NTR β-淀粉样肽(Aβ)

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染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

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医学研究杂志 2012年第1期41卷 19-23页

作者：赵忠亮赵吉成代辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP-1和ACF;建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功。结论利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础。

关键词：组蛋白ACF NAP-1染色质组装

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JMJD6参与调节肿瘤抑制因子p53的转录活性

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医学研究杂志 2012年第8期41卷 21-25页

作者：张艳君程谟斌代辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室

目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系... 详细信息

目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系统检测JMJD6对p53靶基因启动子活性的影响;体外羟基化实验和质谱鉴定JMJD6的羟化酶活性。结果 JMJD6与p53相互作用,并由p53的C端结构域介导;JMJD6参与激活p53的转录活性;JMJD6具有赖氨酸羟化酶活性,可以催化组蛋白H4发生羟基化。结论赖氨酸羟化酶JMJD6可以结合肿瘤抑制因子p53并参与调节其转录活性。

关键词： p53 JMJD6 赖氨酸羟基化

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RanBPM的结构和功能

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生命的化学 2012年第1期32卷 55-61页

作者：张俊文陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

RanBPM是Ran蛋白在微管组织中心的结合蛋白。RanBPM包含5个结构域,分别是氨基端的脯氨酸结构域、SPRY结构域、LiSH结构域、CTLH结构域和CRA结构域。其中SPRY结构域和CRA结构域介导RanBPM与其它蛋白质间相互作用。RanBPM能与众多蛋白质... 详细信息

RanBPM是Ran蛋白在微管组织中心的结合蛋白。RanBPM包含5个结构域,分别是氨基端的脯氨酸结构域、SPRY结构域、LiSH结构域、CTLH结构域和CRA结构域。其中SPRY结构域和CRA结构域介导RanBPM与其它蛋白质间相互作用。RanBPM能与众多蛋白质相互作用,因而被认为是脚手架蛋白(scaffolding protein),它和几种受体蛋白相互作用后参与了细胞内多种信号转导途径。RanBPM能与细胞周期相关蛋白相互作用,调节细胞周期,它还参与了免疫系统、生殖系统和神经系统的调节。此外,RanBPM还能抑制蛋白质泛素化,是一个肿瘤细胞的抑制因子。

关键词： RanBPM 脚手架蛋白蛋白质相互作用

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人外周血新鲜分离的αβ T细胞与γδ T细胞microRNA表达差异比较

人外周血新鲜分离的αβ T细胞与γδ T细胞microRNA表达差异比较

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第八届全国免疫学学术大会

作者：朱于莉李珍崔莲仙何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:比较新鲜分离的人外周血中αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达。材料和方法:新鲜采集健康志愿者外周静脉血,用淋巴细胞分离液分出人外周血单个核细胞(PBMC)后,用磁珠分别分选出αβT细胞与γδT细胞,提取 RNA并反转录,进行mi... 详细信息

目的:比较新鲜分离的人外周血中αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达。材料和方法:新鲜采集健康志愿者外周静脉血,用淋巴细胞分离液分出人外周血单个核细胞(PBMC)后,用磁珠分别分选出αβT细胞与γδT细胞,提取 RNA并反转录,进行microRNA实时荧光定量PCR。首先对3位志愿者共351条免疫相关的microRNAs进行检测,获得两者之差异表达谱;继而在20位志愿者中对αβT细胞与γδT细胞差异表达的microRNAs进行验证,并对结果进行统计学分析。结果:在3位健康志愿者的筛查中,得到αβT细胞与γδT细胞有统计学意义的差异表达microRNAs共13条(P<0.05)。在进一步对20位健康志愿者的验证中,不仅有已获得的13条差异表达microRNAs,而且结合文献资料又增加8条与免疫学功能相关的microRNAs,共21条microRNAs作为检测对象进行验证,最终得到有统计学意义的差异表达microRNAs 14条(P<0.05,其中12条P<0.01),分别是miR-99a-5p、miR-125b-5p、miR-31-5p、miR-365a-3p、miR-193b-3p、miR-450a-5p、miR-150-5p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-22-3p、miR-22-5p、miR-24-3p、miR-34a-5p和miR-9-5p,其中前7条microRNAs在γδT细胞中表达量低于αβT细胞;后7条则在前者中的表达高于后者。但未发现在αβT细胞或γδT细胞中特异表达的microRNA。结论:本实验通过实时定量PCR的方法,对数十位健康志愿者外周血中新鲜分离的αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达谱进行检测,得到了14条在统计学中具有明显差异的microRNAs。实验结果提示,这些microRNAs在不同个体、不同T细胞亚型中表达相对稳定,进而为深入探讨microRNA在不同T细胞亚型的分化发育以及功能差异中的作用奠定基础。

关键词： αβT细胞 γδT细胞 microRNAs表达差异

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