检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2025年第5期45卷 622-626页

作者：刘译阳王芳余佳李卫倩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨谷氨酸-草酰乙酸转氨酶2基因(GOT2)在急性髓系白血病细胞中的功能。方法构建针对GOT2的shRNA,使用shRNA在人单核细胞白血病细胞系THP-1中抑制GOT2基因的表达。通过RT-qPCR检测GOT2 mRNA表达水平,Western blot检测GOT2蛋白表达... 详细信息

目的探讨谷氨酸-草酰乙酸转氨酶2基因(GOT2)在急性髓系白血病细胞中的功能。方法构建针对GOT2的shRNA,使用shRNA在人单核细胞白血病细胞系THP-1中抑制GOT2基因的表达。通过RT-qPCR检测GOT2 mRNA表达水平,Western blot检测GOT2蛋白表达水平的变化。采用比色法检测细胞内游离氨基酸含量变化。检测细胞GOT2表达缺失对THP-1细胞功能的影响,包括:CCK8法评估细胞增殖情况;流式细胞测量术分析细胞凋亡水平。结果使用GOT2 shRNA干扰后,THP-1细胞GOT2的mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照组相比,敲低GOT2不影响细胞内谷氨酸含量(P>0.05),但会显著下调天冬氨酸含量(P<0.05);敲低GOT2显著降低了THP-1细胞的活性,使细胞增殖受阻(P<0.05)、凋亡增加(P<0.05)。结论下调GOT2可显著降低急性髓系白血病细胞系内天冬氨酸水平,抑制细胞生长并诱导细胞凋亡,提示GOT2在急性髓系白血病的氨基酸代谢调控中可能发挥关键作用。

关键词： GOT2 急性髓系白血病天冬氨酸

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肺芽类器官中ID2的表达促进肺血管形成

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 623-629页

作者：刘洪宪杨隽中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 浙江大学医学院基础医学院生理学系浙江杭州310058

目的研究在肺早期发育中,肺芽中DNA结合抑制因子-2(ID2)对肺血管形成的作用。方法利用CRISPR/Cas9系统对人胚胎干细胞(hESCs)进行基因编辑,构建ID2敲除载体,将正常hESCs和ID2敲除株定向分化为内皮细胞(ECs)和肺芽类器官(LBOs);应用荧光... 详细信息

目的研究在肺早期发育中,肺芽中DNA结合抑制因子-2(ID2)对肺血管形成的作用。方法利用CRISPR/Cas9系统对人胚胎干细胞(hESCs)进行基因编辑,构建ID2敲除载体,将正常hESCs和ID2敲除株定向分化为内皮细胞(ECs)和肺芽类器官(LBOs);应用荧光定量PCR检测分化过程中ID2、CD31和NKX2.1等基因表达,流式细胞测量术分析分化效率;蛋白质免疫印迹检测ID2、CD31和PAX9等蛋白表达水平。通过ECs与LBOs的3D共培养,比较不同来源的LBOs对ECs成管功能的影响。结果ID2在hESCs向ECs分化过程中能够促进细胞进入中胚层阶段;而ID2缺失则导致大量成管功能缺陷ECs的形成;ID2可促进hESCs向LBOs分化;LBOs能够促进肺血管内皮细胞的成管功能,而敲除ID2使这一促进作用减弱。结论在肺发育早期,ID2的表达影响ECs和LBOs的分化效率和功能,肺芽中的ID2的缺失会导致其周围的肺血管生成减少。

关键词： DNA结合抑制因子-2(ID2) 肺芽类器官(LBOs) 内皮细胞(ECs)

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Dicer1缺失对小鼠早期神经发育的影响

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基础医学与临床 2021年第6期41卷 818-824页

作者：刘高澳彭小忠舒鹏程中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物研究所云南昆明650118

目的利用Dicer1条件敲除小鼠,通过RNA-seq技术在转录组水平分析microRNAs(miRNAs)对哺乳动物大脑早期发育的影响。方法构建D6-Cre-Dicer1条件敲除小鼠,实验分为对照组(Ctrl)和条件敲除组(cKO)。苏木精-伊红和免疫荧光染色比较敲除前后... 详细信息

目的利用Dicer1条件敲除小鼠,通过RNA-seq技术在转录组水平分析microRNAs(miRNAs)对哺乳动物大脑早期发育的影响。方法构建D6-Cre-Dicer1条件敲除小鼠,实验分为对照组(Ctrl)和条件敲除组(cKO)。苏木精-伊红和免疫荧光染色比较敲除前后组织形态差异;选取E14.5 D6-Cre介导的Dicer1条件性敲除的小鼠背侧皮质,提取总RNA,利用RNA-seq技术分析Dicer1敲除前后转录水平差异。结果与对照组相比,条件敲除组1个月左右致死,P3时皮层神经元发育异常,皮层和海马结构部分缺失;通过RNA-seq分析,共筛选出差异表达基因45个,上调基因11个,下调基因34个(P<0.05)。差异基因富集于NF-κB信号通路、Wnt信号通路、MAPK-ERK信号通路、JAK-STAT信号通路和DNA损伤应激通路等。结论在发育早期E14.5时Dicer1参与调节多条信号通路,影响部分皮层层次标志物的表达,抑制lncRNA Xist的表达,调节皮质发育。

关键词： Dicer1 D6-Cre 大脑背侧皮质 RNA-seq lncRNA Xist

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IDH1调控干扰素通路相关基因IFIT3的表达

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基础医学与临床 2021年第7期41卷 988-994页

作者：唐婉军彭小忠韩为中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究在人胶质瘤细胞系LN229中异柠檬酸脱氢酶1基因(IDH1)对RNA结合蛋白(RBPs)表达的影响。方法首先通过慢病毒感染构建IDH1稳定敲低和对照组LN229细胞株,分别对两组细胞株进行转录组测序(RNA-seq),利用limma包分析差异表达基因(DEGs... 详细信息

目的探究在人胶质瘤细胞系LN229中异柠檬酸脱氢酶1基因(IDH1)对RNA结合蛋白(RBPs)表达的影响。方法首先通过慢病毒感染构建IDH1稳定敲低和对照组LN229细胞株,分别对两组细胞株进行转录组测序(RNA-seq),利用limma包分析差异表达基因(DEGs)及其富集通路;然后通过string比对RBP数据库筛选出差异表达的RBPs,构建蛋白相互作用网络并挑选出候选RBPs;最后在IDH1敲低、过表达和R132H突变的细胞系中进行表达量验证。结果在IDH1敲低的LN229细胞株中,利用RNA-seq共筛选到259个DEGs,其中146个表达上调,113个表达下调;这些DEGs中包括14个编码RBP的基因,其中9个RBPs均为干扰素通路相关基因,并且具有密切的相互作用;与对照组相比,IDH1敲低时这9个RBPs表达水平均显著上调(P<0.001),IDH1过表达时仅IFIT3表达显著下降(P<0.01),而IDH1突变时IFIT3的表达水平的改变无统计学意义。结论在人胶质瘤细胞系LN229中,IDH1可调控干扰素通路相关基因IFIT3的表达。

关键词：胶质瘤 IDH1 干扰素通路 IFIT3

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CFSE标记神经祖细胞方法的建立与验证

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 648-652页

作者：周佳锋马孟杰彭小忠舒鹏程中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的建立并验证羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光探针标记神经祖细胞(NPCs)的方法。方法在胚胎期小鼠侧脑室注射CFSE以标记室周区(VZ)细胞,在注射后的1 h和3 h分别收集组织,通过免疫荧光方法检测其特异性。在注射后的1 h分离... 详细信息

目的建立并验证羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光探针标记神经祖细胞(NPCs)的方法。方法在胚胎期小鼠侧脑室注射CFSE以标记室周区(VZ)细胞,在注射后的1 h和3 h分别收集组织,通过免疫荧光方法检测其特异性。在注射后的1 h分离出背侧新皮质,通过流式细胞荧光分选术(FACS)分选强阳性细胞,并通过干细胞标志物、神经元标志物等验证。结果CFSE能够瞬时标记VZ区细胞,标记窗在3~6 h。CFSE进行长时程标记会出现衰减。利用CFSE分选所得细胞70%为神经祖细胞,少量为神经元等。结论CFSE能够用于瞬时及长时程在体标记。CFSE还可用于分选神经祖细胞,但尚需调整分选策略以提高特异性(FACS)。

关键词：羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE) 神经祖细胞流式细胞荧光分选术(FACS)

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4,4'-二甲氧基查耳酮改善高脂饲养小鼠的胰岛素敏感性

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基础医学与临床 2021年第1期41卷 77-81页

作者：张伟虹赵微李春美解相宏姚红刘晓军山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察黄酮类药物4,4'-二甲氧基查耳酮(DMC)在高脂饲养的小鼠中胰岛素敏感性的变化,并探讨其作用机制。方法将高脂喂养的野生型C57/BL 6小鼠分为对照组和实验组每隔1 d按3μg/kg腹腔分别注射药物DMC和溶剂DMSO。每周检测记录两组... 详细信息

目的观察黄酮类药物4,4'-二甲氧基查耳酮(DMC)在高脂饲养的小鼠中胰岛素敏感性的变化,并探讨其作用机制。方法将高脂喂养的野生型C57/BL 6小鼠分为对照组和实验组每隔1 d按3μg/kg腹腔分别注射药物DMC和溶剂DMSO。每周检测记录两组小鼠进食和体质量,在第6周检测小鼠糖耐量(GTT)、胰岛素耐量(ITT)和丙酮酸钠耐量(PTT)实验;用免疫组化和HE染色检测小鼠脂肪组织变化。结果与对照组小鼠相比,DMC实验组小鼠在给药后体质量及进食差异无统计学意义。ITT实验结果显示DMC实验组小鼠胰岛素水平得到改善(P<0.05),GTT和PTT实验结果差异无统计学意义。脂肪组织HE染色显示对照组小鼠脂肪组织内有炎性细胞渗出,F4/80免疫组化染色结果提示DMC实验组小鼠脂肪组织内巨噬细胞浸润减少。结论药物DMC可以通过减少脂肪组织内巨噬细胞浸润改善高脂饲养小鼠的胰岛素敏感性。

关键词： 4 4'-二甲氧基查耳酮(DMC) 脂肪组织炎性反应胰岛素敏感性

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两种体外培养星形胶质细胞的比较

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中国医学科学院学报 2019年第4期41卷 524-528页

作者：沈慧许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的对2种常用培养方法得到的星形胶质细胞进行生物学功能上的比较分析。方法用啮齿类新生儿大脑星形胶质细胞分离培养方法培养原代星形胶质细胞,用胎牛血清分化神经干细胞制备分化星形胶质细胞。显微镜下观察2种星形胶质细胞的细胞形... 详细信息

目的对2种常用培养方法得到的星形胶质细胞进行生物学功能上的比较分析。方法用啮齿类新生儿大脑星形胶质细胞分离培养方法培养原代星形胶质细胞,用胎牛血清分化神经干细胞制备分化星形胶质细胞。显微镜下观察2种星形胶质细胞的细胞形态并用免疫荧光染色检测星形胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达量,10种细胞因子处理2种细胞后检测GFAP等的变化,用表达谱芯片检测GFAP、谷氨酸合成酶(GS)、转运蛋白(xCT)、神经调节蛋白-1(NRG)、谷氨酸受体蛋白(NMDA)、脂蛋白脂肪酶(LPL)等基因的表达并进行比较。结果 2种星形胶质细胞形态和GFAP表达量不同,表达谱芯片检测结果显示原代星形胶质细胞GFAP、GS、xCT、NRG、NMDA、LPL基因的表达均显著高于分化星形胶质细胞。10种细胞因子的处理均不能使原代星形胶质细胞GFAP表达升高,但转化生长因子-β(TGF-β)可以使分化的星形胶质细胞GFAP表达升高。结论与分化的星形胶质细胞相比,原代培养的星形胶质细胞更类似于反应态星形胶质细胞,而TGF-β可促进分化细胞向反应态细胞过渡。

关键词：星形胶质细胞神经干细胞胶质纤维酸性蛋白转化生长因子-β

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一例X-连锁无丙种球蛋白血症患者BTK基因新变异体的鉴定

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基础医学与临床 2021年第4期41卷 467-471页

作者：张晗孙阳王蓉蓉张文张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院麦库西克-张孝骞协和遗传医学中心医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科国家皮肤与免疫临床医学中心卫生部重点实验室北京100730

目的对一例X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)患者进行致病基因变异鉴定。方法收集患者及家庭成员临床资料并采集外周血,从患者外周血中提取基因组DNA并进行全外显子组测序,筛查可疑致病变异,并对其父母基因组DNA进行Sanger测序验证及基因型... 详细信息

目的对一例X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)患者进行致病基因变异鉴定。方法收集患者及家庭成员临床资料并采集外周血,从患者外周血中提取基因组DNA并进行全外显子组测序,筛查可疑致病变异,并对其父母基因组DNA进行Sanger测序验证及基因型-表型共分离分析,从患者外周血中提取RNA,反转录为cDNA后进行Sanger测序,同时进行实时定量PCR实验检测该基因表达水平,进而对该变异的致病性和致病机制进行分析。结果患者携带BTK基因c.240+3A>C新变异,该变异遗传自母亲,在家系中呈基因型-表型共分离,该变异体在dbSNP153、ExAC、gnomAD和HGMD等公共数据库未见报道。该变异属于剪接变异,cDNA测序显示该变异造成BTK基因3号内含子5′端106 bp碱基插入到第3号和第4号外显子之间,引起阅读框改变,最终导致终止密码子提前出现。患者BTK基因mRNA表达水平明显降低。结论BTK基因c.240+3A>C处剪接变异可能导致该患者患X-连锁无丙种球蛋白血症。

关键词： X-连锁无丙种球蛋白血症全外显子组测序技术 BTK基因致病变异

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一种改良的癫痫放电脑电图监测方法

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中国医学科学院学报 2019年第1期41卷 53-56页

作者：施新泽许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究OpenBCI模块对小鼠癫痫放电的检测效果。方法选用8～12周龄C57BL/6J小鼠,分为对照组和癫痫模型组,建立海人酸诱导的小鼠癫痫模型,分别通过脑功能监护仪和OpenBCI模块监测其3周的脑电发作情况。结果脑电图数据显示,OpenBCI模块... 详细信息

目的探究OpenBCI模块对小鼠癫痫放电的检测效果。方法选用8～12周龄C57BL/6J小鼠,分为对照组和癫痫模型组,建立海人酸诱导的小鼠癫痫模型,分别通过脑功能监护仪和OpenBCI模块监测其3周的脑电发作情况。结果脑电图数据显示,OpenBCI模块可以同时监测8只小鼠的发作情况,对小鼠的静息放电、棘波放电、癫痫大发作放电及随后的抑制期都有良好的记录效果。结论 OpenBCI模块成本相对低廉,数据占用量小,在常规的脑电监测上基本可以替代临床脑功能监护仪系统,具有广泛的应用价值。

关键词：癫痫海人酸脑电图检测

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青稞酥油饮食对小鼠肠道菌群以及葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎症状的影响

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基础医学与临床 2021年第2期41卷 203-208页

作者：李春美赵微解相宏张伟虹杨佳卉李军刘晓军中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 北京大学第三医院消化科北京100191

目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小... 详细信息

目的探求青稞酥油饮食对小鼠肠道微生物分布及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的影响。方法定制饮食,将标准鼠繁殖料(N鼠料)中的大豆油和玉米次粉替换为等比例的酥油和生青稞粉,以制成定制饲料(C鼠料)。将28只5周龄雄性小鼠随机分为4组,每组7只:1)NW组:饲养以N鼠料和水;2)ND组:饲养以N鼠料和1.8%DSS;3)CW组:饲养以C鼠料和水;4)CD组:饲养以C鼠料和1.8%DSS。以7 d 1.8%DSS溶液之后换10 d蒸馏水为1个周期,共进行3个周期完成建模。匹拉米洞法测定小鼠粪便隐血进行DAI评分,选取结肠组织HE染色及粪便微生物16S rRNA高通量测序。结果青稞酥油饮食可提高正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,其中别样棒菌属增加。加入DSS诱导溃疡性结肠炎模型后,青稞酥油饮食组DAI评分显著增高(P<0.05),组织学检测结肠黏膜糜烂溃疡且肠组织腺体排列混乱,小鼠肠道菌群丰度和多样性降低(P<0.05),但梭菌属、萨特氏菌属增加(P<0.05)。结论青稞酥油饮食可增加正常小鼠肠道菌群丰度,改善肠道菌群组成,但对于DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎炎性反应无显著改善。

关键词：青稞酥油饮食 DSS诱导溃疡性结肠炎 16S rRNA高通量测序肠道菌群

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