检索结果-内蒙古大学图书馆

中国癌症杂志 2024年第6期34卷 561-570页

作者：郝弦黄建军杨文秀刘晋廷张军红罗钰蓓李青王大红高玉炜谭福云薄莉郑羽王荣冯江龙李静赵春华豆晓伟贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院乳腺外科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院急诊骨科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院中国医学科学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

背景和目的:2016年美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)宣布不再使用NCI-60细胞系进行药物筛选,提示传统的肿瘤细胞系失去作为药物研发和基础研究工具的价值。NCI-60细胞“退休”原因是基于癌症细胞系和动物的实验结果... 详细信息

背景和目的:2016年美国国家癌症研究所(National Cancer Institute,NCI)宣布不再使用NCI-60细胞系进行药物筛选,提示传统的肿瘤细胞系失去作为药物研发和基础研究工具的价值。NCI-60细胞“退休”原因是基于癌症细胞系和动物的实验结果没有在临床试验中获得对应的预期,导致绝大部分潜在药物临床试验失败。癌症细胞系失去价值归因于肿瘤细胞经过长期培养后,其增殖和转移等主要生物学行为和与之有关的关键蛋白质系统发生了根本改变,已不能代表患者的真实癌症特征。现阶段需要创立一种来源于患者新鲜癌症组织和具有清晰临床背景的新癌症模型。本研究旨在为药物研发和基础研究建立经济的患者来源的可以无限传代的乳腺癌原代细胞系。方法:乳腺癌组织在贵州医科大学附属医院乳腺外科收集。肿瘤组织样本收集得到贵州医科大学附属医院伦理委员会批准(伦理编号:2022伦理第313号),收集和使用肿瘤组织均遵守赫尔辛基宣言,患者的乳腺癌组织消化分离后在BCMI培养基中培养,待乳腺癌细胞增殖到一定数量时更换成DMEM培养基。乳腺癌细胞经短串联重复序列(short tandem repeat,STR)检测确定细胞特异性遗传学标志和来源。克隆形成实验和动物实验分析乳腺癌原代细胞系形成肿瘤的能力。结果:成功建立了6种乳腺癌原代细胞系。他们具有清晰的临床病理学特征,包括病理学标志性分子检测、临床诊断、治疗方案和结果以及确定的预后结果。STR检测确定了6种乳腺癌原代细胞系特异性遗传标志和确定了该细胞系的来源。克隆形成实验和动物移植实验说明乳腺癌原代细胞系增殖能力显著大于传统乳腺癌细胞系,二者在形成肿瘤能力方面存在明显的差异。结论:构建的6种乳腺癌原代细胞系为乳腺癌药物研发和基础研究提供了新的癌症模型。

关键词：乳腺癌原代细胞系药物研发基础研究新癌症模型

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LRG1抑制小鼠肝巨噬细胞活化从而改善代谢相关脂肪性肝病:基于增强TGF-β1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1164-1171页

作者：徐龙飞韩晶杨喆杨燕平陈金慧吴西军王琪洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学金阳医院检验科贵州贵阳550025 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学干细胞与组织工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织... 详细信息

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织和肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达。将原代肝巨噬细胞分为5组,对照组、脂肪变性肝细胞来源的上清(CM)刺激组、CM+LRG1组、CM+转化生长因子-β1(TGF-β1)组、CM+TGF-β1+LRG1组,各组培养24 h后,Western bot法检测一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平的表达,RT-PCR法检测iNOS、趋化因子1(CXCL-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平的表达。MAFLD小鼠分为4组,1组作为对照(6只),其余3组经尾静脉分别注射LRG1(6只)、TGF-β1(6只)或者TGF-β1+LRG1(6只),收集肝组织,经HE染色观察肝脏病理学变化,免疫组化法观察肝组织中F4/80+细胞的分布,RT-PCR法检测肝组织iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达。结果HFD小鼠肝组织和脂肪变性的肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达显著降低(P<0.05)。脂肪变性肝细胞来源的CM刺激明显促进肝巨噬细胞中iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达,而TGF-β1和LRG1联合刺激时明显抑制这些分子mRNA水平的表达(P<0.05)。小鼠HFD16周后,单独注射LRG1或TGF-β1均可减少肝内脂质沉积以及肝内巨噬细胞的浸润,二者联合上述改变更加明显。同时,TGF-β1和LRG1联合刺激时也明显抑制iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达(P<0.05)。结论LRG1通过增强TGF-β1信号通路抑制肝巨噬细胞浸润,从而缓解非酒精性脂肪肝的炎性反应。

关键词：富亮氨酸α2-糖蛋1 肝巨噬细胞代谢相关脂肪性肝病转化生长因子-β1 脂肪变性

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八个绿色组织特异性启动子的克隆及活性比较

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分子植物育种 2023年

作者：李姬霜薛旭徐静吴斌中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所濒危药材繁育国家工程实验室中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京市海淀区植物组织培养技术实验室

为了精准调控外源基因在特定的组织或器官中进行表达，减少不必要的资源浪费，同时提高植物光合途径的能量利用效率，增加生物固定总量，本研究查阅文献并从NCBI下载了来自6种植物的8个不同的绿色组织特异性启动子序列。通过PCR扩增得... 详细信息

为了精准调控外源基因在特定的组织或器官中进行表达，减少不必要的资源浪费，同时提高植物光合途径的能量利用效率，增加生物固定总量，本研究查阅文献并从NCBI下载了来自6种植物的8个不同的绿色组织特异性启动子序列。通过PCR扩增得到这些启动子后将其分别连至pTOPO-Blunt载体上进行测序验证；接着使用无缝克隆法或者酶切法构建了pCAMBIA2300+启动子+绿色荧光蛋白(GFP)表达载体；再将重组载体热击转化根癌农杆菌EHA105，并使用农杆菌介导的瞬时法转化烟草；最后通过观察GFP荧光强度来比较8个启动子的活性强弱。研究结果表明：来自番薯的Ibrbcs和来自牵牛的PNZIP启动子的荧光强度最接近CaMV 35S启动子，而来自玉米的PEPC启动子荧光最弱，启动子活性强弱顺序依次为：CaMV 35S>Ibrbcs>PNZIP>Ntrbcs>D540、Cmrbcs、Psak>Rca>PEPC。多个绿色组织特异性启动子的克隆及活性验证，为后续在绿色组织中实现外源多基因表达提供了理论依据和材料基础。可按照代谢途径中上游至下游基因绑定的启动子整体为由强至弱的顺序等原则，将可选的启动子调控元件协同使用不同终止子，与相关外源基因共同组成多个表达框，以构建多基因表达载体，进而完成转基因操作。本研究为相关植物基因工程试验中外源基因在绿色组织中的协同表达提供了良好基础。

关键词：启动子绿色组织特异性 GFP 基因克隆活性比较

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骨髓间充质干细胞缓解模拟微重力对小鼠大脑皮质的不利影响

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基础医学与临床 2024年第6期44卷 772-778页

作者：龚金涛厉建伟李玉恒李堑赵春华中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院组织工程中心北京100005 中国航天员科研训练中心、航天医学全国重点实验室北京100094

目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对微重力环境下大脑的保护和分子调节机制。方法以后肢去负荷(HU)模型模拟失重生理效应,将小鼠分为:对照组,HU模型组、BMSCs治疗组,每组6只,对比分析模拟微重力对小鼠大脑造成的损伤及BMSCs对损伤的修... 详细信息

目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对微重力环境下大脑的保护和分子调节机制。方法以后肢去负荷(HU)模型模拟失重生理效应,将小鼠分为:对照组,HU模型组、BMSCs治疗组,每组6只,对比分析模拟微重力对小鼠大脑造成的损伤及BMSCs对损伤的修复作用;利用RT-qPCR检测大脑皮质中关键促炎因子Il-6、Il-1β和Tnf-α的表达水平;利用免疫组织化学染色检测大脑皮质中小胶质细胞(IBA1阳性)和星形胶质细胞(GFAP阳性)的比例;利用Western blot检测细胞凋亡与衰老相关蛋白BAX、BCL-2、p21、p53的表达水平。结果与野生小鼠相比,后肢去负荷小鼠大脑皮质的Il-6、Il-1β和Tnf-α的表达水平显著上升(P<0.05),BAX、p21和p53蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),BCL-2蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),小胶质细胞(IBA1阳性)和星形胶质细胞(GFAP阳性)的比例升高(P<0.05);经过BMSCs治疗以后,HU小鼠大脑皮质的Il-1β的表达水平显著降低(P<0.05),BAX、p21和p53蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),BCL-2蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),小胶质细胞(IBA1阳性)和星形胶质细胞(GFAP阳性)的比例减少(P<0.05)。结论BMSCs通过抑制炎性反应、抗细胞凋亡与衰老来缓解模拟失重对小鼠大脑产生的不利影响。

关键词：间充质干细胞(MSCs) 微重力后肢去负荷凋亡细胞衰老

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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究

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生物技术通报 2022年第10期38卷 90-96页

作者：陈黎卢茜杨红兰张鹏何志旭贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科遵义563000

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 详细信息

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变检测

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清肺排毒汤对LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症的作用

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中成药 2023年第5期45卷 1462-1468页

作者：匡梦岚张丽娟卢攀攀解小芬胡光线沈祥春许键炜贵州医科大学药学院贵州贵阳550001 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 重庆医科大学附属第一医院重庆400010 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550004

目的探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预... 详细信息

目的探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预7 d。记录小鼠存活率、肺湿干重比,HE染色观察肺损伤程度,吉姆萨染色法及血液分析仪分类计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达,ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达。结果与模型组比较,清肺排毒汤高剂量组小鼠肺水肿和损伤程度,血清、BALF中炎性细胞因子和炎性细胞数量,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达和肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65,p-IκBα蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01)。结论清肺排毒汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子和介质释放,减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。

关键词：清肺排毒汤脂多糖急性肺损伤 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路炎症

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间充质干细胞工程化的DNA纳米结构构建及其在小鼠肺组织靶向递送中的应用

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1110-1116页

作者：李卓婷尚颖旭汪海燕蒋乔丁宝全李静赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心北京100005 国家纳米科学中心中国科学院纳米科学卓越创新中心中国科学院纳米系统与多级次制造重点实验室北京100190

目的将三维管状DNA折纸纳米结构(DONs)修饰于间充质干细胞(MSCs)膜表面得到DONs@MSCs,利用MSCs归巢肺组织的特点实现DONs向小鼠肺组织的靶向递送。方法利用计算机辅助工具进行DNA序列设计,得到三维管状DONs。利用原子力显微镜(AFM)表征D... 详细信息

目的将三维管状DNA折纸纳米结构(DONs)修饰于间充质干细胞(MSCs)膜表面得到DONs@MSCs,利用MSCs归巢肺组织的特点实现DONs向小鼠肺组织的靶向递送。方法利用计算机辅助工具进行DNA序列设计,得到三维管状DONs。利用原子力显微镜(AFM)表征DONs形貌,并通过琼脂糖凝胶电泳(AGE)验证功能基团的上载。采用生物正交代谢糖工程在MSCs细胞膜表面修饰荧光标记的DNA单链(ssDNA)。根据碱基互补配对原理,将DONs修饰在MSCs膜表面。利用共聚焦显微镜和流式细胞测量术分别检测单链以及DONs的上载情况,并利用活体成像系统观察DONs在小鼠肺组织中的分布。结果成功组装得到DONs。MSCs膜表面成功修饰单链,并成功杂交DONs得到DONs@MSCs。相比静脉注射DONs,DONs@MSCs在小鼠肺部的富集明显增强。结论DONs@MSCs能够用于DONs向小鼠肺组织的靶向运输,该方法为DONs后续在肺组织递送药物开发了新的策略。

关键词：间充质干细胞 DNA折纸纳米结构靶向递送

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骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的影响

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中国组织工程研究 2023年第19期27卷 2953-2959页

作者：潘杭朱向情何洁杨再玲田川吕冠柯阮光萍叶丽何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室、云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室、昆明市干细胞与再生医学重点实验室、基础医学实验室云南省昆明市650032 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室、细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室、贵州省再生医学重点实验室、省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室、中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院肿瘤医院贵州省贵阳市550004 四川省医学科学院、四川省人民医院四川省成都市610000 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:随着年龄的增长,脾脏的结构和功能发生改变,胸腺在青春期之后逐渐萎缩退化,导致机体发生免疫功能障碍。目的:探讨骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的作用。方法:筛选出平均年龄25岁老年猕猴6只,随机分为老年组和老... 详细信息

背景:随着年龄的增长,脾脏的结构和功能发生改变,胸腺在青春期之后逐渐萎缩退化,导致机体发生免疫功能障碍。目的:探讨骨髓间充质干细胞对衰老猕猴胸腺及脾脏结构和功能的作用。方法:筛选出平均年龄25岁老年猕猴6只,随机分为老年组和老年治疗组各3只;老年治疗组猕猴经股静脉输注超顺磁性铁纳米颗粒标记的第4代骨髓间充质干细胞(1×10^(7)个/kg),1次/d,连续输注3 d,老年组猕猴在同一时间输注等体积的生理盐水;猕猴最后一次输注骨髓间充质干细胞5个月后给予安乐死处理,取出胸腺以及脾脏组织;苏木精-伊红染色观察胸腺组织和脾脏组织的结构变化;免疫荧光染色分析胸腺组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;免疫组织化学染色分析脾脏组织中各种T细胞亚群以及衰老相关基因蛋白P21的表达量变化;安乐死处理猕猴之前抽取各组猕猴股静脉血5 mL,运用酶联免疫分析外周血血清中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α和白细胞介素1α的分泌水平。结果与结论:①超顺磁性铁纳米颗粒标记的骨髓间充质干细胞经过股静脉输注入猕猴体内能够成功定植在衰老胸腺和脾脏组织中发挥作用;②骨髓间充质干细胞移植治疗后,衰老猕猴中胸腺部分组织出现清晰的皮质与髓质交界,脂肪细胞减少,出现胸腺小体,向正常的胸腺组织结构转变;衰老猕猴中脾脏组织出现清晰的红髓与白髓分界,脾小体的边缘多完整,且巨噬细胞减少,向正常的脾脏组织结构转变;③与老年组相比,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中CD3^(+)、CD4^(+)以及CD8^(+)T细胞的表达量呈现增高的趋势,老年治疗组衰老胸腺和脾脏组织中P21蛋白的表达量呈现显著下降趋势;④与老年组相比,老年治疗组外周血中衰老相关分泌表型肿瘤坏死因子α以及白细胞介素1α的分泌水平呈现显著下降趋势;⑤上述结果表明,通过骨髓间充质干细胞的移植治疗,能够改善老年猕猴胸腺及脾脏组织的结构和功能。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞猕猴胸腺脾脏抗衰老免疫衰老相关分泌表型

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以“肾-三焦”系统诠释间充质干细胞实质

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基础医学与临床 2023年第1期43卷 46-50页

作者：张晓彤赵月纯朱镕嘉赵春华宋坪中国中医科学院广安门医院皮肤科北京100053 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

肾与三焦在结构与功能上密不可分,故此提出“肾-三焦”可能是间充质干细胞(MSCs)系统的本质,“肾-三焦”是对MSCs系统中医属性的探讨,以肾为本源、三焦为枢机,本文旨在从“肾精为体、三焦为用”的角度诠释MSCs系统的理论内涵,MSCs的形... 详细信息

肾与三焦在结构与功能上密不可分,故此提出“肾-三焦”可能是间充质干细胞(MSCs)系统的本质,“肾-三焦”是对MSCs系统中医属性的探讨,以肾为本源、三焦为枢机,本文旨在从“肾精为体、三焦为用”的角度诠释MSCs系统的理论内涵,MSCs的形态与分布及发挥功能的物质、途径、功能均可在“肾-三焦”系统中得以体现,并通过中医药理论为指导,运用MSCs的现代研究技术,在COVID-19等难治性疾病的应用中取得了较好的效果,对中西医研究的结合进行了初步探索。

关键词：间充质干细胞肾精三焦气化

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丁酸钠、Hemin及DMSO诱导K562红系分化作用的差异

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安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 746-751页

作者：刘含杨红兰莫晶张鹏范安然何志旭贵州医科大学组织工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004

目的比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异。方法检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2%DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235a表达量的变化。结果连续药物暴露120 ... 详细信息

目的比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异。方法检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2%DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235a表达量的变化。结果连续药物暴露120 h后结果显示,丁酸钠对K562细胞增殖有抑制作用,48~72 h细胞阻滞于G0/G1;96~120 h细胞阻滞于G2/M期,120 h TMB阳性率为(22.02±2.27)%。Hemin对K562细胞的增殖及细胞周期均无影响;120 h TMB阳性率为(90.83±2.69)%。DMSO处理的K562细胞其G0/G1期比例增多,但暴露时间大于72 h时,细胞增殖与对照组差异无统计学意义;120 h TMB阳性率为(1.84±0.48)%,相较于对照组阳性率(2.89±0.18)%差异无统计学意义。丁酸钠和Hemin处理120 h后血型糖蛋白A(CD235a)的表达水平较对照组和DMSO处理组升高,且2组间差异无统计学意义。DMSO处理组CD235a与对照组差异无统计学意义。结论通过综合比较红系分化诱导前后K562细胞增殖、细胞周期、TMB阳性率及CD235a表达量的变化发现,Hemin是较丁酸钠和DMSO体外诱导K562红系分化更有效的化学试剂。

关键词：丁酸钠氯化血红素 DMSO K562 红系分化

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