检索结果-内蒙古大学图书馆

中华骨与关节外科杂志 2025年第4期18卷 350-356页

作者：黄长发樊浩魏泽郝静刘理金刘苏郑志发刘菲赵丽娜吴志宏中国医学科学院、北京协和医学院北京100730 中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院骨科北京100730 中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院临床医学研究所、转化医学国家重大科技基础设施干细胞平台北京100730 疑难重症及罕见病全国重点实验室北京100730

目的:探讨中国中老年人群关节炎与心理健康的关联,并分析社交活动在这一关系中的潜在中介作用。方法:基于2020年中国健康与养老追踪调查(CHARLS)的数据,对19235名受访者进行横断面分析。采用logistic回归模型评估关节炎与心理健康之间... 详细信息

目的:探讨中国中老年人群关节炎与心理健康的关联,并分析社交活动在这一关系中的潜在中介作用。方法:基于2020年中国健康与养老追踪调查(CHARLS)的数据,对19235名受访者进行横断面分析。采用logistic回归模型评估关节炎与心理健康之间的关联,并通过Bootstrap方法(模拟1000次)检验社交活动的中介效应。结果:关节炎与心理健康问题风险增加显著相关(OR=1.84,95%CI:1.529~2.234,P<0.001),同时,关节炎患者参与社交活动的可能性较低(OR=0.91,95%CI:0.854~0.973,P<0.05)。中介效应检验结果表明,社交活动在关节炎与心理健康之间的关系中存在显著中介作用(P<0.05)。结论:关节炎、社交活动和心理健康之间存在重要关联,提示社交活动可能对关节炎患者的心理健康状况有影响,但仍需要进一步验证以确定是否可作为潜在干预策略。

关键词：关节炎心理健康社交活动中老年人中介效应

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snx8a基因在早期斑马鱼胚胎中空间和时间特异性表达

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贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 18-23页

作者：张乙进杨雁竹罗红莫大双舒莉萍江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室&细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室&贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收... 详细信息

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收集不同发育时相的野生斑马鱼胚胎进行全胚胎原位杂交,观察斑马鱼早期胚胎中snx8a的空间表达情况、使用RT-qPCR检测斑马鱼早期发育不同时期snx8a基因的表达情况。结果氨基酸序列比对结果显示斑马鱼Snx8a较Snx8b与人的SNX8同源性更高;对构建的原位杂交探针质粒双酶切鉴定及测序结果显示,构建的探针质粒序列正确、质粒可用;全胚胎原位杂交结果显示,斑马鱼snx8a基因在胚胎一细胞期就开始表达,之后特异表达于斑马鱼头部及尾部造血区;RT-qPCR结果显示,snx8a基因表达逐渐升高,在胚胎12 hpf时达到峰值(P<0.05)。结论斑马鱼snx8a基因为母源性基因,其可能与斑马鱼神经发育和造血发育相关。

关键词：斑马鱼 snx8a基因生物信息学分析全胚胎原位杂交胚胎发育

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4株患者原代细胞源的乳腺癌细胞系建立及初步研究

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基础医学与临床 2025年第2期45卷 183-188页

作者：罗钰蓓黄建军杨文秀张军红李静赵春华豆晓伟贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院乳腺外科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代... 详细信息

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代细胞的特异遗传标记。集落形成实验和球形成实验分析乳腺癌原代细胞系致瘤性。Real-time PCR和Western blot实验分析乳腺癌原代细胞上皮间充质转换分子。转移实验和侵袭实验分析乳腺癌原代细胞的转移能力。结果培养了4种乳腺癌原代细胞系BC25#,BC51#,BC56#和BC57#。这些乳腺癌细胞系培养基是DMEM培养基,可以传代,具有清楚的临床背景。STR基因分型确定了4种乳腺癌原代细胞系特异的遗传标记。集落形成实验和成球实验发现4种乳腺癌原代细胞系比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的形成肿瘤能力。Real-time PCR和Western blot实验发现,与传统的乳腺癌细胞T-47D相比,4种乳腺癌原代细胞系E-cadherin表达降低,vimentin表达升高。迁移实验和侵袭实验发现原代细胞系BC25#比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的转移能力。结论培养了4种可以传代的乳腺癌原代细胞系BC25#、BC51#、BC56#和BC57#,为乳腺癌基础研究提供了新的肿瘤细胞模型。

关键词：乳腺癌原代细胞系基础研究新肿瘤细胞模型

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高效液相色谱同时测定细胞基因组中5-甲基脱氧胞嘧啶及其衍生产物含量

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分析试验室 2024年

作者：杨喜善莫俊罗庆元周艳华张鹏曾柱黄文竹贵州医科大学生物与工程学院中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种... 详细信息

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种核苷在120 min内实现完全分离，且线性关系良好(R2> 0.995)，检出限为0.1068 ～ 0.5278 μmol/L，定量限为 0.3236 ～ 1.5995 μmol/L。HEK293T（TET1CD）细胞经DNA Dot Blot法检测，诱导后细胞基因组中5-羟甲基脱氧胞嘧啶（5hmdC）含量显著升高（P < 0.0001）；HPLC检测显示，诱导细胞基因组中5hmdC和5-羟甲基脱氧尿嘧啶（5hmdU）含量升高（P < 0.05），5-甲基脱氧胞嘧啶（5mdC）含量下降（P < 0.05），5-甲酰基脱氧胞嘧啶（5fdC）和5-羧基脱氧胞嘧啶（5cadC）未检出。检出样本回收率在100.2% ～ 113.5%之间，相对标准偏差在0.72% ～ 3.0%之间。本研究建立的HPLC方法，能够同时精确的检测基因组中5种修饰核苷的含量，能够替代传统的DNA Dot Blot法，为研究去甲基化中的碱基代谢产物提供了灵敏、可靠的检测途径。

关键词：高效液相色谱 5-甲基脱氧胞嘧啶(5mdC) 5-羟甲基脱氧胞嘧啶(5hmdC) 5-羟甲基脱氧尿嘧啶(5hmdU) 同时测定

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肿瘤干细胞在食管鳞状细胞癌中的研究进展

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中华肿瘤防治杂志 2022年第4期29卷 240-247页

作者：邓颖妮何志旭遵义医科大学附属医院(贵州省细胞工程重点实验室) 遵义医科大学附属医院(儿科) 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室

肿瘤干细胞是肿瘤细胞中具有自我更新能力及多向分化潜能的细胞亚群，具有极强的迁移和侵袭能力，与肿瘤的发生、转移、放疗敏感性及化疗耐药密切相关。食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，且>90%为鳞状细胞癌，目前仍缺乏早期... 详细信息

肿瘤干细胞是肿瘤细胞中具有自我更新能力及多向分化潜能的细胞亚群，具有极强的迁移和侵袭能力，与肿瘤的发生、转移、放疗敏感性及化疗耐药密切相关。食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，且>90%为鳞状细胞癌，目前仍缺乏早期诊断的有效靶标。本研究针对肿瘤干细胞对食管鳞状细胞癌(ESCC)的重要作用及相关研究成果进行综述，分析指出肿瘤干细胞与ESCC的恶性进展密切相关。高特异性的食管癌干细胞标志物有助于ESCC的早期诊断及治疗，而包含长链非编码RNA(LncRNA)、微小RNA及环状RNA在内的非编码RNA能够通过调控下游信号通路或靶基因影响食管癌干细胞从而影响病情进展。因此，改善食管癌干细胞的分选及鉴定方法，发掘具有较强特异性的标志物，开发从多种途径针对食管癌干细胞的新型靶向治疗方式，促进相关研究成果的临床转化，将有效增强ESCC放化疗敏感性并延缓其恶性进展，同时提高ESCC患者的生存率，有望推动ESCC治疗的精准化进程。

关键词：食管癌肿瘤干细胞标志物非编码RNA 放疗化疗分子靶向治疗

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mRNA致敏的树突状细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展

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药学学报 2019年第10期54卷 1818-1823页

作者：赵星顾杨卓宋相容四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川成都610041 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心/中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室免疫学教研室贵州贵阳550004

肿瘤免疫治疗旨在恢复或增强机体的免疫监视功能来对抗肿瘤,与传统的抗肿瘤治疗直接聚焦于肿瘤病灶局部不同,其具有不良反应小、作用持久、特异性强及适于个体化治疗等优势。树突状细胞(DCs)作为功能最强的抗原递呈细胞,能够在体内诱导... 详细信息

肿瘤免疫治疗旨在恢复或增强机体的免疫监视功能来对抗肿瘤,与传统的抗肿瘤治疗直接聚焦于肿瘤病灶局部不同,其具有不良反应小、作用持久、特异性强及适于个体化治疗等优势。树突状细胞(DCs)作为功能最强的抗原递呈细胞,能够在体内诱导强烈的特异性免疫应答。目前基于DCs的肿瘤免疫治疗,是将肿瘤抗原通过一定方法负载于DCs,从而激发特异性抗肿瘤免疫应答。用编码肿瘤抗原的mRNA致敏DCs是目前研究较为广泛的一种肿瘤抗原负载方式,对应的免疫治疗策略已在临床试验中显示出较好的抗肿瘤疗效。因此, mRNA致敏的DCs是一种极具潜力的肿瘤免疫治疗新模式。

关键词：树突状细胞信使RNA 疫苗肿瘤免疫治疗

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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究

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生物技术通报 2022年第10期38卷 90-96页

作者：陈黎卢茜杨红兰张鹏何志旭贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科遵义563000

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 详细信息

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变检测

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呼肠孤病毒导致白血病细胞凋亡的分子机制研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第5期50卷 649-653页

作者：李晨莫晶舒莉萍吴西军许键炜杨燕何志旭贵州医科大学基础医学院免疫教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医学院儿科学教研室遵义563003

目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利... 详细信息

目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利用流式细胞术检测HL60细胞凋亡率;Western blot检测HL60细胞中双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)活化水平和凋亡相关蛋白表达情况。用PKR特异性抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)作用HL60细胞24 h后,Reo3感染HL60细胞48 h,检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白表达水平。结果 MOI为1的Reo3作用于HL60细胞48 h后对细胞的抑制作用明显,细胞存活率为(24.333±3.396)%,细胞凋亡率为(29.96±2.06)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组比较,感染Reo3的HL60细胞PKR、 p-PKR、Bax、Caspase3、cleaved Caspase3蛋白表达均升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与未加抑制剂组比较,采用2-AP预处理的HL60细胞感染Reo3后细胞凋亡率下降(P<0.05),PKR磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达水平亦下降(P<0.05)。结论溶瘤病毒Reo3作用HL60细胞可以引起PKR的活化,导致HL60细胞的凋亡。

关键词：呼肠孤病毒 HL60细胞细胞凋亡凋亡相关蛋白 PKR 2-氨基嘌呤

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CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响

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第三军医大学学报 2021年第8期43卷 683-691页

作者：彭涛周唯君刘含赵砚驰李化张鹏周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室基础医学院免疫学教研室贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因,探讨rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响。方法针对斑马鱼rpl15基因设计并制备gRNA(guide RNA),将gRNA与Cas9蛋白的混合物显微注射到单细胞期斑马鱼受精卵中,提取72 h胚胎基因组DNA,PCR... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼rpl15基因,探讨rpl15基因对斑马鱼红系造血发育的影响。方法针对斑马鱼rpl15基因设计并制备gRNA(guide RNA),将gRNA与Cas9蛋白的混合物显微注射到单细胞期斑马鱼受精卵中,提取72 h胚胎基因组DNA,PCR扩增出目的片段,T7E1限制性酶切法检测基因打靶情况,随后进行测序分析确定编辑效果。通过O-dianisidine染色分析血红蛋白合成情况,中性粒细胞染色分析中性粒细胞生成情况,利用Real-time PCR检测p53、mdm2、hsp70和造血相关转录因子基因的表达变化。结果成功制备了rpl15 gRNA,并筛选得到rpl15突变体。rpl15基因敲除的幼鱼出现体长缩短、尾部弯曲、头部和眼睛较小及心包水肿的表型;造血相关谱系染色结果显示rpl15突变体血红蛋白合成明显减少,但中性粒细胞生成未受影响;rpl15突变体p53和mdm2的mRNA表达均显著升高(P<0.01,P<0.05,),α-globin、gata1和hsp70的mRNA表达均显著下调(P<0.01,P<0.05,P<0.05),除红系外的造血相关转录因子的mRNA表达与对照组相比均无明显差异。结论利用CRISPR/Cas9技术成功编辑了斑马鱼rpl15基因,突变体产生了类似先天性纯红细胞再生障碍性贫血疾病的表型。同时表明p53与hsp70可能参与调控突变体表型的形成。

关键词： CRISPR/Cas9 rpl15基因 DBA 斑马鱼

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下调rpl15基因的表达抑制斑马鱼早期造血的发育

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第三军医大学学报 2021年第17期43卷 1611-1618页

作者：周唯君周栋珍彭涛杨懿琛周艳华李化舒莉萍何志旭贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室基础医学院免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rp... 详细信息

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rpl15的表达,通过qRT-PCR和Western blot技术验证下调rpl15基因表达的有效性。使用体式显微镜分别观察注射rpl15 MO(MO)组与野生型(WT)组的发育情况。O-dianisidine染色检测血红蛋白表达的情况,qRT-PCR检测红系特异性转录因子hbae3、hbbe1的表达变化。全胚原位杂交和qRT-PCR检测红系特异性转录因子gata1、髓系转录因子pu.1、粒系转录因子mpo、定向造血标志转录因子runx1和c-myb、原始祖细胞造血标志物scl和lmo2等早期造血发育过程的关键转录因子的表达变化。TUNEL实验检测造血组细胞的凋亡变化。结果显微注射rpl15 MO能显著下调斑马鱼rpl15的表达,与WT组相比,MO组表现出体节弯曲、发育迟缓、心包水肿等异常表型。MO组血红蛋白合成量与hbae3、hbbe1的表达量相较于WT组明显减少(P<0.05)。原位杂交及qRT-PCR结果表明,gata1的表达明显减少(P<0.05),pu.1、mpo、runx1、c-myb的表达无明显变化,scl的表达明显减少(P<0.01),lmo2的表达无明显变化。TUNEL实验显示造血祖细胞的凋亡无明显变化。结论下调rpl15的表达抑制了斑马鱼早期的造血发育,并可能与gata1和scl表达明显降低有关。

关键词： rpl15 造血发育斑马鱼吗啉代反义寡核苷酸

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