检索结果-内蒙古大学图书馆

分析试验室 2024年

作者：杨喜善莫俊罗庆元周艳华张鹏曾柱黄文竹贵州医科大学生物与工程学院中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种... 详细信息

建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系(HEK293T（TET1CD）)为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种核苷在120 min内实现完全分离，且线性关系良好(R2> 0.995)，检出限为0.1068 ～ 0.5278 μmol/L，定量限为 0.3236 ～ 1.5995 μmol/L。HEK293T（TET1CD）细胞经DNA Dot Blot法检测，诱导后细胞基因组中5-羟甲基脱氧胞嘧啶（5hmdC）含量显著升高（P < 0.0001）；HPLC检测显示，诱导细胞基因组中5hmdC和5-羟甲基脱氧尿嘧啶（5hmdU）含量升高（P < 0.05），5-甲基脱氧胞嘧啶（5mdC）含量下降（P < 0.05），5-甲酰基脱氧胞嘧啶（5fdC）和5-羧基脱氧胞嘧啶（5cadC）未检出。检出样本回收率在100.2% ～ 113.5%之间，相对标准偏差在0.72% ～ 3.0%之间。本研究建立的HPLC方法，能够同时精确的检测基因组中5种修饰核苷的含量，能够替代传统的DNA Dot Blot法，为研究去甲基化中的碱基代谢产物提供了灵敏、可靠的检测途径。

关键词：高效液相色谱 5-甲基脱氧胞嘧啶(5mdC) 5-羟甲基脱氧胞嘧啶(5hmdC) 5-羟甲基脱氧尿嘧啶(5hmdU) 同时测定

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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究

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生物技术通报 2022年第10期38卷 90-96页

作者：陈黎卢茜杨红兰张鹏何志旭贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科遵义563000

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 详细信息

旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变检测

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mRNA致敏的树突状细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展

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药学学报 2019年第10期54卷 1818-1823页

作者：赵星顾杨卓宋相容四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川成都610041 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心/中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室免疫学教研室贵州贵阳550004

肿瘤免疫治疗旨在恢复或增强机体的免疫监视功能来对抗肿瘤,与传统的抗肿瘤治疗直接聚焦于肿瘤病灶局部不同,其具有不良反应小、作用持久、特异性强及适于个体化治疗等优势。树突状细胞(DCs)作为功能最强的抗原递呈细胞,能够在体内诱导... 详细信息

肿瘤免疫治疗旨在恢复或增强机体的免疫监视功能来对抗肿瘤,与传统的抗肿瘤治疗直接聚焦于肿瘤病灶局部不同,其具有不良反应小、作用持久、特异性强及适于个体化治疗等优势。树突状细胞(DCs)作为功能最强的抗原递呈细胞,能够在体内诱导强烈的特异性免疫应答。目前基于DCs的肿瘤免疫治疗,是将肿瘤抗原通过一定方法负载于DCs,从而激发特异性抗肿瘤免疫应答。用编码肿瘤抗原的mRNA致敏DCs是目前研究较为广泛的一种肿瘤抗原负载方式,对应的免疫治疗策略已在临床试验中显示出较好的抗肿瘤疗效。因此, mRNA致敏的DCs是一种极具潜力的肿瘤免疫治疗新模式。

关键词：树突状细胞信使RNA 疫苗肿瘤免疫治疗

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体外扩增的NK细胞运载溶瘤呼肠孤病毒对结直肠癌细胞的杀伤效应

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第5期26卷 492-499页

作者：陈晓庆王念雪龙世棋廖春香刘金河杨薇赵星贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学肿瘤学教研室贵州贵阳550004

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞... 详细信息

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞后,CCK-8法检测在中和抗体的存在下病毒发挥的溶瘤作用;qPCR法检测肿瘤细胞内病毒RNA的相对表达量。CCK-8法检测Reo-NK对结直肠癌KRAS基因突变型(DLD-1)和野生型(CaCo-2、HT29)细胞株的杀伤效应,ELISA双抗体夹心法检测NK细胞释放的穿孔素水平。结果:呼肠孤病毒主要结合于NK细胞膜上,在人AB型血清的存在下体外扩增的NK细胞可将呼肠孤病毒传递到肿瘤细胞,且传递后的呼肠孤病毒仍具有显著溶瘤活性(P<0.01);同时检测到肿瘤细胞内病毒RNA的表达量显著增高(P<0.01)。与NK组相比,Reo-NK组对KRAS基因突变型和野生型结直肠癌细胞株的细胞毒作用均显著增强(P<0.05),穿孔素的释放均明显增加(P<0.05)。结论:体外扩增的人NK细胞适合作为呼肠孤病毒的运载细胞,且呼肠孤病毒能够增强NK细胞的细胞毒作用,两者联合后对结直肠癌细胞可发挥更强的杀伤作用,因而具有重要的临床转化应用价值。

关键词：呼肠孤病毒自然杀伤细胞运载细胞结直肠癌细胞

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呼肠孤病毒导致白血病细胞凋亡的分子机制研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第5期50卷 649-653页

作者：李晨莫晶舒莉萍吴西军许键炜杨燕何志旭贵州医科大学基础医学院免疫教研室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医学院儿科学教研室遵义563003

目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利... 详细信息

目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利用流式细胞术检测HL60细胞凋亡率;Western blot检测HL60细胞中双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)活化水平和凋亡相关蛋白表达情况。用PKR特异性抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)作用HL60细胞24 h后,Reo3感染HL60细胞48 h,检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白表达水平。结果 MOI为1的Reo3作用于HL60细胞48 h后对细胞的抑制作用明显,细胞存活率为(24.333±3.396)%,细胞凋亡率为(29.96±2.06)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组比较,感染Reo3的HL60细胞PKR、 p-PKR、Bax、Caspase3、cleaved Caspase3蛋白表达均升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与未加抑制剂组比较,采用2-AP预处理的HL60细胞感染Reo3后细胞凋亡率下降(P<0.05),PKR磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达水平亦下降(P<0.05)。结论溶瘤病毒Reo3作用HL60细胞可以引起PKR的活化,导致HL60细胞的凋亡。

关键词：呼肠孤病毒 HL60细胞细胞凋亡凋亡相关蛋白 PKR 2-氨基嘌呤

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Wnt/β-catenin信号通路参与化疗药物诱导的转基因斑马鱼abcb4基因的表达和耐药

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第2期35卷 134-139页

作者：陈露向文碧莫晶孙琮杰周艳华吴西军何志旭贵州医科大学免疫学教研室贵州医科大学组织工程与干细胞中心贵州医科大学儿科学教研室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春... 详细信息

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春碱联合吉非替尼处理组。每组100枚胚胎分别进行药物处理至第5天,每组取第5天斑马鱼幼鱼50枚进行实验。采用罗丹明123实验检测野生型斑马鱼耐药程度,酶标仪检测转基因的斑马鱼荧光强度,活细胞工作站检测荧光分布位置。Western blot法检测转基因的斑马鱼β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的蛋白水平。结果罗丹明123实验证实经阿霉素和长春碱药物暴露后的斑马鱼体内产生耐药, EGFP荧光强度检测结果表明经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼荧光强度高,经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼体内β-catenin的累积升高伴随着EGFP和ABCB4蛋白的增加。结论斑马鱼体内Wnt/β-catenin信号通路参与斑马鱼abcb4基因的激活与耐药。

关键词：斑马鱼 Wnt/β-catenin信号通路 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4) 耐药

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LRG1抑制小鼠肝巨噬细胞活化从而改善代谢相关脂肪性肝病:基于增强TGF-β1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1164-1171页

作者：徐龙飞韩晶杨喆杨燕平陈金慧吴西军王琪洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学金阳医院检验科贵州贵阳550025 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学干细胞与组织工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织... 详细信息

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织和肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达。将原代肝巨噬细胞分为5组,对照组、脂肪变性肝细胞来源的上清(CM)刺激组、CM+LRG1组、CM+转化生长因子-β1(TGF-β1)组、CM+TGF-β1+LRG1组,各组培养24 h后,Western bot法检测一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平的表达,RT-PCR法检测iNOS、趋化因子1(CXCL-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平的表达。MAFLD小鼠分为4组,1组作为对照(6只),其余3组经尾静脉分别注射LRG1(6只)、TGF-β1(6只)或者TGF-β1+LRG1(6只),收集肝组织,经HE染色观察肝脏病理学变化,免疫组化法观察肝组织中F4/80+细胞的分布,RT-PCR法检测肝组织iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达。结果HFD小鼠肝组织和脂肪变性的肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达显著降低(P<0.05)。脂肪变性肝细胞来源的CM刺激明显促进肝巨噬细胞中iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达,而TGF-β1和LRG1联合刺激时明显抑制这些分子mRNA水平的表达(P<0.05)。小鼠HFD16周后,单独注射LRG1或TGF-β1均可减少肝内脂质沉积以及肝内巨噬细胞的浸润,二者联合上述改变更加明显。同时,TGF-β1和LRG1联合刺激时也明显抑制iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达(P<0.05)。结论LRG1通过增强TGF-β1信号通路抑制肝巨噬细胞浸润,从而缓解非酒精性脂肪肝的炎性反应。

关键词：富亮氨酸α2-糖蛋1 肝巨噬细胞代谢相关脂肪性肝病转化生长因子-β1 脂肪变性

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1-萘酚胚胎期暴露对斑马鱼发育的毒性作用

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第三军医大学学报 2019年第14期41卷 1321-1327页

作者：任平平舒莉萍王一慧莫晶周艳华何志旭贵州医科大学儿科学教研室贵阳550004 贵州医科大学组织工程与干细胞中心中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学儿科学教研室贵州遵义563006

目的探讨1-萘酚(1-NAP)胚胎期暴露对斑马鱼发育的毒性作用,并对其可能的机制进行研究。方法挑选斑马鱼受精卵,在受精后24 h(hours post fertilization,hpf)进行不同浓度(0、40、80、160、200μmol/L)1-NAP暴露处理,观察并记录其处理至... 详细信息

目的探讨1-萘酚(1-NAP)胚胎期暴露对斑马鱼发育的毒性作用,并对其可能的机制进行研究。方法挑选斑马鱼受精卵,在受精后24 h(hours post fertilization,hpf)进行不同浓度(0、40、80、160、200μmol/L)1-NAP暴露处理,观察并记录其处理至斑马鱼120 hpf时的畸形数和死亡数,计算畸形率、孵化率及半数致死浓度(IC50)。设置空白对照组,N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理组,1-NAP处理组,NAC预处理组,检测幼鱼体内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;通过Western blot法检测胚胎凋亡蛋白Caspase3、Bax的表达情况。结果计算出1-NAP在斑马鱼胚胎的IC50为111.31μmol/L,斑马鱼胚胎期暴露于高浓度1-萘酚(>80μmol/L)导致死亡率和畸形率明显增加,孵化率明显降低,表现出发育毒性;50μmol/L浓度1-NAP处理组ROS、MDA含量明显升高,GSH、-SH水平明显降低,抗氧化酶CAT、SOD的活性受到抑制(P<0.001);胚胎凋亡蛋白Caspase3、Bax表达量增加;NAC(0.5 mmol/L)预处理组斑马鱼胚胎的畸形率明显降低,ROS、MDA含量明显减少,GSH、-SH含量以及SOD、CAT活性有所恢复,凋亡蛋白Caspase3、Bax表达量明显降低。结论 1-萘酚胚胎期暴露对斑马鱼发育的毒性作用可能与1-萘酚诱导的氧化应激相关。

关键词：斑马鱼胚胎期 1-萘酚发育毒性氧化应激

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清肺排毒汤对LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症的作用

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中成药 2023年第5期45卷 1462-1468页

作者：匡梦岚张丽娟卢攀攀解小芬胡光线沈祥春许键炜贵州医科大学药学院贵州贵阳550001 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 重庆医科大学附属第一医院重庆400010 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550004

目的探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预... 详细信息

目的探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预7 d。记录小鼠存活率、肺湿干重比,HE染色观察肺损伤程度,吉姆萨染色法及血液分析仪分类计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达,ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达。结果与模型组比较,清肺排毒汤高剂量组小鼠肺水肿和损伤程度,血清、BALF中炎性细胞因子和炎性细胞数量,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达和肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65,p-IκBα蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01)。结论清肺排毒汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子和介质释放,减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。

关键词：清肺排毒汤脂多糖急性肺损伤 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路炎症

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二氢杨梅素对Bloom解旋酶结构和生物学活性的影响

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中国药理学通报 2019年第10期35卷 1453-1460页

作者：刘金河张望明晏文涛许键炜葛章文贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省人民医院检验科贵州贵阳550002 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检... 详细信息

目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检测等方法和技术研究DMY对BLM解旋酶的生物学活性的影响。结果圆二色谱和紫外光谱结果显示,DMY能与BLM解旋酶结合,且有1个结合位点;在0~25μmol·L^-1浓度范围内,DMY对BLM解旋酶的二级结构的干扰能力成正相关,在25~75μmol·L^-1浓度范围内则相反。荧光偏振和自由磷检测实验显示,DMY能结合在BLM解旋酶上,进而抑制BLM解旋酶的解链活性。结论DMY能够竞争性结合于BLM解旋酶的DNA结合位点上,改变BLM解旋酶的空间结构,从而抑制BLM解旋酶与DNA的结合,进而抑制BLM解旋酶的生物学活性。

关键词：二氢杨梅素 Bloom解旋酶生化活性构象二级结构圆二色谱荧光偏振

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