检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 746-751页

作者：刘含杨红兰莫晶张鹏范安然何志旭贵州医科大学组织工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004

目的比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异。方法检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2%DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235a表达量的变化。结果连续药物暴露120 ... 详细信息

目的比较丁酸钠、氯化血红素(Hemin)及DMSO诱导K562红系分化作用的差异。方法检测在1.5 mmol/L丁酸钠,20μmol/L Hemin及2%DMSO处理下,K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺(TMB)染色阳性率及CD235a表达量的变化。结果连续药物暴露120 h后结果显示,丁酸钠对K562细胞增殖有抑制作用,48~72 h细胞阻滞于G0/G1;96~120 h细胞阻滞于G2/M期,120 h TMB阳性率为(22.02±2.27)%。Hemin对K562细胞的增殖及细胞周期均无影响;120 h TMB阳性率为(90.83±2.69)%。DMSO处理的K562细胞其G0/G1期比例增多,但暴露时间大于72 h时,细胞增殖与对照组差异无统计学意义;120 h TMB阳性率为(1.84±0.48)%,相较于对照组阳性率(2.89±0.18)%差异无统计学意义。丁酸钠和Hemin处理120 h后血型糖蛋白A(CD235a)的表达水平较对照组和DMSO处理组升高,且2组间差异无统计学意义。DMSO处理组CD235a与对照组差异无统计学意义。结论通过综合比较红系分化诱导前后K562细胞增殖、细胞周期、TMB阳性率及CD235a表达量的变化发现,Hemin是较丁酸钠和DMSO体外诱导K562红系分化更有效的化学试剂。

关键词：丁酸钠氯化血红素 DMSO K562 红系分化

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Tet1蛋白对HEK293T细胞增殖、周期及凋亡的影响

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中国比较医学杂志 2020年第6期30卷 69-75页

作者：莫晶杨红兰刘含金皎范安然张鹏周艳华舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室贵州医科大学免疫教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心贵阳550004 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞... 详细信息

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的Tet1CD稳转细胞系293T(Tet1CD)。通过Western blot检测Tet1蛋白的表达;通过DNA dot blot检测细胞基因组中5hmC的含量,通过流式细胞术检测Tet1CD蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测Tet1CD蛋白对细胞增殖的影响。结果成功建立了可诱导Tet1CD过表达的HEK293T细胞系293T(Tet1CD);Western blot结果显示诱导后细胞内Tet1CD蛋白表达上升;DNA dot blot结果显示过表达Tet1CD蛋白细胞内5hmC含量升高;流式细胞术结果显示,Tet1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0. 05)及增加G2时期细胞比例(P<0. 05);细胞计数结果显示,Tet1CD过表达抑制细胞增殖(P<0. 0001)。结论 Tet1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖。

关键词：表观遗传 Tet蛋白细胞周期细胞凋亡细胞增殖

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溶瘤病毒在血液系统恶性肿瘤治疗中的研究进展

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中华实用儿科临床杂志 2019年第15期34卷 1127-1131页

作者：何志旭赵星遵义医科大学附属医院儿科贵州遵义563000 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室/贵州医科大学组织工程与干细胞研究中心贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550025

近年来,血液系统恶性肿瘤的发病率逐年增高,虽然随着化疗、靶向治疗及造血干细胞移植的进展,部分类型淋巴瘤和白血病的疗效已经有了很大的提高,但其预后仍然较差、病死率高,寻找新的治疗方法提高疗效已成为当前亟须解决的问题。溶瘤病... 详细信息

近年来,血液系统恶性肿瘤的发病率逐年增高,虽然随着化疗、靶向治疗及造血干细胞移植的进展,部分类型淋巴瘤和白血病的疗效已经有了很大的提高,但其预后仍然较差、病死率高,寻找新的治疗方法提高疗效已成为当前亟须解决的问题。溶瘤病毒可通过选择性破坏肿瘤细胞并诱导机体发挥特异性抗肿瘤免疫的双重作用机制来促进抗肿瘤效应。目前溶瘤病毒已成为治疗多种恶性肿瘤的有效手段,在血液系统恶性肿瘤的治疗中也取得了许多突破性进展,现就近年来溶瘤病毒用于血液系统恶性肿瘤治疗中研究的最新进展进行综述。

关键词：血液系统恶性肿瘤溶瘤病毒免疫治疗

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老年高危型人乳头瘤状病毒感染后宫颈微环境中细胞因子变化

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中国老年学杂志 2019年第16期39卷 4007-4009页

作者：赵书利李晨兰露莎刘雨思杨红宇何志旭舒莉萍贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州医科大学基础医学院免疫学教研室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550004 贵阳市妇幼保健院大连医科大学基础医学院

目的探究老年女性患者高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)感染后宫颈微环境中细胞因子的变化。方法HR-HPV感染的老年女性(60岁以上)患者150例,按宫颈活检病理分级分为无宫颈上皮内病变(NSIL)组、低级别宫颈上皮内病变(LSIL)组和高级别宫颈上... 详细信息

目的探究老年女性患者高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)感染后宫颈微环境中细胞因子的变化。方法HR-HPV感染的老年女性(60岁以上)患者150例,按宫颈活检病理分级分为无宫颈上皮内病变(NSIL)组、低级别宫颈上皮内病变(LSIL)组和高级别宫颈上皮内病变(HSIL)组各50例。用流式技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测阴道灌洗液中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)-γ、IL-17A及人转化生长因子(TGF)-β免疫炎性因子的水平。同时用焦磷酸测序法对所有患者行宫颈脱落细胞HR-HPV分型测定,并比较不同分型之间的炎性因子水平差异。结果IL-2含量随宫颈病变分级增加而逐渐降低(P<0.01);IL-6含量随宫颈病变分级增加而逐渐升高(P<0.01);其余6种细胞因子含量随宫颈病变分级增加无显著变化(P>0.05)。所有入组患者中以HPV16单独感染最常见(43.3%),其次为其他HR-HPV混合感染(39.4%),而包含HPV16型的混合感染最少见(17.3%)。3组HPV感染分型总体比较无统计学差异(P>0.05)。HPV亚型间8种细胞因子比较无显著差异(P>0.05)。结论老年女性HR-HPV感染后宫颈微环境中免疫炎性因子的变化更有利于肿瘤细胞生长,定期检测可以预测宫颈疾病的发展方向。

关键词：高危型人乳头瘤状病毒宫颈微环境细胞因子

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红系祖细胞在造血缺陷斑马鱼体内的移植

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中国比较医学杂志 2019年第5期29卷 84-89页

作者：李志操黄波向文碧孙琮杰吴西军周艳华何志旭舒莉萍贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心临床医学院儿科学教研室贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563003

目的评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^(-/-)突变体斑马鱼体内的移植效果。方法收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,利用显微注射... 详细信息

目的评估红系祖细胞在先天原始造血缺陷cloche^(-/-)突变体斑马鱼体内的移植效果。方法收集绿色荧光标记红系祖细胞的转基因系zTg(gata1:EGFP)斑马鱼胚胎,制备成单细胞悬液,经流式细胞仪分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,利用显微注射技术将gata1^+细胞移植到42hpf的cloche^(-/-)突变体斑马鱼心脏中,采用体视荧光显微镜追踪观察移植后的红系祖细胞在cloche^(-/-)突变体斑马鱼中的表达情况。结果成功分选出携带绿色荧光的gata1^+细胞,并在移植后2 h可观察到携带绿色荧光的gata1^+细胞逐渐增殖扩散且16 h持续有绿色荧光表达。结论红系祖细胞有重建造血的潜力,为进一步研究红系祖细胞移植后的功能鉴定提供实验依据。

关键词：红系祖细胞斑马鱼移植 cloche^-/-突变

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人红白血病斑马鱼异种模型的建立

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安徽医科大学学报 2021年第1期56卷 77-82页

作者：王一慧刘庆杨小燕王念雪王猛舒莉萍何志旭吴西军贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心(中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室) 贵阳550004 贵州医科大学儿科学教研室贵阳550004 贵州医科大学附属医院呼吸与危重症医学科贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室遵义563003

目的利用斑马鱼胚胎建立人红白血病(HEL)细胞异种移植瘤模型,提供研究血液肿瘤的体内行为和实用药物测试的模型。方法将HEL细胞分为空白组和CM-DiI组,CM-DiI组用活细胞示踪剂进行标记;取野生型斑马鱼培育繁殖,产胚后将胚胎置于28℃孵育4... 详细信息

目的利用斑马鱼胚胎建立人红白血病(HEL)细胞异种移植瘤模型,提供研究血液肿瘤的体内行为和实用药物测试的模型。方法将HEL细胞分为空白组和CM-DiI组,CM-DiI组用活细胞示踪剂进行标记;取野生型斑马鱼培育繁殖,产胚后将胚胎置于28℃孵育48 h至破膜,将破膜后斑马鱼分为空白对照组、PBS实验组、HEL实验组,将CM-DiI组细胞,通过显微注射方式移植到HEL实验组斑马鱼卵黄囊中,PBS实验组注射PBS,再将三组斑马鱼置于34℃温箱培养,通过体内外增殖实验及体内荧光观察等鉴定模型是否建立成功;将鉴定成功的斑马鱼进行阿糖胞苷药物暴露,分为50、100、200 nmol/L组及模型对照组,观察各组浓度药物暴露后异种移植瘤模型中白血病细胞的增殖及迁移情况。结果 CM-Dil组与空白组HEL细胞增殖状态相近,差异无统计学意义(P>0.05);通过体内外增殖实验证实了HEL细胞在斑马鱼体内出现了增殖,而HEL实验组斑马鱼存活量相对于空白对照组和PBS实验组降低(P<0.05);三个浓度的阿糖胞苷药物暴露组相对于模型对照组细胞增殖降低(P<0.05)。结论人急性红白血病HEL细胞移植入斑马鱼胚胎后可进行增殖,且增殖活动可被阿糖胞苷干预,证实异种移植瘤模型建立成功。

关键词：斑马鱼急性红白血病异种移植人红白血病细胞阿糖胞苷

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苗药宽叶腹水草对CCl_(4)致肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制研究

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中药材 2023年第3期46卷 718-723页

作者：胡光线解小芬帅敏徐菁霞王恒许键炜贵州医科大学药学院贵州贵阳550025 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心/中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 黔南民族医学高等专科学校贵州都匀558013 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院白云医院贵州贵阳550002

目的:研究苗药宽叶腹水草对CCl_(4)所诱导肝纤维化小鼠的治疗作用及可能机制。方法:将60只SPF级昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg/kg)组及宽叶腹水草水提物低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组,每... 详细信息

目的:研究苗药宽叶腹水草对CCl_(4)所诱导肝纤维化小鼠的治疗作用及可能机制。方法:将60只SPF级昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg/kg)组及宽叶腹水草水提物低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组小鼠均皮下注射CCl_(4)(CCl_(4)与橄榄油溶液1∶1混合)诱导肝纤维化,2次/w,连续8 w。从造模第5周开始,正常对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,其余各组小鼠均灌胃相应药物治疗,1次/d,连续4 w。末次给药处死所有小鼠后,收集肝脏,计算肝脏指数,HE及Masson染色观察肝组织病理学变化;全自动生化仪检测肝功能指标ALT、AST、ALP、ALB、TP水平;ELISA法检测纤维化指标PCⅢ、ColⅣ、LN、HA及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平;试剂盒检测小鼠血清SOD、GSH-Px、MDA水平;Western Blot检测肝组织中α-SMA、TGF-β、Smad2、Smad3蛋白表达。结果:宽叶腹水草能显著升高CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠体质量,降低肝脏指数,减少肝组织炎症浸润及胶原沉积,显著升高血清ALB、TP、SOD、GSH-Px水平,显著降低血清ALT、AST、ALP、PCⅢ、ColⅣ、LN、HA、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平及肝组织中TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达。结论:宽叶腹水草对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠具有治疗作用,其机制可能与抑制TGF-β/Smad2/3信号通路、炎症反应及氧化应激有关。

关键词：宽叶腹水草肝纤维化 TGF-β/Smad2/3通路炎症氧化应激

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三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

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贵州医科大学学报 2019年第6期44卷 626-631页

作者：张鹏崔冬冰舒莉萍范安然贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的... 详细信息

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响。结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌。结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响。

关键词：淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体信号肽神经退行性疾病

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hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用研究

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安徽医科大学学报 2021年第8期56卷 1226-1231页

作者：陈茂琼向敏宋海良王岚匡梦岚张丽娟熊英何志旭许键炜高鸿秦臻贵州医科大学附属医院新生儿科贵阳550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550000 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验贵阳550004 东莞大朗医院普外科东莞523770 贵州医科大学医学科学研究所贵阳550000 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550000 贵州医科大学护理学院贵阳550000 贵州医科大学基础医学院机能学实验室贵阳550000 贵州医科大学第三附属医院麻醉科都匀558000

目的通过移植人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗缺氧缺血诱导的新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。方法采集足月健康新生儿脐带约10 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,通过感染重组携带绿... 详细信息

目的通过移植人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗缺氧缺血诱导的新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。方法采集足月健康新生儿脐带约10 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,通过感染重组携带绿色荧光蛋白的腺病毒标记细胞;取18只新生健康7d龄SD大鼠,随机均分为对照(假手术)、模型、治疗组,其中模型组及治疗组建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,建模成功24 h后将标记的hUC-MSCs注射入治疗组左侧(损伤侧)侧脑室,各组大鼠hUC-MSCs移植治疗48 h后,检测hUC-MSCs在HIE大鼠大脑内的定植并采用TTC染色观察梗死脑组织,RT-qPCR测定海马组织中Beclin-2、Caspase-3 mRNA水平的变化,Western blot检测海马区细胞Beclin-2、Caspase-3蛋白的表达。结果对照组大鼠大脑没有形成梗死体积,模型组大鼠大脑梗死体积明显,梗死体积比为(41.67±4.17)%;治疗组大鼠经hUC-MSCs移植治疗48 h后,大脑梗死体积减小[(16.65±3.43)%],与模型组比较,差异有统计学意义;HIE建模48 h后,内源性Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达上调。hUC-MSCs移植治疗48 h后,Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达下降。结论hUC-MSCs能减小缺氧缺血损伤大鼠大脑梗死体积,对损伤大鼠有保护作用;hUC-MSCs能够减少大鼠脑细胞凋亡,下调缺氧缺血脑损伤大鼠海马区细胞凋亡相关Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白水平。

关键词：缺氧缺血性脑病人脐带来源的间充质干细胞凋亡 Beclin-2 Caspase-3

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miR-26b调控Wnt/β-catenin信号通路促进成肝样分化MSCs迁移研究

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安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1850-1857页

作者：吉杨丹罗红阳王丹王恒杨小燕何志旭刘金河汪显耀赵锦张丽娟张玲敏秦臻许键炜黔南民族医学高等专科学校药理学教研室都匀558013 贵阳市乌当区人民医院贵阳550018 贵州医科大学附属医院儿科贵阳550004 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室组织工程与干细胞实验中心贵州省再生医学重点实验室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验贵阳550004 贵州医科大学护理学院贵阳550004 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550004

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成... 详细信息

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunnchamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响。结果随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调。Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布。Transwell及Dunncham-ber实验表明MSCs诱导分化至7d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21d。高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05)。结论miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移。

关键词：间充质干细胞 miR-26b Wnt/β-catenin信号通路成肝样分化趋化迁移

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