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罗布泊来源胀果甘草根际枯草芽孢杆菌GA21次生代谢产物结构与活性初步研究

中国医药生物技术 2012年第1期7卷 14-19页

作者：靳婧旭格拉.哈布丁刘少伟郭琳蒋忠科栾迎春李展先潘臻孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室北京100050 新疆师范大学生命科学院乌鲁木齐830054 中原油田总医院河南濮阳457001 桂林医学院药学院 541004

目的分离鉴定枯草芽孢杆菌GA21发酵液中次生代谢产物并对其活性进行初步研究。方法采用TLC、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离;通过HR-ESI质谱、1D-NMR和2D-NMR对其结构进行鉴定;以琼脂平板法检测其次生代谢产物对金黄色葡萄球菌... 详细信息

目的分离鉴定枯草芽孢杆菌GA21发酵液中次生代谢产物并对其活性进行初步研究。方法采用TLC、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离;通过HR-ESI质谱、1D-NMR和2D-NMR对其结构进行鉴定;以琼脂平板法检测其次生代谢产物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、稻瘟菌、白色念珠菌的拮抗活性。结果分离得到两个异香豆素类次生代谢产物:GA21-20和GA21-26;其中GA21-20的化学结构与Amicoumacin B一致,但无抗细菌及真菌活性;GA21-26有抗真菌活性,但无抗细菌活性,分子量为435.20890,分子式为C21H29O7N3,是一新的3,4-二氢异香豆素类抗生素。GA21-26在2.5μg/纸片对白色念珠菌即可显示抑制活性,在80μg/纸片对水稻稻瘟菌显示抑制活性,表明GA21-26在拮抗医学条件致病真菌方面有潜在用途。结论枯草芽孢杆菌GA21能产生一系列3,4-二氢异香豆素类抗生素,其次级代谢产物值得进一步研究。

关键词：芽孢杆菌,枯草异香豆素类核磁共振波谱学环境微生物学

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以结核分枝杆菌H_(37)Rv莽草酸脱氢酶为靶点的高通量筛选模型的建立及应用

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中国医药生物技术 2012年第3期7卷 191-196页

作者：陈小娟崔佳飞杨延辉关艳张雪莲肖春玲中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050 复旦大学生命科学学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

目的建立以结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型;用此模型筛选莽草酸脱氢酶抑制剂;进一步评价化合物对莽草酸脱氢酶活性的影响。方法表达并纯化结核分枝杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶;利用还原型辅酶II(NADPH)在溶... 详细信息

目的建立以结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型;用此模型筛选莽草酸脱氢酶抑制剂;进一步评价化合物对莽草酸脱氢酶活性的影响。方法表达并纯化结核分枝杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶;利用还原型辅酶II(NADPH)在溶液中的光吸收,测定酶的活性,构建了该酶抑制剂的高通量筛选模型;用Z′因子法评价该模型的可靠性,并对5万余个化合物进行筛选;测定了各抑制剂的IC50并对抑制剂6186050的酶抑制动力学进行了研究;用菌液稀释法评价了抑制剂对某些临床分离菌株包括耐药菌株的影响。结果得到了重组莽草酸脱氢酶;测得比活力为20987U/mg,所建的莽草酸脱氢酶高通量筛选模型Z′因子为0.76,符合高通量筛选的要求;对5万余个化合物进行筛选得到9个抑制率较高的化合物;抑制剂6186050为竞争性可逆抑制剂;抑制剂6230384和6186050对海分枝杆菌的最低抑菌浓度(MIC)都是32μg/ml。结论建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌莽草酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型筛选得到的抑制剂可能具有抑菌活性。

关键词：分枝杆菌结核酶抑制剂基因表达莽草酸脱氢酶

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塔克拉玛干沙生植物内生放线菌生物多样性初步研究

塔克拉玛干沙生植物内生放线菌生物多样性初步研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：刘佳萌陈川蒋忠科郭琳董艳萍朱霞琳旭格拉哈布丁孙承航中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009 新疆师范大学生命科学学院乌鲁木齐 830054

应用纯培养手段以及16S rRNA扩增、测序及系统发育分析方法，对从塔克拉玛干沙漠南麓植物中分离纯化的内生放线菌进行多样性的初步研究，实验结果表明，分离纯化得到的148株植物内生放线菌可以归为9个科。研究结果表明，沙漠植物内生放... 详细信息

应用纯培养手段以及16S rRNA扩增、测序及系统发育分析方法，对从塔克拉玛干沙漠南麓植物中分离纯化的内生放线菌进行多样性的初步研究，实验结果表明，分离纯化得到的148株植物内生放线菌可以归为9个科。研究结果表明，沙漠植物内生放线菌系统发育多样性丰富，并且潜藏着新的放线菌资源，值得进一步研究。

关键词：放线菌生物多样性分离纯化沙生植物

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塔克拉玛干沙漠土壤中放线菌多样性研究

塔克拉玛干沙漠土壤中放线菌多样性研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：董艳萍陈川蒋忠科刘佳萌郭琳朱霞琳旭格拉哈布丁张玉彬孙承航中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050 中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009 新疆师范大学生命科学学院乌鲁木齐 830054

本研究从塔克拉玛干沙漠南麓采集了17份土壤样品，采用10种分离培养基，根据菌落形态分离到368株放线菌.选择其中165株具有典型放线菌形态的菌株，根据16SrRNA基因序列对其进行系统发育分析。结果表明：165株放线菌分属于16个科的24个... 详细信息

本研究从塔克拉玛干沙漠南麓采集了17份土壤样品，采用10种分离培养基，根据菌落形态分离到368株放线菌.选择其中165株具有典型放线菌形态的菌株，根据16SrRNA基因序列对其进行系统发育分析。结果表明：165株放线菌分属于16个科的24个属，优势菌属为拟诺卡氏菌属和链霉菌属。菌株SCBA-24的16S rRNA基因序列与己发表的最近有效种Nocardioides salariusCL-Z59的相似率为96.41％，为潜在的新种;同时，有27株菌株的16S rRNA基因序列与己发表的最近有效种的相似率低于98.5％，可能存在潜在的新种，占菌株总数的16.36％。结论：塔克拉玛千沙漠存在较为丰富的放线菌和新种资源，这些菌株为发现新微生物代谢次级产物提供了资源。

关键词：土壤微生物放线菌物种多样性沙漠地区

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红树林植物内生放线菌I07A-01824发酵液中杀线虫活性成分的分离、纯化与鉴定

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中国医药生物技术 2012年第1期7卷 5-8页

作者：陶玲旭格拉.哈布丁韩宁宁余生艳闫蕾蕾栾迎春刘少伟郭琳蒋忠科余利岩孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室北京100050 新疆师范大学生命科学院乌鲁木齐830054 中国兽医药品监察所北京100081 桂林医学院药学院 541004 河北大学生命科学院保定071002 中原油田总医院濮阳457001

目的建立稳定有效的体外杀线虫模型,并从红树林植物木榄内生放线菌I07A-01824的发酵液中分离纯化具有杀线虫活性的物质,并鉴定其化学结构。方法在体外杀线虫模型指导下,利用硅胶层析、高效液相色谱等方法对放线菌I07A-01824的发酵液进... 详细信息

目的建立稳定有效的体外杀线虫模型,并从红树林植物木榄内生放线菌I07A-01824的发酵液中分离纯化具有杀线虫活性的物质,并鉴定其化学结构。方法在体外杀线虫模型指导下,利用硅胶层析、高效液相色谱等方法对放线菌I07A-01824的发酵液进行分离纯化,得到高纯度的杀线虫活性物质;通过现代波谱分析技术对其进行结构解析,确定其化学结构。结果红树林内生放线菌I07A-01824的次级代谢产物中具有较强杀线虫活性的物质,为一不饱和脂肪酸,化学结构为5,8-二烯十四酸;27.3mg/L剂量下开始显示对秀丽隐杆线虫有活性,其24h后的LC50值为162.8mg/L。结论此不饱和脂肪酸对线虫有较强的致死作用,并且在内生放线菌I07A-01824菌株的次级代谢产物中稳定存在。

关键词：脂肪酸类,不饱和抗线虫药放线菌属红树科

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大鼠脑胶质瘤荧光素酶动物模型建模细胞株C6-Luc的构建

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解放军医学杂志 2011年第1期36卷 35-38页

作者：黄伟吕明李保卫王玉丽邵荣光高钟镐中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所北京100050 延边大学药学院吉林延吉133000 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的构建稳定表达萤火虫荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。方法通过浓度梯度法测定C6大鼠脑胶质瘤细胞的潮霉素最佳筛选浓度。使用FuGENEHD转染试剂将表达荧光素酶的真核质粒pGL4.50转染至C6细胞,应用潮霉素筛选多克隆细胞株,进... 详细信息

目的构建稳定表达萤火虫荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。方法通过浓度梯度法测定C6大鼠脑胶质瘤细胞的潮霉素最佳筛选浓度。使用FuGENEHD转染试剂将表达荧光素酶的真核质粒pGL4.50转染至C6细胞,应用潮霉素筛选多克隆细胞株,进一步采用有限稀释法筛选单克隆细胞株。采用报告基因分析对单克隆细胞株进行阳性鉴定,并考察荧光素酶在阳性克隆中表达的稳定性。对阳性克隆进行体外生物发光检测,确定最小细胞检测量,并采用线性回归分析生物发光强度与细胞数量的相关性。将阳性克隆细胞种植于Wistar大鼠脑部,应用生物发光成像检测系统对肿瘤细胞在脑部的生长进行体内监测。结果 C6细胞的潮霉素最佳筛选浓度为250μg/ml。质粒pGL4.50成功转染至C6细胞,通过潮霉素抗性筛选得到12个单克隆细胞株。通过荧光素酶报告基因分析,成功鉴定了荧光素酶表达活性最高的阳性克隆,命名为C6-Luc,连续培养3代后C6-Luc细胞表达荧光素酶的活性无显著差异。体外生物发光检测结果显示C6-Luc细胞的最小检测数量为78个,细胞发光强度(y)与细胞数量(x)呈良好的线性关系,回归方程为y=81.348x-2143.1,相关系数r=0.997。体内生物发光检测结果显示,Wistar大鼠脑部种植C6-Luc细胞后,随肿瘤体积增大,大鼠脑部的发光强度逐渐增强。结论成功构建了稳定表达荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。

关键词：荧光素酶类萤火虫生物发光成像神经胶质瘤模型动物

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选择性5-羟色氨受体抑制剂——巴西苏木红素(英文)

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中国天然药物 2011年第5期9卷 338-344页

作者：王秀坤雷帆柴玉爽王玉刚詹宏磊邢东明游学甫李慧颖杜力军清华大学生命科学学院医学院药物药理研究室北京100084 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药理室北京100050

目的:子宫平滑肌内存在多种5-HT受体,5-HT通过作用于5-HT受体实现其对子宫收缩活性的影响。本研究探讨巴西苏木红素对5-HT受体的作用及其特点。方法:小鼠分离子宫平滑肌条,采用受体拮抗实验和real time PCR方法,对巴西苏木红素的5-HT受... 详细信息

目的:子宫平滑肌内存在多种5-HT受体,5-HT通过作用于5-HT受体实现其对子宫收缩活性的影响。本研究探讨巴西苏木红素对5-HT受体的作用及其特点。方法:小鼠分离子宫平滑肌条,采用受体拮抗实验和real time PCR方法,对巴西苏木红素的5-HT受体的抑制作用进行研究。结果:巴西苏木红素虽然对正常子宫平滑肌的收缩幅度和频率无影响,但能明显抑制5-HT2受体激动剂马来酸麦角新碱的收缩活性,其pA2为5.71±0.21。而5-HT亚型的选择性激动剂舒马普坦(5-HT1D)、AL34662(5-HT2A)、MCPP(5-HT2C)的收缩子宫活性同样能够被巴西苏木红素抑制,pA2分别为4.58±0.06;4.91±0.15;5.38±0.15。巴西苏木红素明显抑制了5-HT受体1D和2C亚型mRNA的表达。结论:巴西苏木红素能够阻滞小鼠子宫5-HT受体,并通过可能影响5-HT受体所介导的子宫功能。

关键词：巴西苏木红素 5-HT受体子宫小鼠

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新天然来源抗生素-抗霉素A_(18)的抗肿瘤活性及其产生菌I07A-01824的生物学特征

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中国抗生素杂志 2011年第4期36卷 269-275,279页

作者：闫蕾蕾韩宁宁何琪杨陈杰阳素娥刘少伟陶玲郭琳靳婧余利岩张玉琴孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 河北大学生命科学学院保定071002 中国兽医药品监察所北京100081 桂林医学院桂林541004

目的检测抗霉素A18的体外抗肿瘤活性并对其产生菌I07A-01824的形态及培养特征,生理生化特征等进行研究。方法用MTT法检测抗霉素A18的肿瘤细胞生长抑制作用,用流式细胞术测定其对细胞周期的影响;按分类学常规方法研究菌株I07A-01824的形... 详细信息

目的检测抗霉素A18的体外抗肿瘤活性并对其产生菌I07A-01824的形态及培养特征,生理生化特征等进行研究。方法用MTT法检测抗霉素A18的肿瘤细胞生长抑制作用,用流式细胞术测定其对细胞周期的影响;按分类学常规方法研究菌株I07A-01824的形态及部分生理生化特征。结果抗霉素A18能够抑制人肝癌细胞HepG2、人口腔上皮癌细胞KB的生长;这两个细胞株均被阻滞在细胞周期的S期。菌株I07A-01824的形态及培养特征与已知种——黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)一致。结论红树林内生放线菌是新抗生素的重要来源。

关键词：红树林内生放线菌抗霉素A18 黄白链霉菌细胞毒活性

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吸水链霉菌17997产生氢醌型格尔德霉素及其生物合成中间产物

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中国抗生素杂志 2011年第11期36卷 833-838页

作者：贾长虹刘昕赫卫清林灵张侃王红远孙桂芝王以光武临专卫生部抗生素生物工程重点实验室中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 东北农业大学哈尔滨150030 沈阳药科大学沈阳110016

目的了解格尔德霉素生物合成PKS后修饰过程中的一些细节。方法对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997及其格尔德霉素生物合成聚酮合酶（polyketide synthase，PKS）后修饰基因阻断变株（gdmP和gdmN）在ISPII平板不同时间的培养物进行乙酸... 详细信息

目的了解格尔德霉素生物合成PKS后修饰过程中的一些细节。方法对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997及其格尔德霉素生物合成聚酮合酶（polyketide synthase，PKS）后修饰基因阻断变株（gdmP和gdmN）在ISPII平板不同时间的培养物进行乙酸乙酯提取，硅胶板TLC和NaOH显色分析，检测GDM及其生物合成中间产物，并利用LC-MS对中间产物进行鉴定。结果吸水链霉菌17997原株、gdmN和gdmP-变株在培养时间72～96h，发现氢醌型格尔德霉素（GQH2）、氢醌型4，5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基格尔德霉素（H，GQH2-dC）和氢醌型4，5-双氢格尔德霉素（H2GQH2）分别为主要组分，相应的醌型化合物为次要组分；之后，这些氢醌型化合物随培养时间延长逐渐消失，相应的醌型化合物成为主要组分。双向硅胶板TLC分析证实GQH2、H2GQH2-dC和IH2GQH2均可在空气中自发氧化为相应的醌型化合物。结论在吸水链霉菌17997的GDM生物合成PKS后修饰过程中，首次提出GQH2自发氧化为GDM可能是氢醌型向醌型转变的位点，同时它也是GDM生物合成最后一步。

关键词：格尔德霉素氢醌型格尔德霉素生物合成吸水链霉菌17997

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吴茱萸收缩血管作用的体内体外研究(英文)

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中国天然药物 2011年第1期9卷 65-73页

作者：王秀坤王玉刚詹宏磊柴玉爽胡珺邢东明游学甫雷帆杜力军清华大学生命科学学院医学院药物药理研究室北京100084 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所药理室北京100050

目的:对吴茱萸的收缩血管作用及其机制进行了研究。方法:吴茱萸提取物经透析袋(100D)处理后,对吴茱萸透析液(ED,>100D)进行了体内和体外实验研究。结果:ED能够明显增加小鼠脑血流,并能够诱导大鼠胸主动脉环的收缩,且均具有一定的剂... 详细信息

目的:对吴茱萸的收缩血管作用及其机制进行了研究。方法:吴茱萸提取物经透析袋(100D)处理后,对吴茱萸透析液(ED,>100D)进行了体内和体外实验研究。结果:ED能够明显增加小鼠脑血流,并能够诱导大鼠胸主动脉环的收缩,且均具有一定的剂量效应。在苯肾上腺素收缩血管的基础上ED能够引起进一步的收缩反应。250mg·L-1 ED的血管收缩活性,其诱导血管收缩的程度是50mmol·L-1 KCl最大收缩的113%,是10μmol·L-1苯肾上腺素的78%,为20mmol·L-1咖啡因的183%。细胞表面α受体的拮抗剂酚妥拉明,能够明显抑制吴茱萸收缩血管活性,而β,M和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂普萘洛尔、阿托品和氯沙坦均未对ED的收缩血管活性带来影响。去除细胞外的钙离子或者使用L-型钙离子通道拮抗剂尼卡地平可以显著地抑制ED的缩血管作用,而钙离子通道开放剂BAY-K8644和钾离子通道开放剂吡那地尔对ED收缩血管作用也有一定影响。利用选择性受体抑制剂对ED可能的信号通路研究显示,使用肌球蛋白激酶(MLCK)抑制剂、RhoA抑制剂和三磷酸肌醇(IP3)受体抑制剂均可以抑制ED的活性,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂和胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂对吴茱萸的活性则无影响。结论:ED能够引发钙依赖性和非钙依赖性血管收缩,其中机制包括细胞外钙内流,α受体、ROK和IP3受体信号通路以及MLCK的激活等。吴茱萸的收缩血管作用不仅包括细胞膜钙通道的调节机制也包括对细胞内钙的调节。

关键词：吴茱萸透析血管收缩

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