检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 162-169页

作者：孙誉芳赵慧杨惠洁谢莹鲍春婷李淑艳王浇磊李长贵广州医科大学研究生院广州511495 中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室北京102629 北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 长春生物制品研究所有限责任公司疫苗研究室长春130012

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与10... 详细信息

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与100半数组织培养感染剂量(TCID 50)/孔的RSV中和,接种Hep-2细胞培养,80%丙酮固定细胞,ELISA方法检测感染细胞中病毒的N蛋白,当每孔的吸光度值低于临界值时,视为中和试验阳性孔,阳性孔血清的最高稀释度为该血清的中和抗体滴度。优化抗体稀释度、检测时间、细胞密度及中和时间,建立基于N-ELISA的中和抗体检测方法,对建立的实验方法进行细胞代次、边缘孔效应、准确性、重复性以及精密度验证,初步应用于人RSV IgG阳性血清检测,分析与微量中和法的相关性。结果成功构建出pET30a-N质粒,表达纯化的N蛋白纯度较高,特异性良好;三免后兔血清效价为1∶51200,可特异性结合RSV;制备的抗RSV N兔多抗的效价为1∶51200,特异性良好,建立的快速中和抗体检测方法在4 d就可检测,中和时间可缩短至30 min,细胞代次、96孔板位置(边缘孔和非边缘孔)对该方法检测无影响,重复性、精密性、准确度良好,建立的方法和微量中和法检测64份RSV IgG阳性人血清,相关系数为0.9296,证明两种方法具有良好的正相关性。结论成功建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法,可用于评价RSV疫苗接种后的血清抗体水平。

关键词：呼吸道合胞病毒中和抗体酶联免疫吸附试验

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IL-6对小鼠呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响

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免疫学杂志 2020年第8期36卷 670-675,682页

作者：杨谨溪范琪琪李楠郑惠文李恒杨泽宁陈燕丽候东佩郭磊刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所呼吸道病毒研究室昆明650118

目的探究IL-6对呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响。方法通过real-time PCR对IL-6敲除小鼠的上呼吸道鼻黏膜和下呼吸道肺组织中56种趋化因子及受体的表达谱进行芯片分析,利用流式细胞术对上下呼吸道中免疫细胞组成进行分析;... 详细信息

目的探究IL-6对呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响。方法通过real-time PCR对IL-6敲除小鼠的上呼吸道鼻黏膜和下呼吸道肺组织中56种趋化因子及受体的表达谱进行芯片分析,利用流式细胞术对上下呼吸道中免疫细胞组成进行分析;再使用IL-6蛋白对野生型小鼠进行滴鼻处理,检测鼻黏膜和肺组织内趋化因子表达谱和免疫细胞组成的改变。结果IL-6敲除后小鼠肺组织CXCL5表达显著降低,鼻黏膜中T细胞占比升高,肺组织中肺泡巨噬细胞和CD4^+T细胞占比均降低;IL-6滴鼻后鼻黏膜中CCL3、CXCL2和CXCL3的表达显著升高,肺组织中总白细胞占比显著减少,除中性粒细胞占比增加外,其它免疫细胞均有减少。结论降低或升高IL-6水平均可导致呼吸系统内多种趋化因子表达以及免疫细胞组成发生改变,提示IL-6可调节呼吸系统免疫,尤其是中性粒细胞的免疫反应。

关键词：白细胞介素-6 趋化因子趋化因子受体呼吸系统中性粒细胞

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戊型肝炎病毒与UBR2相互作用的初步研究

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生命的化学 2021年第6期41卷 1215-1221页

作者：龚石林陈双凤赵良运禹文海黄芬昆明理工大学医学院昆明650500 云南省临床病毒学重点实验室昆明650500 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650038

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是一种经肠道传播、严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。HEV不仅可以在肝脏中复制,还可以在肝外组织复制并导致组织损伤,如HEV可在男性生殖系统中复制并导致睾丸损伤,但其发病机制尚不明确。UBR... 详细信息

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是一种经肠道传播、严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。HEV不仅可以在肝脏中复制,还可以在肝外组织复制并导致组织损伤,如HEV可在男性生殖系统中复制并导致睾丸损伤,但其发病机制尚不明确。UBR2在生殖系统高表达,是男性减数分裂和精子形成的关键,但其与HEV的相互作用尚不清楚。本文以探究HEV与UBR2之间的相互作用关系为目的,通过构建真核表达载体、转染细胞,利用Western blot技术验证UBR2能否成功过表达。同时,在细胞中加入HEV病毒,并利用Western blot技术探究HEV对UBR2的影响。另外,在HEV感染的新西兰大白兔睾丸组织中,利用免疫荧光共定位技术观察HEV与UBR2的相互作用关系。上述实验成功构建了pEGFP-UBR2质粒,并在A549细胞和Huh 7.5.1细胞中过表达,发现在A549细胞系中,HEV对UBR2有抑制作用;在感染HEV的睾丸组织中发现高表达的UBR2与HEV ORF2衣壳蛋白能够共定位,提示了两者可能存在相互作用。这为深入研究HEV与UBR2的相互作用,以及HEV导致生殖系统损伤的致病机制奠定了基础。

关键词：戊型肝炎病毒生殖系统 UBR2 睾丸相互作用

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表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证

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中国兽医学报 2021年第12期41卷 2304-2310,2369页

作者：郝嘉翼李乐天张和平陈永福金宁一王茂鹏李昌吉林农业大学动物科技学院/动物医学院吉林长春130118 中国农业科学院长春兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元吉林长春130122 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018 温州大学病毒学研究所浙江温州325035

本研究拟构建猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的重组植物乳杆菌。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质... 详细信息

本研究拟构建猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的重组植物乳杆菌。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质粒并验证,获得重组质粒NZ3900:pSIP411-PDCoV S1。将重组质粒电转入植物乳杆菌LP18,获得重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1,对诱导时间、诱导剂质量浓度、诱导温度等表达条件进行优化,以获得最佳表达条件。结果显示,成功扩增出1939 bp经过修饰和优化的目的基因PDCoV S1,成功构建了重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1。Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法表明重组蛋白能够在重组植物乳杆菌中表达,最佳表达条件:诱导时间为6 h、诱导剂质量浓度为150μg/L、诱导温度为33℃。本试验成功构建了1株高表达PDCoV S1蛋白的植物乳杆菌,为PDCoV口服候选疫苗的研制奠定基础。

关键词： PDCoV S1蛋白植物乳杆菌构建与表达

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儿童呼吸道感染病原体核酸检测专家共识

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中华实用儿科临床杂志 2022年第5期37卷 321-332页

作者：谢正德邓继岿任丽丽张燕陈祥鹏张海邻赵林清徐保平钟礼立秦强卢根郑跃杰赵德育尚云晓曹玲陈志敏殷勇刘瀚旻申阿东应斌武符州李昌崇钱渊许文波王健伟申昆玲国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所国家呼吸系统疾病临床医学研究中心中国医学科学院儿童危重感染诊治创新单元北京100045 深圳市儿童医院感染科深圳518038 中国医学科学院&北京协和医学院病原生物学研究所卫生部病原系统生物学重点实验室北京100730 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所麻疹室北京102206 温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿童呼吸科温州325027 首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室北京100020 国家儿童医学中心国家呼吸系统疾病临床医学研究中心首都医科大学附属北京儿童医院呼吸科北京100045 湖南省人民医院儿童医学中心儿童呼吸病学湖南省重点实验室长沙410005 广州医科大学附属妇女儿童医疗中心呼吸科广州510623 深圳市儿童医院呼吸科深圳518038 南京医科大学附属儿童医院呼吸科南京210008 中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科沈阳110004 首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科北京100020 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心浙江大学医学院附属儿童医院呼吸内科杭州310052 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心呼吸科上海200127 四川大学华西第二医院儿科出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学)国家卫生健康委员会时间生物学重点实验室(四川大学)成都610041 国家儿童医学中心国家呼吸系统疾病临床医学研究中心首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所北京100045 四川大学华西医院实验医学科成都610044 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014

急性呼吸道感染是儿童最常见的感染性疾病,严重威胁儿童生命健康。快速准确的病原学诊断对于该类疾病的临床诊疗及防控具有重要意义。核酸检测方法因具有较高的灵敏度和特异性,得以快速地在临床推广应用,成为呼吸道感染病原体诊断的主... 详细信息

急性呼吸道感染是儿童最常见的感染性疾病,严重威胁儿童生命健康。快速准确的病原学诊断对于该类疾病的临床诊疗及防控具有重要意义。核酸检测方法因具有较高的灵敏度和特异性,得以快速地在临床推广应用,成为呼吸道感染病原体诊断的主要方法。为规范儿童呼吸道感染病原体核酸检测的临床应用,提升病原体的诊断水平,特组织相关领域专家,撰写《儿童呼吸道感染病原体核酸检测专家共识》,以指导儿童呼吸道感染病原体的核酸检测,整体提升儿童呼吸道感染病原体的诊断能力。

关键词：儿童急性呼吸道感染病原体核酸检测共识

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诺如病毒感染模型的研究进展

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微生物学免疫学进展 2019年第4期47卷 75-79页

作者：吴琼雯(综述) 刘龙丁(审校) 昆明医科大学中国医学科学院昆明医学生物研究所呼吸道病毒研究室云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所呼吸道病毒研究室云南昆明650031

诺如病毒(noroviruses, NoVs)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)诺如病毒属(Norovirus),是引起人类非细菌性急性胃肠炎的主要病原体。每年约有1亿人由于NoVs感染而发病,儿童、老年人以及免疫功能异常者均为易感人群,可... 详细信息

诺如病毒(noroviruses, NoVs)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)诺如病毒属(Norovirus),是引起人类非细菌性急性胃肠炎的主要病原体。每年约有1亿人由于NoVs感染而发病,儿童、老年人以及免疫功能异常者均为易感人群,可导致患者产生腹泻、呕吐等症状,严重者甚至死亡。由于NoVs的快速变异,无法在体外培养人诺如病毒及缺乏用于口腔感染的小动物模型,这就限制了对NoVs生物学特性的进一步研究。现就NoVs的病原学、病毒受体、细胞模型、动物模型等的研究作一概述。

关键词：诺如病毒受体体外培养系统动物模型肠道菌群疫苗

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两种结核分枝杆菌培养法在结核小鼠感染模型实验中的应用对比

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中国比较医学杂志 2019年第5期29卷 104-108页

作者：刘志昊穆大业占玲俊章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院武汉430071 中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法... 详细信息

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法实验分为BACTEC MGIT 960培养组与L-J培养组,经尾静脉注射1.0×10~6 CFU/mL H37Rv菌液感染36只C57BL/6雌性小鼠,感染一周后18只小鼠采用利福平治疗四周,18只小鼠注射等量磷酸缓冲液(PBS)作为对照,用BACTEC MGIT 960快速培养与罗氏培养法对36只小鼠肺、脾及肝组织匀浆液进行培养。结果采用BACTEC MGIT 960培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织培养物的报阳时间分别为(187.11±10.20) h、(347.22±12.70) h、(276.39±13.09) h,对照组为(142.50±11.70) h、(251.67±16.63) h、(230.28±7.22) h,组间对比差异有显著性(P<0.001);罗氏培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织荷菌量分别为(5.15±0.15) log_(10) CFU、(3.30±0.23) log_(10) CFU、(3.40±0.25) log_(10) CFU,对照组荷菌量分别为(5.90±0.25) log_(10) CFU、(3.88±0.31) log_(10) CFU、(4.15±0.30) log_(10) CFU,组间对比差异有显著性(P<0.001)。结论采用BACTEC MGIT 960培养法和罗氏培养法进行荷菌量检测,其培养结果相符,但是前者检测出阳性结果时间平均缩短一半,并且区分度也较高,说明BACTEC MGIT 960培养法在动物模型的荷菌量检测中更有优势,可运用于结核感染动物模型中荷菌量的检测。

关键词：结核分枝杆菌 BACTEC MGIT 960 罗氏培养法小鼠模型

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转人DPP4的转基因小鼠模型的构建与鉴定

转人DPP4的转基因小鼠模型的构建与鉴定

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：刘超崔莹李冰谢英河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部吉林农业大学动物科学技术学院北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室

目的制备携带有人源DPP4基因（hDPP4）的转基因小鼠,为中东呼吸综合征（Middle East Respiratory ***）冠状病毒疫苗的研制和治病机制分析工作提供小动物模型。方法首先从体外培养的人类细胞系中克隆HDPP4 cDNA序列,将其插入表达载体后... 详细信息

目的制备携带有人源DPP4基因（hDPP4）的转基因小鼠,为中东呼吸综合征（Middle East Respiratory ***）冠状病毒疫苗的研制和治病机制分析工作提供小动物模型。方法首先从体外培养的人类细胞系中克隆HDPP4 cDNA序列,将其插入表达载体后构建重组质粒。随后利用原核注射法制备HDPP4转基因小鼠,繁育出F代转基因小鼠。选取整合有HDPP4基因的F代鼠与野生型鼠杂交繁殖获得F代小鼠。PCR鉴定F代转基因小鼠基因型,同时用RT-PCR和Western blotting方法检测HDPP4在转基因小鼠全身组织表达情况。结果共得到F鼠4只。F代转基因小鼠经Western blotting和RT-PCR检测,HDPP4表达水平在心、肝、脾、肺、脑等组织中表达中均明显增高。结论成功构建HDPP4基因小鼠,并且能够稳定遗传。为后续的MERS疫苗评价相关工作奠定了基础。

关键词：中东呼吸综合征转基因小鼠

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我国手足口病病原学研究和关键防控技术的建立及推广应用

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中国病毒病杂志 2017年第2期7卷 87-95页

作者：张勇杨帆胡永峰张燕檀晓娟冀天骄祝双利杜江崔爱利吴志强张静薛颖王显军邵育晓张誌刘中华许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206 中国医学科学院病原生物学研究所北京100730 中国疾病预防控制中心北京102206 山东省疾病预防控制中心山东济南250014 北京贝尔生物工程有限公司北京102612 北京金豪制药股份有限公司北京100176 江苏硕世生物科技有限公司江苏泰州225300

目的开展手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原学和流行病学系统研究,以满足我国对HFMD防控的迫切需求。方法建立并完善覆盖全国范围的HFMD三级实验室监测网络体系,将研制的针对我国HFMD防控所急需的系列组合检测和监测技术... 详细信息

目的开展手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原学和流行病学系统研究,以满足我国对HFMD防控的迫切需求。方法建立并完善覆盖全国范围的HFMD三级实验室监测网络体系,将研制的针对我国HFMD防控所急需的系列组合检测和监测技术推广应用到各省、市级实验室,开展全国范围内的HFMD病原学检测和流行病学监测工作。结果通过连续多年、系统的HFMD病原学和流行病学研究,结果显示,肠道病毒71型(EV-A71)在HFMD病原的构成比例与当地出现重症和死亡病例的多少呈高度正相关;证实C4基因亚型是我国EV-A71引起的HFMD流行的绝对优势本土基因亚型,同时依据C4基因亚型的变异变迁规律,将其进一步划分为C4a和C4b两个进化分支,EV-A71C4a和C4b的更替与2008年之后我国HFMD重症和死亡病例增多密切相关;在此基础上,完成了EV-A71灭活疫苗种子毒株的筛选;同时,阐明了我国HFMD流行特征及规律,揭示了健康人群中EV-A71和CV-A16抗体水平及变化趋势;解析了我国HFMD病原谱构成,发现多种肠道病毒可引起HFMD疫情暴发,且不同年代和地区HFMD病原谱构成存在动态变化。结论本研究是国内外唯一连续多年针对HFMD开展系统病原学监测和研究的项目。对我国HFMD防控,保护我国儿童生命健康有非常重要的科学意义。

关键词：手足口病肠道病毒A组71型病原学研究手足口病病原谱关键防控技术

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流感病毒聚合酶酸性亚基转基因小鼠的制备与初步鉴定

流感病毒聚合酶酸性亚基转基因小鼠的制备与初步鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：谢英国娇李冰刘超河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室吉林农业大学动物科学技术学院河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路.方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫... 详细信息

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路.方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫病学实验室分离、保存,经RNA抽提逆转后从中扩增出甲型流感病毒H1N1PA基因的CDS基因全长序列.通过定向克隆的方法将其连接到pIRES2-GFP载体上,酶切鉴定并测序.为提高目的基因表达效率再将重组质粒中的CMV启动子替换为UBC启动子,命名为pUBC-IRES-PA.转染至293T细胞,通过GFP表达情况检测其在细胞内的表达效率.Qiagen@EndoFree Plasmid Maxi Kit制备质粒,线性化后用SephadexG-50进行凝胶层析纯化,纯化产物用0.1×TE缓冲液稀释至终浓度5ng/μl.水平显微注射法将其导入140枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核.将注射后存活的约110枚受精卵移植入3只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中.仔鼠出生10天后,提取尾尖组织DNA,PCR扩增鉴定仔鼠基因型.结果构建的真核重组表达质粒pUBC-IRES-PA转染293T细胞后,可检测到PA的转录和表达.共产生14只子代小鼠,鼠尾PCR检测获得转基因阳性首建鼠1只,可以稳定遗传并建系.结论本实验成功构建了pUBC-IRES-PA真核表达载体,初步获得了稳定整合PA基因的转基因小鼠,进一步进行基因表达情况与病理学方法检测后有望建立小鼠流感病毒PA蛋白转基因模型,促进流感发病机理研究和药物开发.

关键词：流感病毒转基因小鼠

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