检索结果-内蒙古大学图书馆

第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：谢英国娇李冰刘超河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室吉林农业大学动物科学技术学院

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路。方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫... 详细信息

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路。方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫病学实验室分离、保存,经RNA抽提逆转后从中扩增出甲型流感病毒H1N1PA基因的CDS基因全长序列。通过定向克隆的方法将其连接到pIRES2-GFP载体上,酶切鉴定并测序。为提高目的基因表达效率再将重组质粒中的CMV启动子替换为UBC启动子,命名为pUBC-IRES-PA。转染至293T细胞,通过GFP表达情况检测其在细胞内的表达效率。Qiagen@EndoFree Plasmid Maxi Kit制备质粒,线性化后用SephadexG-50进行凝胶层析纯化,纯化产物用0.1×TE缓冲液稀释至终浓度5ng/μl。水平显微注射法将其导入140枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核。将注射后存活的约110枚受精卵移植入3只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中。仔鼠出生10天后,提取尾尖组织DNA,PCR扩增鉴定仔鼠基因型。结果构建的真核重组表达质粒pUBC-IRES-PA转染293T细胞后,可检测到PA的转录和表达。共产生14只子代小鼠,鼠尾PCR检测获得转基因阳性首建鼠1只,可以稳定遗传并建系。结论本实验成功构建了pUBC-IRES-PA真核表达载体,初步获得了稳定整合PA基因的转基因小鼠,进一步进行基因表达情况与病理学方法检测后有望建立小鼠流感病毒PA蛋白转基因模型,促进流感发病机理研究和药物开发。

关键词：流感病毒转基因小鼠

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不同剂量DPP4转导后MERS-CoV感染小鼠模型的临床及生物学特征比较

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病毒学报 2015年第6期31卷 593-600页

作者：姚艳丰蓝佳明李枫棣牛培华于品卢帅鲍琳琳谭文杰秦川中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生与计划生育委员会医学病毒学与病毒病重点实验室北京100021 河北医科大学病原生物学教研室

本研究探讨不同剂量DPP4转导小鼠后对中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)感染建模及其生物特性的影响。首先将表达MERS-CoV受体DPP4的重组腺病毒以高剂量(2.5×108 PFU/只)、低剂量(0.... 详细信息

本研究探讨不同剂量DPP4转导小鼠后对中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)感染建模及其生物特性的影响。首先将表达MERS-CoV受体DPP4的重组腺病毒以高剂量(2.5×108 PFU/只)、低剂量(0.5×108 PFU/只)分别转导转导BALB/c小鼠,继而滴鼻接种MERS-CoV,建立MERS-CoV感染小鼠模型。对成功构建的小鼠感染模型分别进行体征、病毒复制、免疫病理及抗体应答的比较分析。结果表明:两种剂量DPP4转导后MERS-CoV感染小鼠,均可引起典型肺炎表征,在小鼠肺部能检测到病毒复制及免疫病理,但高剂量DPP4转导组小鼠肺炎体征与肺病理损伤更明显,病毒复制水平亦高于低剂量DPP4转导组。小鼠感染建模后2w后可检测到结构蛋白特异抗体与中和抗体,高剂量DPP4转导组抗体应答亦明显高于低剂量转导组。本研究以两种剂量DPP4转导小鼠,均成功建立了MERS-CoV感染的小鼠模型,受体DPP4转导水平可影响MERS-CoV感染小鼠体征、病毒复制及抗体应答。

关键词：中东呼吸综合征中东呼吸综合征冠状病毒动物模型小鼠抗体应答

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中国26省(直辖市、自治区)2011-2014年5岁以下儿童腹泻病例轮状病毒流行特征分析

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疾病监测 2016年第6期31卷 463-470页

作者：耿启彬赖圣杰余建兴张子科杨婉琪李中杰吴建国杨维中武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072 中国疾病预防控制中心传染病预防控制处传染病监测预警中国疾病预防控制中心重点实验室北京102206 南安普顿大学地理环境系英国南安普顿SO171BJ 中国医学科学院病原生物学研究所梅里埃实验室北京100176 浙江大学医学院第一附属医院传染病诊断与治疗重点实验室浙江杭州310003 中国疾病预防控制中心北京102206

目的了解我国5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒的流行特征。方法在国内26省（直辖市、自治区）162家医院的门/急诊中开展腹泻监测,收集腹泻病例临床和流行病学资料,同时采集病例粪便标本,送92家网络实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA）... 详细信息

目的了解我国5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒的流行特征。方法在国内26省（直辖市、自治区）162家医院的门/急诊中开展腹泻监测,收集腹泻病例临床和流行病学资料,同时采集病例粪便标本,送92家网络实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和巢式PCR等方法检测轮状病毒,并分析2011 2014年不同时间、不同地区5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒检出率以及不同基因型的变异变迁情况。结果在19 849例儿童腹泻病例中,22.9%的病例检出轮状病毒,其中,1~2岁和6月龄至1岁儿童检出率最高,分别为29.0%和26.1%。轮状病毒在水样便中检出率最高,为26.2%。轮状病毒在冬季检出率最高,为39.4%,夏季检出率最低,为9.9%。轮状病毒在我国南部和中部地区的检出率最高,分别为28.0%和27.0%。A组轮状病毒为常见的血清型,占95.1%,其中G9 P[8]、G1 P[8]和G3 P[8]最为常见,分别占39.5%、16.8%和9.9%。2011年以来,G9 P[8]逐渐取代G1 P[8]和G3 P[8]成为目前我国最主要的流行株。结论轮状病毒是我国5岁以下儿童腹泻的常见病原体,并且呈现明显的时间和空间流行特征,G9 P[8]为主要流行株。

关键词：轮状病毒腹泻病哨点监测基因分型

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2007-2015年北京地区儿童急性下呼吸道感染人冠状病毒检测及临床分析

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中华儿科杂志 2015年第9期53卷 707-711页

作者：钱艺谢正德任丽丽刘春艳肖艳徐保平杨燕钱素云耿荣申昆玲首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所病毒研究室儿科学国家重点学科省部共建儿科重大疾病研究重点实验室 100045 首都医科大学附属北京儿童医院呼吸内科儿科学国家重点学科首都医科大学附属北京儿童医院中医科首都医科大学附属北京儿童医院急救病房中国医学科学院病原生物学研究所

目的了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）中人冠状病毒（HCoV）的感染情况,了解儿童急性下呼吸道HCoV感染的临床特征.方法 2007年3月至2015年2月首都医科大学附属北京儿童医院内科急救室就诊及住院的急性下呼吸道感染患儿共4 37... 详细信息

目的了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）中人冠状病毒（HCoV）的感染情况,了解儿童急性下呼吸道HCoV感染的临床特征.方法 2007年3月至2015年2月首都医科大学附属北京儿童医院内科急救室就诊及住院的急性下呼吸道感染患儿共4 371例,按年龄分为4组,其中＜1岁组1 890例;1～＜3岁组788例;3～＜6岁组553例;≥6岁组1 140例.采用RT-PCR方法,对患儿鼻咽吸取物进行HCoV（包括HCoV-OC43,HCoV-229E,HCoV-NL63和HCoV-HKU1）及RSV等9种常见呼吸道病毒检测.对单纯HCoV阳性住院病例的临床表现进行分析,并与同期单纯呼吸道合胞病毒感染住院病例的临床特征进行对比.结果（1）在总共4 371例ALRTI患儿中,病毒阳性2 895例（66.23％）,其中HCoV阳性147例（检出率3.36％）.（2）2007-2014年各年份HCoV的检出率（％）分别为：6.11、3.79、4.69、4.31、2.38、2.10、0.77和2.65;1-12月各月HCoV的检出率（％）依次为2.53、2.12、3.63、6.68、1.53、3.77、3.92、3.00、2.15、5.26、3.叭和2.80.（3）不同种HCoV在4 371例ALRTI患儿中的检出情况如下：HCoV-OC43阳性48例（1.10％）,HCoV-229E阳性32例（0.73％）,HCoV-NL63阳性25例（0.57％）,HCoV-HKU1阳性27例（0.62％）.（4）＜1岁、1～＜3岁、3～＜6岁和≥6岁年龄组HCoV的检出率分别为4.13％、5.08％、2.71％和1.23％（x2 =27.218,P＜0.01）.（5）单纯HCoV急性下呼吸道感染住院患儿共16例,其中支气管肺炎12例,急性喉梗阻3例,支气管哮喘急性发作2例.常见临床表现为咳嗽（14例）、喘息（13例）、呼吸困难（9例）、发热（6例）、声嘶（4例）、喉鸣（4例）,胸X线片异常（包括肺纹理增粗模糊、斑片影或致密影）（12例）.其临床表现、并发症的发生率以及接受机械通气的比例,与同期193例单纯RSV感染患儿差异无统计学意义.结论 2007年3月至2015年2月北京地区HCoV检出率为3.36％;单纯HCoV急性下呼吸道感染住院患儿临床表现及病情严重程度与单纯呼吸道合胞病毒感染者相似.

关键词：冠状病毒呼吸道感染儿童

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2007年至2014年北京地区儿童急性下呼吸道流感病毒感染临床分析

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中华实用儿科临床杂志 2015年第24期30卷 1883-1887页

作者：朱云郭佳运谢正德刘春艳任丽丽肖艳徐保平杨燕钱素云耿荣申昆玲首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所病毒研究室儿科学国家重点学科省部共建儿科重大疾病研究重点实验室100045 中国医学科学院病原生物学研究所首都医科大学附属北京儿童医院儿科学国家重点学科呼吸内科首都医科大学附属北京儿童医院儿科学国家重点学科中医科首都医科大学附属北京儿童医院儿科学国家重点学科急救病房

目的了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）流感病毒（IFV）感染状况,比较儿童ALRTIIFV和呼吸道合胞病毒（RSV）的临床特征.方法采集ALRTI患儿的咽拭子或鼻咽吸出物,利用多重反转录-聚合酶链反应检测方法检测RSV、副流感病毒、... 详细信息

目的了解北京地区儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）流感病毒（IFV）感染状况,比较儿童ALRTIIFV和呼吸道合胞病毒（RSV）的临床特征.方法采集ALRTI患儿的咽拭子或鼻咽吸出物,利用多重反转录-聚合酶链反应检测方法检测RSV、副流感病毒、鼻病毒和IFV等.对A、B和C型IFV阳性病例进行分析,比较单纯IFV感染患儿与同期单纯RSV感染患儿的临床特征.结果（1）2007年3月至2014年3月,共采集4 012份北京儿童医院收治的ALRTI患儿的呼吸道标本,2 697例标本病毒检测阳性（67.2％）,IFV标本256例（6.4％）,其中A型（IFA） 154例（3.8％）,B型（IFB）97例（2.4％）,C型（IFC）6例（0.1％）.（2）＜6个月、6个月-1岁、1-3岁、3-6岁和＞6岁年龄组中IFV检出率分别为4.1％、7.6％、12.0％、7.8％和4.8％,其中1-3岁组阳性率最高;男童与女童IFV总检出率差异无统计学意义（6.7％比5.9％,x2=2.63,P＞0.05）;冬春季为北京地区儿童流感病毒的流行高峰.（3）单纯IFA、单纯IFB和单纯RSV感染的ALRTI住院患儿分别为16例、15例和175例,单纯IFA感染组与单纯RSV感染组（43.8％比84.0％,x2=12.74,P＜0.001）和单纯IFB感染组与单纯RSV感染组（33.3％比84.0％ ,x2=19.11,P＜0.001）中＜1岁年龄患儿所占比例的差异有统计学意义.（4）单纯IFA和单纯IFB感染组重症肺炎的发生率高于单纯RSV感染组（31.2％、26.7％比4.0％,x2=18.49、13.01,P均＜0.001）,单纯IFA和单纯IFB感染组气管插管发生率高于单纯RSV感染组（25.0％、13.3％比1.7％ ,x2 =22.51、7.28,P＜0.001,P=0.001）,差异均有统计学意义,其他临床表现、诊断、机械通气的发生率和住院时间的差异均无统计学意义.结论 IFV是北京地区儿童ALRTI最主要的病毒病原之一,冬春季为儿童流感暴发的高峰期;低年龄组尤其是1-6岁的儿童更容易感染IFV,应作为流感防控的重点人群.ALRTI住院患儿单纯IFV感染与RSV感染的临床表现和病情严重程度相似,但单纯IFV感染较单纯RSV感染所致的儿童重症肺炎多.

关键词：急性下呼吸道感染流感病毒呼吸道合胞病毒临床特征儿童

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地塞米松浓度与脐带间充质干细胞的成骨分化

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中国组织工程研究 2013年第23期17卷 4204-4211页

作者：洪敬欣刘剑李琳芳韩俊领协和干细胞基因工程有限公司天津市300384 解放军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海市200438 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院天津市300020

背景:在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。目的:探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程... 详细信息

背景:在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。目的:探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中地塞米松的优选浓度。方法:采用植块法从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞。取第3代细胞进行日常细胞培养和诱导分化实验。流式细胞术检测所获细胞的表面标记表达情况,成脂、成骨诱导分化鉴定人脐带间充质干细胞。倒置相差显微镜观察成骨分化过程中细胞形态的变化。以含1×10-8mol/L,5×10-8mol/L,1×10-7mol/L3种浓度地塞米松的成骨诱导液对人脐带间充质干细胞进行成骨诱导。盐酸四环素荧光及Von Kossa染色法对比观察钙结节形成。反转录-聚合酶链反应法对比检测细胞骨桥蛋白基因表达。结果与结论:植块法分离的人脐带间充质干细胞形态均一,多为梭形,平行排列生长或旋涡状生长。流式细胞术检测CD29,CD73和CD90呈阳性表达,CD31,CD34和HLA-DR呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性。盐酸四环素荧光结果和Von Kossa染色结果显示,所形成的钙结节大小及数量,均随着地塞米松浓度的增加而增强、增多。反转录-聚合酶链反应检测结果显示,3种浓度地塞米松组的骨桥蛋白基因均有表达,且表达强度随着地塞米松浓度的增加而增强。提示成骨诱导液中地塞米松浓度为1×10-7mol/L时,能更有效地诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。

关键词：干细胞脐带脐血干细胞地塞米松优选浓度{成骨分化成脂分化钙结节骨桥蛋白细胞培养细胞鉴定细胞形态干细胞图片文章

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肠道病毒71型中和抗体的保护水平

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中国生物制品学杂志 2013年第2期26卷 166-170页

作者：毛群颖高帆郝春生董承红高强王超姚昕吴星邵杰朱凤才梁争论王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京生物制品研究所有限责任公司第二研究室北京100024 中国医学科学院医学生物学研究所病毒免疫室云南昆明650118 北京科兴生物制品有限公司研发中心北京100085 华兰生物工程股份有限公司研发中心河南新乡453003 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009

目的通过检测乳鼠模型、健康婴幼儿和疫苗免疫后目标人群的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体效价,为确定EV71疫苗保护水平提供基础数据。方法 6份不同EV71病毒株免疫血清经中和抗体准确定量后,分别通过两个EV71乳鼠攻毒模型,... 详细信息

目的通过检测乳鼠模型、健康婴幼儿和疫苗免疫后目标人群的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体效价,为确定EV71疫苗保护水平提供基础数据。方法 6份不同EV71病毒株免疫血清经中和抗体准确定量后,分别通过两个EV71乳鼠攻毒模型,检测EV71中和抗体保护水平。采用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,分别对健康婴幼儿及疫苗免疫后血清进行中和抗体准确定量。结果在2个乳鼠攻毒模型中,6份免疫血清的中和抗体保护水平接近,ED50分别为10～50 U和6.1～54.2 U;婴幼儿人群7、12和24月龄抗体阳性率分别为45.0%、48.8%和56.8%,阳性人群的抗体效价分别为113.8、120.3和330.6U/m(l均值为173.2 U/m)l,母亲抗体阳性率和效价分别为86.7%和114.3 U/ml;中、高剂量疫苗2针免疫后,婴幼儿抗体阳性率均为100%,效价为356.0和1 136.2 U/ml,较婴幼儿人群自然感染水平高2.1～6.6倍。结论应用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,确定了以U/ml为单位的乳鼠攻毒抗体保护水平及婴幼儿人群抗体水平和疫苗免疫后抗体水平,为EV71疫苗免疫人群中和抗体保护水平的确定提供了依据。

关键词：手足口病肠道病毒A型,人中和抗体

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肠道病毒71型中和抗体检测用标准病毒候选株的筛选及制备

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 725-729页

作者：毛群颖郭增兵郝春生于丹高帆董承红安文琪高强谢忠平李秀玲梁争论中国食品药品检定研究院肝炎病毒疫苗室北京100050 华兰生物工程股份有限公司河南新乡453003 北京生物制品研究所有限责任公司第二研究室北京100024 北京科兴生物制品有限公司北京100085 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的筛选并制备肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体检测用标准病毒候选株,规范EV71中和抗体检测方法。方法通过对亲本株与非亲本株交叉中和试验,进行相应的几何平均滴度(GMT)比较,从10株EV71毒株中筛选出具有理想亲本中和能力... 详细信息

目的筛选并制备肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体检测用标准病毒候选株,规范EV71中和抗体检测方法。方法通过对亲本株与非亲本株交叉中和试验,进行相应的几何平均滴度(GMT)比较,从10株EV71毒株中筛选出具有理想亲本中和能力、又具有较广泛交叉中和作用的毒株。筛选出的毒株按《中国药典》三部(2010版)相关要求,冷冻干燥后制备1批符合我国疾病流行特征的标准病毒候选株,联合3家实验室对候选株的病毒滴度进行协作标定,并初步应用于人血清样品的检测。结果筛选出交叉中和能力强、分离、传代背景清晰的EV71 V03株(523-07T)作为候选病毒株;制备的候选病毒株分装精确度、水分含量、无菌检查、支原体检查、其他外源因子检查等项目均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求;经联合标定,候选毒株的平均病毒滴度为4.83 lgTCID50/ml(95%CI:4.53～5.12 lgTCID50/ml),变异系数为3.16%;应用候选毒株和中和抗体定值标准品检测EV71自然感染人血清样品,可将实验室间检测差异由4.4倍降至1.6倍。结论初步筛选出的候选株EV71/523-07T株具有理想的亲本株中和作用,又具有较广泛的交叉中和特性,有望成为EV71中和抗体检测的标准毒株候选株。

关键词：肠道病毒A型,人手足口病中和抗体

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儿童急性下呼吸道感染病毒病原学2007—2010年监测

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中华儿科杂志 2011年第10期49卷 745-749页

作者：谢正德肖艳刘春艳胡英惠幺远杨燕钱素云耿荣王健伟申昆玲首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所病毒研究室儿科学国家重点学科省部共建儿科重大疾病研究重点实验室100045 首都医科大学附属北京儿童医院儿科学国家重点学科呼吸内科首都医科大学附属北京儿童医院中国科首都医科大学附属北京儿童医院急救病房中国医学科学院病原生物学研究所

目的了解儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）的病毒病原学构成及其流行的季节特征。方法2007年3月-2010年3月首都医科大学附属北京儿童医院急救室就诊及内科住院的ALRTI患儿共1914例。采集每例患儿鼻咽吸取物1份，用（RT）PCR方法进行病毒... 详细信息

目的了解儿童急性下呼吸道感染（ALRTI）的病毒病原学构成及其流行的季节特征。方法2007年3月-2010年3月首都医科大学附属北京儿童医院急救室就诊及内科住院的ALRTI患儿共1914例。采集每例患儿鼻咽吸取物1份，用（RT）PCR方法进行病毒核酸检测，包括呼吸道合胞病毒（RSV），人鼻病毒（HRV），副流感病毒（PIV）1～4型，流感病毒（IFA、IFB和IFC），腺病毒（ADV），肠道病毒（EV），冠状病毒（HCOV），偏肺病毒（HMPV）及博卡病毒（HBOV）。结果（1）总的病毒阳性检出率70．3％，其中〈1岁、1-〈3岁、3～〈6岁和≥6岁组分别为83．0％、80．1％、60．8％和27．7％，其差异有统计学意义（X2=2213．5，P=0．000）。检出率高的前3种病毒依次为RSV、HRV和PIV，其在〈1岁组分别是50．9％、36．2％和12．0％。（2）RSV和HRV的流行季节在冬春，而PIV在春夏。（3）〈1岁、1～〈3岁、3～〈6岁和36岁组病毒阳性患儿中检出2种以上病毒的比例分别为38．2％、36．4％、30．2％和15．2％，其差异有统计学意义（x2=1346．00，P=0．000）。结论病毒是小年龄儿童ALRTI的主要病原，以RSV、HRV和PIV最为重要，其感染存在季节特征；ALRTI患儿存在多种病毒感染，其临床意义有待进一步研究。

关键词：呼吸道感染呼吸道病毒儿童

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人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第1期14卷 42-47页

作者：洪敬欣张茜真韩俊领刘辉刘剑邱录贵协和干细胞基因工程有限公司天津市脐带血造血干细胞库天津市300384 解放军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海市200438 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所浙江省杭州市310018 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院天津市300020

背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质... 详细信息

背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。

关键词：培养体系腺病毒感染效率脐带间充质干细胞干细胞

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