检索结果-内蒙古大学图书馆

CLIP-PCR直接检测血液中疟原虫雌性配子体特异转录产物s25 mRNA

基础医学与临床 2022年第1期42卷 139-144页

作者：杨珺源骈红茹杨明珠郑直中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过“三明治”杂交被... 详细信息

目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过“三明治”杂交被捕获到96孔板表面。洗去未结合探针后,将结合在mRNA靶标上的连接探针进行连接,得到两端为特殊设计序列的单链扩增模板。再用通用引物进行染料法qPCR扩增,或在端部设计TaqMan探针序列,用通用引物和通用TaqMan探针进行探针法qPCR扩增。评价这一基于捕获和连接扩增的方法(CLIP-PCR)的灵敏度、特异性和重复性并与普通的RT-qPCR方法进行比较,将其应用于临床样品的检测。结果该CLIP-PCR具有较高的灵敏度和特异性。与普通的RT-qPCR一样,均可检测低至11拷贝数的s25 mRNA靶标;而且该CLIP-PCR操作更简便。该CLIP-PCR可准确检测到疟疾患者血液中的雌性配子体。可将96个样品的检测时间缩短至3 h。结论建立了灵敏高效的染料法和通用TaqMan探针法CLIP-PCR检测疟原虫雌性配子体,为疟疾传播的控制、配子体大规模筛查奠定了基础。

关键词：疟原虫配子体检测方法捕获连接

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昆虫细胞表达的HPV-58 L1病毒样颗粒的层析纯化及免疫原性分析

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基础医学与临床 2022年第5期42卷 763-767页

作者：王志荣张婷许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系北京100005

目的探索利用昆虫杆状病毒表达系统(IBEVS)表达的重组人乳头瘤病毒(HPV)58型主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)的简单可行的层析分离方法。方法收集高水平表达HPV-58 L1的昆虫细胞并制备裂解上清,建立硫酸铵沉淀(ASP)联合层析法纯化L1蛋白... 详细信息

目的探索利用昆虫杆状病毒表达系统(IBEVS)表达的重组人乳头瘤病毒(HPV)58型主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)的简单可行的层析分离方法。方法收集高水平表达HPV-58 L1的昆虫细胞并制备裂解上清,建立硫酸铵沉淀(ASP)联合层析法纯化L1蛋白的最佳条件,对纯化后的蛋白进行体外组装。对L1蛋白的纯化各个阶段中的组分、最终产品(纯品蛋白)及组装状态进行理化性质鉴定,分析其免疫原性。结果30%饱和硫酸铵(AS)分级分离后,L1蛋白得率为72%,纯度为9.34%;阴离子交换层析经300 mmol/L NaCl缓冲液洗脱后,L1蛋白得率>90%,纯度为13.6%;进一步经羟基磷灰石层析收获流穿液后,L1蛋白得率>80%,宿主蛋白质残留(HCPs)分析和L1蛋白的SDS-PAGE考马斯亮蓝染色显示蛋白纯度>99%。经上述3步分离纯化的L1蛋白,其总得率为55.7%,每升细胞悬浮培养液(约3.0×10^(9)个细胞)产量为57~65 mg。动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析显示,L1蛋白组装成了形状均一、直径约55 nm的VLPs。该法制备HPV-58 L1 VLPs诱导小鼠免疫系统产生的中和抗体水平与超离法制备的相当。结论本研究所建立的HPV58-L1 VLPs分离纯化方法是一套具有蛋白得率高、活性好,且操作简单等特点的成熟方案,为利用IBEVS生产成本低的HPV多价预防性疫苗奠定基础。

关键词：人乳头瘤病毒58型主要衣壳蛋白L1 病毒样颗粒(VLP) 昆虫细胞纯化

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河北省汉族和满族成人高血压家族史与超重/肥胖对高血压发病的交互作用

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1053-1059页

作者：蒋晨晨崔泽潘利孙纪新何慧婧胡耀达单广良中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院流行病与卫生统计学系北京100005 河北省疾病预防控制中心河北石家庄050000

目的探讨河北省汉族和满族成人高血压家族史、超重/肥胖以及二者的交互作用对高血压发病的影响,为河北省预防和控制高血压提供参考依据。方法于2017年7~8月在河北省采用多阶段分层整群抽样的方法对河北省4633名20~80岁汉族和满族进行横... 详细信息

目的探讨河北省汉族和满族成人高血压家族史、超重/肥胖以及二者的交互作用对高血压发病的影响,为河北省预防和控制高血压提供参考依据。方法于2017年7~8月在河北省采用多阶段分层整群抽样的方法对河北省4633名20~80岁汉族和满族进行横断面调查,包括问卷调查和体格检查。采用多因素非条件Logistic回归模型分析高血压家族史和超重/肥胖对高血压的作用。结果在校正了民族、性别、年龄、城乡、收入、教育程度、吸烟、饮酒、身体锻炼和体力劳动后,有高血压家族史人群患高血压的风险是无高血压家族史人群的3.60倍(95%CI:2.51~5.18),超重/肥胖人群患高血压的风险是非超重/肥胖人群的2.90倍(95%CI:1.92~4.37),二者同时存在时患高血压的风险是二者皆不存在时的9.78倍(95%CI:6.86~13.95)。交互作用超额相对危险度(RERI)为4.28(95%CI:2.59~5.96),交互作用指数(SI)为1.95(95%CI:1.54~2.47),交互作用归因比(AP)为0.44(95%CI:0.33~0.54)。结论高血压家族史和超重/肥胖均与高血压患病风险增加有关,二者存在正向的加法交互作用。

关键词：高血压家族史超重/肥胖交互作用

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酸枣仁的古今应用和热点变化的研究进展

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中成药 2022年第12期44卷 3949-3953页

作者：尹美玲宋颜君许利嘉岳利峰肖培根北京协和医学院/中国医学科学院药用植物研究所北京100193 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193 北京中医药大学东直门医院北京100700

酸枣仁是古今常用的养心安神药之一,有着悠久的药食两用历史,具有养心补肝、宁心安神、敛汗生津的功效。酸枣仁及其复方临床应用广泛,常用于治疗失眠、抑郁等精神疾病以及心悸、室性早搏等心血管类疾病,具有较高的临床安全性,有极大的... 详细信息

酸枣仁是古今常用的养心安神药之一,有着悠久的药食两用历史,具有养心补肝、宁心安神、敛汗生津的功效。酸枣仁及其复方临床应用广泛,常用于治疗失眠、抑郁等精神疾病以及心悸、室性早搏等心血管类疾病,具有较高的临床安全性,有极大的开发研究价值。本文通过查阅本草典籍、数据库以及现代文献,对酸枣仁的传统与现代应用情况进行总结,并借助文献计量学方法对酸枣仁的现代临床与药理研究热点变化进行分析,以期为酸枣仁的未来研究提供参考。

关键词：酸枣仁传统应用现代应用文献计量学

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群医学:弥合预防医学与临床医学裂痕的新兴学科

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中华医学杂志 2020年第26期100卷 2001-2005页

作者：杨维中冷志伟单广良王辰中国医学科学院北京协和医学院群医学及公共卫生学院北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京100730

在医学实践中,预防医学与临床医学的裂痕由来已久,其根源性因素在于两类学科一直并行发展,弱化了对医学生大健康意识的培养,固化了医学生的思维。近些年,国际上提出群医学概念,为弥补这一裂痕提出了思路。本文通过回顾群医学的定义、发... 详细信息

在医学实践中,预防医学与临床医学的裂痕由来已久,其根源性因素在于两类学科一直并行发展,弱化了对医学生大健康意识的培养,固化了医学生的思维。近些年,国际上提出群医学概念,为弥补这一裂痕提出了思路。本文通过回顾群医学的定义、发展、学科建设、人才培养及实践情况,认为当前我国实施健康中国战略,必须通过群医学学科建设推动"以治病为中心"向"以人民健康为中心"的转变,具体措施包括建立完整的涵盖学历教育、毕业后教育、继续教育的群医学教育培训体系,在临床及公共卫生实践中灌输群医学理念,建立群医学示范基地,并开展宣传倡导推动群医学学科在全国发展。

关键词：预防医学临床医学群医学弥合裂痕

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间充质干细胞工程化的DNA纳米结构构建及其在小鼠肺组织靶向递送中的应用

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1110-1116页

作者：李卓婷尚颖旭汪海燕蒋乔丁宝全李静赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心北京100005 国家纳米科学中心中国科学院纳米科学卓越创新中心中国科学院纳米系统与多级次制造重点实验室北京100190

目的将三维管状DNA折纸纳米结构(DONs)修饰于间充质干细胞(MSCs)膜表面得到DONs@MSCs,利用MSCs归巢肺组织的特点实现DONs向小鼠肺组织的靶向递送。方法利用计算机辅助工具进行DNA序列设计,得到三维管状DONs。利用原子力显微镜(AFM)表征D... 详细信息

目的将三维管状DNA折纸纳米结构(DONs)修饰于间充质干细胞(MSCs)膜表面得到DONs@MSCs,利用MSCs归巢肺组织的特点实现DONs向小鼠肺组织的靶向递送。方法利用计算机辅助工具进行DNA序列设计,得到三维管状DONs。利用原子力显微镜(AFM)表征DONs形貌,并通过琼脂糖凝胶电泳(AGE)验证功能基团的上载。采用生物正交代谢糖工程在MSCs细胞膜表面修饰荧光标记的DNA单链(ssDNA)。根据碱基互补配对原理,将DONs修饰在MSCs膜表面。利用共聚焦显微镜和流式细胞测量术分别检测单链以及DONs的上载情况,并利用活体成像系统观察DONs在小鼠肺组织中的分布。结果成功组装得到DONs。MSCs膜表面成功修饰单链,并成功杂交DONs得到DONs@MSCs。相比静脉注射DONs,DONs@MSCs在小鼠肺部的富集明显增强。结论DONs@MSCs能够用于DONs向小鼠肺组织的靶向运输,该方法为DONs后续在肺组织递送药物开发了新的策略。

关键词：间充质干细胞 DNA折纸纳米结构靶向递送

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散发型克雅病脑脊液tau蛋白的改变

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中华神经科杂志 2020年第1期53卷 25-30页

作者：黄欣莹毛晨晖沙龙泽刘彩燕董立羚周雁李洁雷聃张梦雨沈东超李芹褚姗姗许琪彭斌崔丽英高晶中国医学科学院北京协和医院神经科北京100730 北京协和医学院北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京100730 中国医学科学院神经科学中心北京100730

目的探索脑脊液标志物,尤其是总tau蛋白(T-tau)及磷酸化tau蛋白(P-tau)对Creutzfeldt-Jakob病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的诊断与鉴别诊断价值。方法按2009年Brain标准及2018年Neurology改良版标准选取2018—2019年北京协和医院脑脊液生物标志物研究队列中的散发性CJD(sporadic CJD,sCJD)患者。按2011年美国国立老化研究所与阿尔茨海默病(AD)协会标准选择年龄、性别相对匹配的AD患者以及认知功能正常的其他神经系统疾病患者作为对照病例,应用其脑脊液标本进行分组对照研究。共收集了12例sCJD患者入组,同时收集49例AD患者以及14名认知正常者入对照组。所有脑脊液标本均为腰椎穿刺时直接滴落收集,-80℃保存,由专门实验室及指定实验员进行T-tau蛋白、P-tau蛋白测定。同时收集sCJD患者影像学及脑电图资料,并按规定将sCJD病例报送中国疾病预防控制中心,检测14-3-3蛋白及相关的基因。结果通过非参数秩和检验对比3组人群脑脊液tau蛋白含量,结果显示sCJD组T-tau水平达1211(448,2227)pg/ml,AD组T-tau水平达549(314,1078)pg/ml,均显著高于对照组[127(79,192)pg/ml,U=20、73,P<0.01]。sCJD组的T-tau蛋白水平升高更明显,显著高于AD患者(U=178,P=0.0349)。在AD患者中,P-tau水平达72(58,109)pg/ml,较对照组[27(15,42)pg/ml]显著升高(U=82,P<0.01),但在sCJD患者[32(24,47)pg/ml]无明显升高。sCJD患者的T-tau/P-tau比值[29.77(20.01,54.53)]高于AD[7.45(4.79,10.43);U=87,P<0.01]。12例sCJD头颅MRI均存在"花边征",5例存在脑电图三相波改变。9例sCJD患者被上报至中国疾病防治中心,其中4例14-3-3蛋白阳性;9例朊蛋白PRNP基因均无突变,129位密码子均为M/M型,219位密码子均为E/E型。结论sCJD患者脑脊液tau蛋白、T-tau/P-tau显著增高,对于sCJD的诊断及鉴别具有一定价值。

关键词：克-亚综合征痴呆生物学标记神经变性疾病

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1日龄乳鼠心肌梗死模型制备及标准化评估

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中国比较医学杂志 2023年第5期33卷 36-43页

作者：郝琰琰布威麦热姆·热杰普向晨莹韩国玲刘维静刘俊聂宇廉虹王玉瑶山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001 新疆医科大学第一附属医院心脏外科乌鲁木齐830011 北京协和医学院中国医学科学院阜外医院国家心血管病中心心血管疾病国家重点实验室北京100037

目的优化新生1 d乳鼠急性心肌梗死手术细节,建立稳定的模型并进行标准化评估。方法出生1日龄(postnatal 1 day,P1)CD1小鼠实施三组手术操作:第一组,冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)结扎(左心耳缘下方1 mm,宽度为1 mm,... 详细信息

目的优化新生1 d乳鼠急性心肌梗死手术细节,建立稳定的模型并进行标准化评估。方法出生1日龄(postnatal 1 day,P1)CD1小鼠实施三组手术操作:第一组,冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)结扎(左心耳缘下方1 mm,宽度为1 mm,结扎深度<0.5 mm)为标准深度结扎组(standard myocardial infarction,SMI);第二组,LAD结扎位置和宽度不变,结扎深度>0.5 mm为深度结扎组(deep MI,DMI);第三组,只开胸不进行LAD结扎组为假手术组(Sham)。通过TTC、伊文思蓝-TTC染色明确LAD结扎是否成功;术后3、7、14、21、28 d通过HE染色和Masson染色评估P1小鼠LAD结扎的心肌组织损伤、纤维化和再生程度;术后28 d通过超声心动图检测小鼠心脏结构和功能变化。结果首先详细描述了P1乳鼠心肌梗死模型构建过程,通过实现LAD暴露、结扎、术后护理等过程提供了一种稳定再生和高存活率的MI程序。术后1 d通过TTC、伊文思蓝-TTC染色确定了SMI模型结扎成功,术后28 d超声心动图发现与假手术组相比,LVEF、LVFS、LVIDd和LVIDs无统计学差异,说明心脏结构和功能基本恢复正常,术后3、7、14、21、28 d Masson染色发现,SMI组心脏组织纤维化面积分别为15.67%、3.34%、2.99%、2.73%、1.11%,说明术后28 d心肌梗死面积几乎完全恢复;DMI组与SMI组相比,小鼠存活率降低了35.71%(SMI为85.71%,DMI为50%),术后28 d超声结果显示,LVEF、LVFS分别降低了(17.25±6.03)%、(11.37±4.06)%,LVIDd、LVIDs分别升高(0.46±0.15)%、(0.69±0.20)%(P<0.05),纤维化面积DMI组为SMI组6倍,说明>0.5 mm的深度结扎,心脏无法实现术后28 d的完全再生修复。结论本研究详细描述了1日龄小鼠标准急性心肌梗死模型建立过程,通过TTC、伊文思蓝-TTC染色、心脏超声,Masson染色方法评估了术后不同时间点心脏梗死面积、心脏结构、功能以及纤维化程度;同时明确>0.5 mm的深度结扎,心脏无法实现术后28 d的完全修复;本研究为建立稳定可靠的1日龄小鼠急性心肌梗死模型以及手术评估提供了参考数据。

关键词：乳鼠心肌梗死冠状动脉左前降支模型评估

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碳纤维/磁性纳米颗粒/高分子共轴纤维复合支架构建及其对成纤维细胞的作用研究

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北京生物医学工程 2022年第1期41卷 1-7页

作者：刘青桥郝博雅刘文昊童元建周航刘健许海燕中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京100005 中国医学科学院北京协和医院北京100730 北京化工大学碳纤维及功能高分子教育部重点实验室北京100029

目的构建碳纤维/磁性纳米颗粒/高分子共轴纤维复合支架,研究支架的微观形貌及理化性质,初步评价支架对成纤维细胞生长的作用。方法采用共轴静电纺丝技术制备纤维薄膜,芯层为聚乳酸,壳层为明胶,各层均含有Fe_(3)O_(4)纳米颗粒,在薄膜层... 详细信息

目的构建碳纤维/磁性纳米颗粒/高分子共轴纤维复合支架,研究支架的微观形貌及理化性质,初步评价支架对成纤维细胞生长的作用。方法采用共轴静电纺丝技术制备纤维薄膜,芯层为聚乳酸,壳层为明胶,各层均含有Fe_(3)O_(4)纳米颗粒,在薄膜层中间加入碳纤维,得到复合支架。通过扫描电子显微镜观察电纺丝纤维及碳纤维的微观结构,使用四探针测试仪、震荡样品磁强计、电子万能试验机和差示扫描量热仪检测支架的电导率、磁滞回线、弹性模量和热行为。用激光共聚焦显微镜观察成纤维细胞形貌,利用细胞增殖-毒性检测试剂盒评价细胞活性。结果电纺丝纤维呈无规缠结状态,碳纤维均匀散布在电纺丝薄膜上。Fe_(3)O_(4)纳米颗粒和碳纤维的加入均提高了复合纤维薄膜的电传导性和弹性模量,Fe_(3)O_(4)纳米颗粒还赋予复合薄膜以超顺磁响应性。细胞在支架上能正常生长,与对照组相比,复合支架上细胞的骨架蛋白F-actin表达水平显著升高,且骨架纤维更具张力。结论复合支架获得了超顺磁响应性和导电性,并可显著促进成纤维细胞的生长。

关键词：静电纺丝复合支架碳纤维磁性纳米颗粒成纤维细胞

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肝纤维化大鼠联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术模型的建立

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肝癌电子杂志 2022年第2期9卷 1-6页

作者：张军伟杨旭王云超王艳宇荀梓宇程全成方金玉丁慧如孟杰依张磊徐意瑶桑新亭赵海涛张卫光卢欣中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肝脏外科北京100730 北京大学医学部基础医学院解剖学与组织胚胎系北京100191

目的:通过四氯化碳(CCl_(4))和乙醇综合法建立联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术(associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy,ALPPS)的肝纤维化模型,探讨ALPPS应用于肝纤维化大鼠的安全性及... 详细信息

目的:通过四氯化碳(CCl_(4))和乙醇综合法建立联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术(associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy,ALPPS)的肝纤维化模型,探讨ALPPS应用于肝纤维化大鼠的安全性及可行性。方法:将40只雄性SD大鼠采用抽签法随机均分为对照组和肝纤维化组,每组各20只。对照组大鼠进行常规饲养,并采用橄榄油注射4周。肝纤维化组大鼠采用40%CCl_(4)的橄榄油溶液背部皮下注射+饮用10%乙醇4周。肝纤维化组和对照组各取5只大鼠,进行天狼猩红染色判断肝纤维化的程度。其余15只大鼠行ALPPS,并于术后即刻、第3天、第6天各取5只大鼠,取再生肝脏称重,检测肝脏增生情况,并进一步通过Ki-67免疫组织化学染色判断肝细胞再生情况。结果:通过CCl_(4)和乙醇综合法建模4周,肝纤维化组大鼠体重缓慢增加,生活基本未受影响,且肝纤维化均匀,有1只大鼠因注射CCl_(4)死亡,建模成功率为95.0%。肝纤维化组和对照组大鼠在ALPPS后均实现了剩余肝脏体积的快速增长,且两组差异无统计学意义(P>0.05)。肝纤维化组和对照组大鼠肝组织的Ki-67阳性细胞均在术后第3天明显增多,术后第6天明显减少。结论:采用CCl_(4)背部皮下注射和乙醇综合法可以快速建立肝纤维化大鼠模型,在此基础上进行ALPPS是安全可行的。本研究建立了稳定高效的肝纤维化大鼠ALPPS模型。

关键词：肝纤维化联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术四氯化碳乙醇大鼠

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