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人乳头瘤病毒16型E6E7基因协同共激活分子B7-1基因免疫诱导的特异性免疫反应

中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 301-306页

作者：许雪梅朱明昭张明策司静懿李昆宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室北京100005

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PC... 详细信息

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PCR法扩增获得fmE6E7基因插入真核表达质粒pVR1012中获得pVR1012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光组织化学法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠肌肉内进行pVR1012-fmE6E7单独免疫,或与小鼠共激活分子B7-1基因真核表达质粒(pcDNA3.1-B7-1)联合免疫。51Cr释放法分析免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)活性,间接ELISA法检测小鼠血清中E7特异性抗体。用5×105个C3细胞皮下接种C57BL/6小鼠,分析小鼠体内诱发的特异性抗瘤免疫水平。结果修饰后的E6E7基因免疫可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,小鼠B7-1基因与fmE6E7联合免疫可显著提高特异性CTL活性,并可保护33%(2/6)的小鼠免受C3肿瘤细胞的攻击,而单独fmE6E7基因免疫则不能抑制C3瘤细胞的生长,联合B7-1基因免疫对诱发的抗体水平无加强作用。结论中国山东地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的构建,B7-1基因协同免疫可提高疫苗的细胞免疫水平,利用B7-1基因作为HPV16DNA疫苗的协同因子具有重要价值。

关键词：人乳头瘤病毒 E6基因 E7基因 DNA疫苗细胞毒性T淋巴细胞

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肠神经系统脑肠肽神经元的免疫组化研究

引用

基础医学与临床 2003年第3期23卷 348-349页

作者：柳力公周吕王玲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005

近年来，应用免疫组织化学方法发现胃肠壁内的肠神经系统(enteric nervous system, ENS)可以合成和释放许多种脑肠肽，但是与控制胃肠运动有关的脑肠肽是否存在于ENS尚不清楚。我们已报道在灌流大鼠离体胃给以兴奋性脑肠肽胃动素和胃泌... 详细信息

近年来，应用免疫组织化学方法发现胃肠壁内的肠神经系统(enteric nervous system, ENS)可以合成和释放许多种脑肠肽，但是与控制胃肠运动有关的脑肠肽是否存在于ENS尚不清楚。我们已报道在灌流大鼠离体胃给以兴奋性脑肠肽胃动素和胃泌素可增强其收缩，而用抑制性脑肠肽血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptides,VIP)则引起其舒张~[1]。本研究旨在用免疫组化方法观察胃壁ENS是否有胃动素、胃泌素及VIP神经元存在，及这些脑肠肽神经元与ENS网络及 Cajal细胞的关系，这对阐明脑肠肽对胃肠运动的调控有重要意义。

关键词：肠神经系统脑肠肽神经元免疫组织化学胃肠运动

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人乳头瘤病毒16型修饰后E6E7基因免疫原性增强

引用

基础医学与临床 2003年第3期23卷 269-273页

作者：许雪梅朱明昭张明策刘晓娟宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室北京100005

利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fm... 详细信息

利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fmE6E7,瞬时转染Cos 7细胞 ,免疫荧光法检测证实其表达后 ,在C5 7BL 6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫 ,5 1Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 (cytotoxicTlymphocyte,CTL) ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应 ,与单独野生型E7基因免疫相比 ,E6E7融和基因可更好的活化CTL反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。

关键词：人乳头瘤病毒16型基因修饰 E6E7基因免疫原性增强 DNA疫苗宫颈癌癌前病变

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神经胃肠病学与胃肠动力紊乱

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基础医学与临床 2003年第z1期23卷 16-18页

作者：周吕中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005

1神经胃肠病学的定义神经胃肠病学是从神经生物学和胃肠病学派生出来的新学科,是阐述中枢神经系统(CNS)对胃肠功能的调控以及胃肠道信息向CNS传导的神经机制.`

关键词： IBS 神经胃肠病学情绪应激胃肠运动结肠动力

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促胰液素通过大鼠Cajal间质细胞促进胃平滑肌舒张

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基础医学与临床 2003年第6期23卷 612-615页

作者：周吕王礼建袁勃王玲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005

观察Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)在胃平滑肌收缩的起搏作用 ,以及促胰液素对ICC促进胃平滑肌细胞舒张的影响。采用大鼠胃体上 1/ 3起搏区及胃窦环行肌肌条以Kreb′s液恒温灌流 ,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃... 详细信息

观察Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)在胃平滑肌收缩的起搏作用 ,以及促胰液素对ICC促进胃平滑肌细胞舒张的影响。采用大鼠胃体上 1/ 3起搏区及胃窦环行肌肌条以Kreb′s液恒温灌流 ,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动。用美蓝加光照选择性损伤ICC ,观察促胰液素对胃平滑肌舒张的作用。结果显示 :(1)带有ICC的胃体起搏区和胃窦肌条记录到稳定的收缩活动 ,胃窦收缩频率和振幅较胃体起搏区高。 (2 )损伤胃环肌层ICC后 ,导致胃体起搏区和胃窦平滑肌收缩频率与振幅明显下降 ,运动几乎消失。 (3)促胰液素 0 0 6～0 5mg/L明显减少胃体起搏区和胃窦区的收缩频率和振幅 ,呈剂量依赖性减少。损伤ICC后几乎完全取消促胰液素促进胃肌的舒张作用。

关键词：促胰液素大鼠 Cajal间质细胞胃平滑肌舒张胃肠动力学

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顺式调控元件NF-κB在尼古丁诱导ICAM-1表达中的作用

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中国病理生理杂志 2003年第2期19卷 145-149页

作者：周卫辉陈祥银中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测... 详细信息

目的 :研究 5’上游序列在尼古丁诱导细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )基因转录调控中的作用。方法 :首先采用分子克隆技术构建实验所需的DNA片段 ,然后采用真核细胞转染技术将重组DNA片段与内参照质粒一起转染体外培养的内皮细胞并检测尼古丁刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果 :成功构建了 6种含有不同长度ICAM - 1基因启动子序列以及启动子中NF -κB和Sp - 1位点突变序列的荧光素酶报告基因质粒。与对照组相比尼古丁可促进含有启动子序列 - 579bp(pGL3E - 579/ +36) (P <0 .0 5) ,- 2 30bp (pGL3E - 2 30 / +36) (P<0 .0 5)以及启动子Sp- 1位点突变体 (pGL3E -Sp - 1 -MU) (P <0 .0 5)的荧光素酶基因表达 ,而下游NF -κB位点的删切重组体 (pGL3E - 1 34/ +36)和含有NF -κB位点突变体 (pGL3E -NF -κB -MU)的重组荧光素酶报告基因质粒在尼古丁诱导下与对照组相比荧光素酶表达量无明显差异。结论 :ICAM - 1基因启动子顺式作用元件下游NF -κB位点在尼古丁诱导ICAM -

关键词：烟碱 NF-κB 细胞粘着因子

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大鼠神经元凋亡相关碱性蛋白ARBP cDNA的克隆和功能

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 36-40页

作者：白氡明洪周新富陈虹黄秉仁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 南澳洲Flinders大学医学院生理系

利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广... 详细信息

利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法 ,得到凋亡相关碱性蛋白 (ARBP)的全长序列 ,进而构建了其真核表达体系以了解其功能 .ARBP的全长cDNA序列为 90 1bp ,其开放读码框架编码 10 9个氨基酸残基 .免疫组化分析表明 ,ARBP蛋白在大鼠体内有广泛的分布 .在R2L1细胞中转染ARBP反义cDNA表达载体后 ,既可以促进细胞增殖 ,又可以抑制去血清诱导的细胞凋亡 .因而 ,ARBP蛋白对神经元细胞的凋亡具有重要的调节作用 .

关键词：神经营养因子低亲和力受体 p75NTR cDNA末端快速扩增凋亡相关碱性蛋白大鼠神经元

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一种新的红细胞降压因子抗血管老化及其作用机制

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中南药学 2003年第2期1卷 71-74页

作者：王玉堂文允镒石磊庞焕马宁符莹莹中国医学科学院基础医学研究所-中国协和医科大学基础医学院生理室北京100005

目的观察红细胞源性降压因子(EDDF)对钙超载(CaO)大鼠血管的保护作用。方法选用CaO大鼠和正常大鼠,用离体动脉环灌流法观察EDDF对CaO大鼠胸主动脉、肠系膜二级阻力血管的舒张作用;用透射电镜观察EDDF对CaO大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VS... 详细信息

目的观察红细胞源性降压因子(EDDF)对钙超载(CaO)大鼠血管的保护作用。方法选用CaO大鼠和正常大鼠,用离体动脉环灌流法观察EDDF对CaO大鼠胸主动脉、肠系膜二级阻力血管的舒张作用;用透射电镜观察EDDF对CaO大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)超微结构的影响;分别用黄嘌呤氧化法和DTNB比色法观察EDDF对CaO大鼠血管组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的影响;用无机磷方法测定ED—DF对CaO大鼠血管组织中Ca2+-ATPase的影响。结果 EDDF可以明显舒张CaO大鼠胸主动脉及肠系膜二级阻力血管(P<0.05或P<0.01),可以明显改善VSMC超微结构的异常,可以增加血管组织中SOD、GSH的活性(P<0.05),可以改善血管组织中Ca2+-ATPase活性的异常(P<0.05)。结论 EDDF可以通过舒张血管平滑肌,降低血管的异常反应性,调节钙离子代谢,增加血管抗氧化的能力,改善VSMC超微结构异常,而起到抗血管老化的作用。

关键词：红细胞源性降压因子钙超载自由基血管

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2.28多潘立酮增强胃运动作用的中枢机制

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基础医学与临床 2003年第S1期23卷 57-57页

作者：周吕袁勃王礼建张春玥中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005

目的多潘立酮(Domperidone,Domp)是一种抗呕吐的促胃肠动力药,其抗呕吐作用部位的延髓最后区(Area postrema,AP)的促动力作用至今未见报导.本工作旨在研究多潘立酮对延髓最后区兴奋胃消化间期移行性复合运动(MMC)的作用及其作用途径.

关键词：多潘立酮增强胃运动延髓最后区移行性复合运动促胃肠动力药促动力作用作用途径作用部位消化间期呕吐

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2.115Cajal间质细胞介导促胰液素抑制胃平滑肌运动

引用

基础医学与临床 2003年第S1期23卷 105-105页

作者：周吕王礼建袁勃王玲柳力公中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005

目的观察大鼠ICC介导促胰液素抑制胃平滑肌细胞收缩作用.方法采用大鼠胃体上1/3起博区及胃窦环行肌8×2mm肌条在95%O2,5%CO2的恒温37℃灌流Kreb's液,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动.用美蓝(methylene blue)... 详细信息

目的观察大鼠ICC介导促胰液素抑制胃平滑肌细胞收缩作用.方法采用大鼠胃体上1/3起博区及胃窦环行肌8×2mm肌条在95%O2,5%CO2的恒温37℃灌流Kreb's液,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动.用美蓝(methylene blue)加光照破坏ICC,观察促胰液素作用,并用鼠抗c-kit抗体(ACk2)免疫组化方法对破坏平滑肌条ICC进行鉴定.

关键词：细胞介导促胰液素胃平滑肌免疫组化方法胃窦环行肌生理记录仪平滑肌细胞收缩作用力换能器机械运动大鼠胃肌条加光照输入起博抗体鉴定恒温灌流

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