检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2003年第3期20卷 220-224页

作者：刘英单广良崔超英侯淑琴卓玛次仁芩维浚才旦郑华清萧占森乌正赉周文郁邱长春中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室西藏医学院生理学教研室北京100005 西藏医学院生理学教研室北京市房山区第一医院检验科西藏自治区人民医院心血管内科

目的　研究血管紧张素 1型受体 ( angiotensin type 1receptor,AT1 R)基因 A116 6 C多态性是否与汉族、藏族和彝族原发性高血压 ( essential hypertension,EH)的遗传易感性相关联。方法　以74 8名受试者的基因组 DNA为模板 ,应用聚合... 详细信息

目的　研究血管紧张素 1型受体 ( angiotensin type 1receptor,AT1 R)基因 A116 6 C多态性是否与汉族、藏族和彝族原发性高血压 ( essential hypertension,EH)的遗传易感性相关联。方法　以74 8名受试者的基因组 DNA为模板 ,应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性方法检测 A116 6 C多态性。结果　在汉、藏、彝 3个民族正常人群中 ,A116 6等位基因的频率分别为 0 .979、0 .939和 0 .96 5 ;在藏族男性中 ,EH患者 A116 6等位基因的频率明显高于正常对照 ( P=0 .0 0 1) ,AA基因型 ( P=0 .0 0 34)是 EH的独立危险因素 ;在汉族和彝族人群中 ,EH患者和正常对照之间 A116 6 C基因型分布和等位基因频率的差异均无显著性。结论　在汉族、藏族和彝族人群中 ,AT1 R基因 A116 6是最常见的等位基因 ;A116 6 C多态性是藏族男性 EH的遗传易感因子 ,而不是汉族和彝族

关键词： ATlR基因 A1166C多态性汉族藏族彝族原发性高血压遗传易感性

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遗传性乳光牙本质致病基因DSPP的突变分析

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中华口腔医学杂志 2003年第2期38卷 99-99页

作者：吴丽更陶玉斌张晓海贾智张青松赵军天津医科大学口腔医院牙体牙髓科 300070 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

遗传性乳光牙本质又名牙本质发育不全II型(dentinogenesis imperfecta type II, DGI-II或DGII)（MIM 125490）是一种常染色体显性遗传病，表现为牙齿结构异常。我们拟就新发现的一个DGI-II家系进行牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopr... 详细信息

遗传性乳光牙本质又名牙本质发育不全II型(dentinogenesis imperfecta type II, DGI-II或DGII)（MIM 125490）是一种常染色体显性遗传病，表现为牙齿结构异常。我们拟就新发现的一个DGI-II家系进行牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)致病基因的突变检测，以证实是否有新的突变位点，从而进一步阐明该病基因型和表型间的相互关系。

关键词：遗传性乳光牙本质致病基因基因突变常染色体显性遗传外周血DNA

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优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系的初步建立和实际应用

优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系的初步建立和实...

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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛

作者：张德礼李衍达黄高升朱关福方福德清华大学信息科学技术学院生物信息学教育部重点实验室北京100084 第四军医大学基础部中国癌症研究基金会肿瘤学研究所西安 710032 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京 100005

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产犬五联和猫三联病毒活疫苗所用7种动物肾细胞系(F-81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)在700余只裸鼠进行了致癌(瘤)试验,并完成染色体变异率、克隆形成率、... 详细信息

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产犬五联和猫三联病毒活疫苗所用7种动物肾细胞系(F-81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)在700余只裸鼠进行了致癌(瘤)试验,并完成染色体变异率、克隆形成率、细胞凝集性与肿瘤形成相关性研究。试验结果证明,水貂肠炎病毒(MEV)S18和L12株为制苗用毒株,L12株为检验用强毒株。建立了MEV组织培养的方法及高效价无血清MEV抗原大批量生产和检验的新工艺。成功研制了安全有效的水貂病毒性肠炎(MVE)细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗,并大批量常年生产应用,特制高效苗免疫产生期为3～5d,免疫期与保存期均在9个月以上,免疫保护率高达100％。制定了MEV疫苗制造及检验规程。实验证明F-81和CRFK猫肾细胞系为亚二倍体核型,不具有致癌性,可安全用于疫苗生产。该疫苗既可用于发生疫情时假定健康貂的紧急预防接种,又可接种隐性感染貂和发病水貂。同时,应用敏感细胞系与钝感细胞系交替培育的方法,大幅度提高MEV增殖滴度,获得最佳制苗毒株。筛选出高变异率上皮细胞系移植于裸鼠皮下,在体内环境下快速选育出更高突变率细胞系,进而发育成MRT,确立了异类肿瘤的在体实验转化现象。提出优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系。

关键词：细小病毒疫苗交替选育生物循环

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优劣环境交替性生物循环选育的理论与技术体系和应用

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科技导报 2003年第11期21卷 11-17,10页

作者：张德礼李衍达黄高升朱关福方福德清华大学信息科学技术学院自动化系智能技术与系统国家重点实验室清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室北京100084 第四军医大学基础部病理学教研室中国癌症研究基金会肿瘤学研究所西安710032 中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京710032

不同环境条件下的交替选育作用[1-6]虽已有成功的应用,但在恶劣环境下筛选后再回归到同类优越环境下培育,并反复循环选育的优良生物品种,特别是选育强毒高免疫原性的超高增殖病毒株,经体内外环境交替培育获得高变异率肿瘤细胞系并实现... 详细信息

不同环境条件下的交替选育作用[1-6]虽已有成功的应用,但在恶劣环境下筛选后再回归到同类优越环境下培育,并反复循环选育的优良生物品种,特别是选育强毒高免疫原性的超高增殖病毒株,经体内外环境交替培育获得高变异率肿瘤细胞系并实现异类肿瘤在体实验转化的现象,尚未见报道.

关键词：病毒疫苗交替选育恶性横纹肌样瘤制备水貂细小病毒致癌安全性

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谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法比较、评价

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中华糖尿病杂志 2003年第2期 139-139页

谷胱甘肽是一种非常特殊的氨基酸衍生物,广泛存在于动、植物细胞,在生物体内有许多重要的生理作用.人类组织中GSH的浓度的研究还不广泛.谷胱甘肽的测定有许多方法,目前还没有一种既快速、稳定、特异,又十分灵敏、经济的测定方法.本文对... 详细信息

谷胱甘肽是一种非常特殊的氨基酸衍生物,广泛存在于动、植物细胞,在生物体内有许多重要的生理作用.人类组织中GSH的浓度的研究还不广泛.谷胱甘肽的测定有许多方法,目前还没有一种既快速、稳定、特异,又十分灵敏、经济的测定方法.本文对谷胱甘肽的生理意义及其各种测定方法作一综述.

关键词：谷胱甘肽生理意义测定方法

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从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

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2003年中国科协“生物信息学与进化计算”青年科学家论坛

作者：张德礼李衍达黄高升方福德季梁朱关福北京大学医学部公共卫生学院营养与食品卫生学系，北京大学人类疾病基因研究中心，北京，100083 清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清华大学信息科学技术学院自动化系智能技术与系统国家重点实验室，北京，100084 第四军医大学基础部病理学教研室，西京医院病理科，中国癌症研究基金会肿瘤研究所，西安，710032 中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，710032

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物... 详细信息

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环的选育规律，提出了相关选育机制与方法，初步建立了这种选育作用的理论与技术体系并得到实际应用，它正是联系高效水貂细小病毒疫苗研制、痘苗病毒重组质粒转染技术创新、细胞系致癌毒理学安全性评价、异类肿瘤在体实验转化现象确立与横纹肌样瘤起源之谜初步揭示的纽带与桥梁，具有广泛的科学指导和实用意义。实际应用：(1)安全高效的水貂肠炎病毒细胞培养灭活疫苗的首次研制成功和长期广泛应用;(2)在对痘苗病毒重组质粒转染技术的探索性研究中首次简化了基因转染技术;(3)恶性横纹肌样瘤(MRT)在模型动物体内的首次发现和成功复制，为阐明其起源之谜提供了机会。从染色体遗传变异角度初步阐明了MRT的发生、发展规律，从比较医学角度揭示了MRT的组织细胞起源;(4)解了传代细胞(CCL)致癌毒理实验的难题，揭示了遗传变异率与致癌(瘤)的关系。在基因识别新方法与功能基因分离方面取得重要进展。建立了从计算机软件分析、人工干预分析及与实验生物学相结合角度来发现人类新基因的方法，并证明它是加速基因克隆和鉴定的一条有效途径。电子克隆百余人类新基因(还用合作开发的软件计算机识别800个人类新基因候选对象)，部分基因编码序列已被实验证实和引用，其中几个新克隆基因已在动物实验中显示出明显的生物学功能活性。发现了美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因组注释项目公布的人类基因模式参考序列(REFSEQ)存在各种类型的多种/处错误，这一结果提示应慎重使用NCBI的REFSEQ数据库。

关键词：病毒细胞生物循环基因识别遗传进化

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反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因低水平表达的机制初探

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生物化学与生物物理学报 2002年第6期34卷 763-768页

作者：董文吉祖振响刘德培郝德龙郭志晨梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

以人 β 珠蛋白基因簇基因座控制区DNaseI高敏位点 2和高敏位点 3组合的微小基因座控制区作为调控元件 ,以 374bp第二内含子部分缺失的 2 .0kbβ 珠蛋白基因作为结构基因的反转录病毒重组体 ,通过建立 ψ 2产病毒细胞系和瞬时转染双向... 详细信息

以人 β 珠蛋白基因簇基因座控制区DNaseI高敏位点 2和高敏位点 3组合的微小基因座控制区作为调控元件 ,以 374bp第二内含子部分缺失的 2 .0kbβ 珠蛋白基因作为结构基因的反转录病毒重组体 ,通过建立 ψ 2产病毒细胞系和瞬时转染双向性包装细胞系 ψ A两种方法获得重组病毒。感染鼠红白血病细胞后 ,Southern杂交鉴定前病毒整合完整性 ,用RNase保护实验检测人 β 珠蛋白基因的表达 ,通过PCR产物测序确定前病毒结构。结果表明 ,在瞬时转染 ψ A来源的重组病毒转导和质粒转染的鼠红白血病细胞中 ,人 β 珠蛋白基因的表达水平分别达到内源性鼠α 基因表达的 (5 2 .4± 11.2 ) % (n =12 )和 (73.8± 14 .3) % (n =12 ,未确定整合拷贝数 ) ;而在 ψ 2产病毒细胞系来源的病毒转导的细胞中 ,表达水平低于 3% ,前病毒序列分析发现其高敏位点 2中出现一个点突变 ,这可能是人β 珠蛋白基因呈低水平表达的一个原因。

关键词： β-地中海贫血基因治疗反转录病毒载体位置效应 RNA干扰

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应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 307-310页

作者：张艳丽陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合... 详细信息

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白 .利用此法筛选到人Flt3配体 (hFL)的甲醇酵母高表达转化子 ,液体诱导表达量约 2 0mg L .ELISA结果证明 ,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关 .蛋白质印迹结果显示 ,培养上清在 2 5ku处有明显杂交条带 ,而对照组杂交呈阴性 ,且表达量随诱导天数增加 .原位双膜法是一种良好的筛选方法 ,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子 .

关键词：原位双膜法人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子表达巴斯德毕赤酵母

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Effect of trans-acting factor on rat glutathione S-transferase P1 gene transcription regulation in tumor cells

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Chinese Medical Journal 2002年第1期115卷 103-106,152页

作者：刘东远廖名湘左瑾方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

Objective To investigate the effect of trans-acting factor(s) on rat glutathione S-transferase P1 gene (rGSTP1) transcription regulation in tumor *** The binding of trans-acting factor(s) to two enhancers of the rGSTP1 gene, glutathione S-transferase P enhancer Ⅰ (GPEI) and glutathione S-transferase P enhancer Ⅱ-1 (GPEⅡ-1), was identified by an electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The molecular weight of trans-acting factor was measured in a UV cross-linking experiment. Results Trans-acting factor interacting with the core sequence of GPEI (cGPEI) were found in human cervical adenocarcinoma cell line (HeLa) and rat hepatoma cell line (CBRH7919). These proteins were not expressed in normal rat liver. Although specific binding proteins that bound to GPEⅡ-1 were detected in all three cell types, a 64 kDa binding protein that exists in HeLa and CBRH7919 cells was absent in normal rat liver. Conclusion cGPEI, GPEII specific binding proteins expressed in HeLa and CBRH7919 cells may play an important role in the high transcriptional level of the rGSTP1 gene in tumor cells.

关键词： gene regulation · glutathione S-transferase P1 · trans-acting factor

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High-level expression of foreign genes via multiple joined operons and a new concept regarding the restricted constant of total amount of plasmid DNA per Escherichia coli cell

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Chinese Medical Journal 2002年第12期115卷 1785-1789,145-146页

作者：陈伟京洪梅李丹卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

OBJECTIVE: To examine the feasibility of linking operons in tandem to enhance expression of heterologous genes in Escherichia coli (E. coli) and clarify the potential control mechanism of the total plasmid DNA amount in each host cell. METHODS: Two series of expression plasmids, CW11 and CW12, containing 1 to 4 and 1 to 3 heterologous gene operon(s) respectively, were constructed. The molecular size of the CW11 series varied from 5.47 kb to 12.26 kb in 2.25 kb increments. The CW12 series varied from 5.40 kb to 9.72 kb in 2.16 kb increments. The expression level of desired protein was assayed by SDS-PAGE and laser density scanning. Plasmid copy number was determined by incorporation with (3)H-thymidine ((3)H-TdR). RESULTS: No influence of the tandem-joined operons on host growth and plasmid stability was observed. Upon induction, the desired protein accumulations in the CW11 series were 44.9% +/- 3.9%, 51.3% +/- 4.1%, 54.8% +/- 3.3% and 58.2% +/- 3.4% of total cell protein. In the CW12 series, the yields were 32.2% +/- 5.0%, 42.8% +/- 4.1% and 46.9% +/- 4.0% of total cell protein. As size increased, the plasmid copy number decreased, but target gene dosage increased significantly (P 0.05) and restricted to some extent. CONCLUSIONS: Increasing the target gene dosage by tandem linking of operons may enhance the expression level of a desired protein. Although the size (kb) and the copy number of each plasmid are negatively interrelated, for certain plasmids in each series, their total DNA amount per cell seems to be a restricted constant for specific E. coli strains under identical incubation condition.

关键词： Operon DNA Escherichia coli Gene Dosage Plasmids Research Support, Non-U.S. Gov't

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