检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2014年第6期30卷 982-989页

作者：王小蓉李逊斗贾露露高友鹤中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医科大学基础医学院生理与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同... 详细信息

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别.结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同.因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存.

关键词：尿蛋白质保存硝酸纤维素膜蛋白质组学生物样本保存

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重性抑郁障碍易感基因EHD3与疾病认知功能相关

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中国医学科学院学报 2014年第3期36卷 227-233页

作者：王乐石翠娟许琪中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 天津医科大学总医院神经病理室天津市神经病学研究所天津市神经损伤变异与再生重点实验室教育部中枢神经创伤修复与再生重点实验室天津300052

目的探讨EHD3基因与重性抑郁障碍(MDD)患者认知功能的相关性。方法以47例MDD患者与40例正常对照者为研究对象,分析其认知功能的差异,然后将MDD患者的各项量表得分作为数量性状,采用UNPHASED软件的数量性状模块,分析认知功能与EHD3基因... 详细信息

目的探讨EHD3基因与重性抑郁障碍(MDD)患者认知功能的相关性。方法以47例MDD患者与40例正常对照者为研究对象,分析其认知功能的差异,然后将MDD患者的各项量表得分作为数量性状,采用UNPHASED软件的数量性状模块,分析认知功能与EHD3基因多态性的相关性。结果 MDD组WAIS-RC和WMS-R量表的各项评分均显著低于正常对照组(P均<0.05)。EHD3基因的rs3769621等位基因及基因型分别与WAIS-RC图形拼凑原始分(χ2=10.561,P=0.001;χ2=7.922,P=0.019)和图形拼凑量表分(χ2=12.627,P=0.00038;χ2=11.775,P=0.0027),以及WMS-R心智(1-100)原始分(χ2=8.762,P=0.003;χ2=17.399,P=0.00016)和心智(1-100)量表分(χ2=10.356,P=0.001;χ2=14.958,P=0.00056)显著相关;经过Bonferroni法校正后,上述结果差异仍显著。结论在中国北方汉族人群中,EHD3基因可能与MDD认知功能内表型相关。

关键词：重性抑郁障碍认知功能 EHD3基因

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新疆维吾尔族人自然长寿与HLA-DRB,ACE,ApoE基因多态性分析

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北京医学 2014年第7期36卷 525-529页

作者：热米拉.巴力吐尔洪.吐尔逊陈凤辉程祖亨邱长春玛依拉.吾甫尔新疆医科大学第一附属医院综合心脏内科 830054 新疆医科大学第一附属医院神经内科 830054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因、血管紧张素转换酶（An-giotensin-Coverting Enzyme, ACE）基因及载脂蛋白E（Apolipoprotein E, ApoE）基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系。方法将研究对象根据... 详细信息

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因、血管紧张素转换酶（An-giotensin-Coverting Enzyme, ACE）基因及载脂蛋白E（Apolipoprotein E, ApoE）基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系。方法将研究对象根据年龄分为长寿组和老年组，同时选择同一地区无血缘关系已自然死亡（61-73岁）者为对照组。分别应用聚合酶链反应-序列特异引物法（PCR-SSP），单链构象多态性（SSCP）分析和直接测序技术对长寿组、老年组、对照组进行基因分型。结果长寿组HLA-DR1，DR6（14）基因频率较对照组升高（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；长寿组HLA-DR9基因频率较对照组降低（P〈0.05），较老年组显著降低（P〈0.01）；长寿组HLA-DR51基因频率较老年组降低（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义。在ACE基因分析中，长寿组D/D基因型频率较对照组显著升高（P〈0.01），而较老年组升高（P〈0.05），另外，长寿组D等位基因频率也高于对照组（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；另外，3组间DI，Ⅱ基因型比较未见明显差异。 ApoE基因分析中，长寿组ε3/3基因型频率较老年组升高（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义；长寿组ε4/3基因型频率较对照组明显降低（P〈0.001），较老年组也显著降低（P〈0.01）；其余基因型比较差异无统计学意义。结论 HLA-DRB基因的DR1,DR6（14）等位基因，ApoE的ε4/3基因型及ACE基因的DD基因型，D等位基因对长寿可能有保护作用，是长寿有利基因；HLA-DRB基因的DR9基因型可能不利于长寿，是长寿的危险因素。

关键词：人类白细胞抗原血管紧张素转换酶载脂蛋白E 新疆维吾尔族自然长寿

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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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Kir4.1和AQP4基因多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 752-756页

作者：牛凤鹤林华李景云朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学宣武医院神经内科北京100053

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。... 详细信息

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。结果共选择Kir4.1基因上的5个SNP位点以及AQP4基因上的7个SNP位点,在病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,这些多态性位点与颞叶癫痫之间并无相关性,基因单倍型与疾病的关联无显著性的差异,结合临床表型进行分层分析,亦未有显著差异。结论在中国汉族人群中,Kir4.1和AQP4基因多态性在颞叶癫痫的发生和发展过程中无重要作用。

关键词：颞叶癫痫 Kir4 l AQP4 单核苷酸多态性

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DNA甲基化介导的microRNA-33b下调及其在胃癌中的作用

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基础医学与临床 2013年第10期33卷 1269-1274页

作者：阴海鑫王斌王芳余佳赵浩亮山西医科大学普外科山西太原030032 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学附属山西医学科学院山西大医院普外科山西太原030032

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌... 详细信息

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌临床病理特征间的关系,随后使用组织基因组DNA快速提取试剂盒提取胃癌组织及正常人血液基因组DNA,经重亚硫酸氢盐处理后,甲基化特异性PCR法检测其上游CpG岛的甲基化程度,PCR产物经琼脂糖凝胶检测,并进行统计分析。结果 miR-33b表达下调与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无脉管转移、肿瘤分型无相关性,但与肿瘤是否发生远处转移具有相关性(P<0.05),且其低表达与上游CpG岛的甲基化沉默修饰密切相关(P<0.05)。结论 miR-33b的表达在胃癌中受甲基化调控且与胃癌远处转移相关。

关键词： miR-33b 胃癌甲基化

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人载脂蛋白AV原核表达载体的构建与纯化研究

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心肺血管病杂志 2013年第4期32卷 499-502页

作者：李国平隋靖喆毕楠满永王抒陈保生黎健卫生部北京医院卫生部-北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所-中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白。方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段。PCR产物和原核... 详细信息

目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白。方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段。PCR产物和原核表达载体pET30b经核酸内切酶双切后连接,连接产物经转化至大肠杆菌感受态细胞Top10,挑选克隆测序。重组质粒pET30b-apoAV转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达条件,重组的apoAV经镍离子螯合树脂纯化获得。结果:经测序证实人apoAV目的基因成功克隆入pET30b原核表达载体中,经过IPTG诱导有约40KD的特异性蛋白表达,与预期大小一致。该蛋白在IPTG诱导下的最佳表达时间为5h,最佳浓度在31.3μmol/L。纯化的apoAV纯度在95%以上,产率约为15 mg/L。结论:成功构建人apoAV的原核表达载体,实现了高效表达和纯化,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。

关键词：载脂蛋白AV 原核表达蛋白纯化

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接受高效抗逆转录病毒治疗的艾滋病患者γδT细胞表型和功能分析

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中国病毒病杂志 2013年第4期3卷 255-259页

作者：李珍焦艳梅崔莲仙何维吴昊首都医科大学附属北京佑安医院感染中心北京市艾滋病重点实验室北京市艾滋病临床研究中心北京100069 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)的艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者外周静脉血中γδT细胞表型和功能的变化。方法接受HAART治疗的患者(n=36)来自首都医科大学附属北京佑安医院2005-2012年接受免费抗病毒治疗队列,健康对照者(n=17)来源于实验室招募的健康志愿者。分离两组研究对象外周血单个核细胞(pe-ripheral blood mononuclear cells,PBMCs)后,采用流式细胞表面染色法检测外周静脉血中γδT细胞及其亚型的比例和γδT细胞表面活化分子(CD38和HLA-DR)的表达;采用流式细胞内染色法(intracellularstaining,ICS)检测γδT细胞干扰素(interferon,IFN)-γ和白细胞介素(interleukin,IL)-17的分泌。结果与健康对照者(healthy controls,HCs)比较,接受HAART治疗患者外周血Vδ2+γδT细胞的比例显著下降[(18.33%±20.20%)vs(59.54%±30.87%),P<0.01],而Vδ1+γδT细胞的比例明显增加[(38.35%±23.99%)vs(16.63%±17.69%),P<0.01]。接受HAART治疗的患者γδT细胞表面CD38和HLA-DR分子的表达显著增加(P<0.01)。然而,与健康对照者比较,接受HAART治疗患者分泌IFN-γ和分泌IL-17的γδT细胞的数量差异无统计学意义。结论单纯HAART治疗既不能增加Vδ2+γδT细胞的数量和γδT细胞细胞因子分泌的能力,也不能降低艾滋病患者γδT细胞的活化水平。

关键词： γδT细胞艾滋病高效抗逆转录病毒治疗(HAART) 免疫活化

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MicroRNA-125b在胃癌组织中的高表达并促进胃癌细胞系HGC-27和MGC-803的增殖

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基础医学与临床 2012年第5期32卷 500-504页

作者：阎文婷蒋凤兵王芳余佳冯涛重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨microRNA-125b(miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mi... 详细信息

目的探讨microRNA-125b(miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mimic转染胃癌细胞系HGC-27和MGC-803,确认过表达成功后,分别使用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测过表达miR-125b对细胞增殖和凋亡的影响。结果证实在胃癌患者组织中miR-125b的表达水平显著高于癌旁对照组(P<0.01)。在胃癌细胞系HGC-27和MGC-803中过表达miR-125b后,细胞增殖明显增加:转染72 h,HGC-27(scramble组:1.632±0.09,mimic组:2.473±0.08),MGC-803(scramble组:1.603±0.05,mimic组:2.554±0.07)),同时细胞凋亡也受到抑制。结论 miR-125b可能作为癌基因在胃癌中发挥作用,并对细胞增殖和凋亡具有显著影响。

关键词： microRNA-125b 胃癌细胞增殖细胞凋亡

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AIDS患者γδ T细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4^+ T细胞

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 778-782页

作者：李珍焦艳梅崔莲仙吴昊何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+... 详细信息

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+T细胞,加入植物血凝素(PHA)和白细胞介素-2(IL-2)共同培养,建立自体HIV感染的CD4+T细胞模型。流式细胞术检测HIV-P24+CD4+T细胞的比例。乳酸脱氢酶(LDH)法测定γδT细胞的细胞毒作用。结果培养到第10天时,HIV-P24+CD4+T细胞的比例达到最高值。AIDS患者的γδT细胞不仅能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞(细胞溶解率为71.1±97),而且对HIV也有一定的杀伤作用(细胞溶解率为24.2±18.2)。而健康志愿者γδT细胞对自体CD4+T细胞没有杀伤作用(细胞溶解率为4.3±10.1)。结论 AIDS患者γδT细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞,为采用γδT细胞过继免疫治疗AIDS提供了依据。

关键词： γδT细胞人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征

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