检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 259-263页

作者：丁克越张以琳陈立宏沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对我国承担的人类基因组测序项目中的3p24-p25478kb完全基因组序列进行注释。方法采用从头预测、数据库相似性比较和全长或部分mRNA序列与基因组序列的比对等手段,识别基因组序列中的编码蛋白质的基因,并采用EMBOSS软件包分析基因... 详细信息

目的对我国承担的人类基因组测序项目中的3p24-p25478kb完全基因组序列进行注释。方法采用从头预测、数据库相似性比较和全长或部分mRNA序列与基因组序列的比对等手段,识别基因组序列中的编码蛋白质的基因,并采用EMBOSS软件包分析基因组序列的组分特征。结果识别出该区域中的两个编码蛋白质的已知基因,即SLC6A1和SLC6A11(其中后者在基因组草图序列中未被定位);对这段基因组序列中组分特征预测分析结果显示,该基因组序列的平均GC含量为47%,并存在3个假想的CpG岛,其中两个CpG岛分别位于130685～131516bp及307090～307870bp,另一个位于415585～416308bp。结论采用上述方法对基因组序列3p24-p25478kb进行了正确的注释,揭示了基因组序列中的有关的基因结构、GC含量、CpG岛等信息。

关键词：人类基因组计划基因组注释 3p24-p25基因组基因结构 GC含量 CpG岛

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人δ珠蛋白基因启动子区CAAT盒C→T突变对其转录的影响

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中国医学科学院学报 2002年第2期24卷 140-143页

作者：姚杰陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对其转录调控的影响。方法将人δ基因启动子区-64位C突变为T后,克隆于去除强启动子CMV的真核基因表达载体pcDNA3.1穴-雪/Myc-HisA中,分别将含野生型CAAT盒和突变型CAAT盒的人δ基因转染... 详细信息

目的研究人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对其转录调控的影响。方法将人δ基因启动子区-64位C突变为T后,克隆于去除强启动子CMV的真核基因表达载体pcDNA3.1穴-雪/Myc-HisA中,分别将含野生型CAAT盒和突变型CAAT盒的人δ基因转染鼠红白血病(MEL)细胞,经DMSO诱导细胞分化,利用半定量RT-PCR技术检测人δ基因转录的变化。结果δ基因启动子区CAAT盒C→T点突变后,含突变型CAAT盒的人δ基因的转录水平是含野生型CAAT盒的2.2倍。结论在mRNA水平直接证实δ基因启动子区CAAT盒的缺陷是影响其转录的重要原因。

关键词：人δ珠蛋白基因 CAAT盒转录调节

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人肿瘤坏死因子样蛋白全长cDNA的克隆及原核表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 246-249页

作者：胡晓燕周严代芸陈建萌张斌彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及... 详细信息

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及其存在的结构域和基序。以Northern印迹分析检测TNFLP的mRNA的组织分布,并用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)原核表达系统分段表达TNFLP的N端和C端蛋白。结果TNFLP全长共2112bp,编码一208个氨基酸的蛋白。亲、疏水性分析显示,TNFLP有两个疏水区,且C端95个氨基酸与小鼠的TNF-α一致性为42%。基序分析显示,TNFLP的C端有一内质网膜定位信号-TYKRL,与TNF-α完全一致。人的TNFLP位于人的16号染色体上。Northern杂交显示,TNFLP在心、脑和胰腺中呈高表达,可见一个转录本。用GST原核表达系统,分段表达了TNFLP的N端和C端。结论初步分析了TNFLP的组织表达谱,并分段表达了其N端和C端,为进一步研究其功能提供了条件。

关键词：肿瘤坏死因子 -α 肿瘤坏死因子样蛋白原核表达基因克隆

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人Jurkat细胞GAGA样元件结合蛋白cDNA的克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 269-271页

作者：莫志成陆瑜高超吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨人Jurkat细胞中是否存在与GAGA样元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系,在HTLV-1转化的Jurkat细胞cDNA文库中筛选与GAGA样元件相互作用的蛋白;提取人Jurkat细胞总RNA,应用反转录反应标记cDNA探针,与候选的阳性克隆... 详细信息

目的探讨人Jurkat细胞中是否存在与GAGA样元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系,在HTLV-1转化的Jurkat细胞cDNA文库中筛选与GAGA样元件相互作用的蛋白;提取人Jurkat细胞总RNA,应用反转录反应标记cDNA探针,与候选的阳性克隆杂交。结果共获得9个阳性克隆,其中6个阳性克隆的插入片段可以与cDNA探针杂交。结论在人Jurkat细胞中有与GAGA样元件相关的结合蛋白。

关键词： Jurkat细胞酵母单杂交体系 GAGA元件基因调控

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DR4死亡结构域结合蛋白的初步研究

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 310-314页

作者：李晓玲刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。... 详细信息

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。以DNA自动分析仪测定核苷酸序列,采用计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。并用免疫共沉淀方法分析人类甲酰肽受体1(formylpeptidereceptor-like1,FPRL1)在哺乳动物细胞内是否与DR4CD(thecytoplsmicdomainofDR4)特异性地结合。结果获得了两个阳性克隆pADB1和pADB2。DNA序列分析及同源性比较表明,pADB1的插入片段与人FPRL1的mRNA序列具有97%的同源性。pADB2的插入片段与GeneBank中的已知序列无同源性。免疫共沉淀结果表明FPRL1在哺乳动物细胞内可与DR4CD特异性地结合。结论FPRL1可与DR4的死亡结构域特异性结合,推测FPRL1与DR4的结合可能在DR4介导的细胞凋亡信号传导途径中发挥一定的作用。

关键词：类甲酰肽受体1 死亡受体4 TRAIL 酵母双杂交系统

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人M961全长cDNA及剪接异构体的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 254-258页

作者：张斌汪俊华陶波李光涛周严彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂... 详细信息

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。

关键词：剪接异构体 M96基因 M961基因 M962基因 PHD锌指结构基因克隆基因分离白血病

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TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 238-241页

作者：刘彦信胡欢开郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用... 详细信息

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。

关键词：白血病细胞凋亡肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体白血病细胞差异表达基因

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高密度脂蛋白诱导内皮细胞系差异表达基因的研究

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中华医学杂志 2002年第13期82卷 921-923页

作者：张文成陈保生曾武威白玲薛红吴纲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表... 详细信息

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表达明显差异的cDNA。对差异基因进行序列测定和同源性比较 ,Northern印迹分析部分差异基因的表达情况。结果　HDL诱导ECV 30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA ,差异表达明显的已知基因有 9个 ,其中上调表达的基因包括STE2 0样激酶、PBK1蛋白、转谷氨酰胺酶、肌球蛋白轻链、apobec 1结合蛋白、DAP蛋白 ;下调表达的基因有核糖体蛋白L7a (RPL7A)、线粒体外膜电压依赖性阴离子通道蛋白基因、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶。差异表达明显的未知基因 4个。Northern印迹证实 ,转谷氨酰胺酶基因表达上调5 0 % ,apobec 1结合蛋白基因表达上调 70 %。结论　HDL可诱导ECV 30 4细胞转谷氨酰胺酶、apobec 1结合蛋白表达水平上调。这两个基因表达水平的升高可能与HDL抗动脉粥样硬化作用相关。

关键词：高密度脂蛋白逆转录聚合酶链反应 HDL 基因表达动脉粥样硬化

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阿霉素肾病大鼠肌肉和静脉注射心钠素基因利尿作用的比较研究

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生物工程学报 2002年第6期18卷 671-675页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发... 详细信息

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现 ,人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这 2种途径导入后 ,均可使阿霉素肾病动物的尿量体重比明显增加 ,有效利尿作用时间大于 15d。试验期间 ,实验组肾病动物的体重明显增长 ,血浆中的心钠素浓度在基因转移 5d后明显升高 ,但动物尿中的K+和Na+浓度无明显变化。以上结果说明 ,心钠素基因经肌肉和静脉 2种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能。

关键词：阿霉素肾病大鼠肌肉注射静脉注射心钠素基因利尿作用比较研究基因治疗逆转录病毒载体

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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 321-324页

作者：李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 详细信息

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。

关键词：基因表达热休克基因内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 Jurkat细胞

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