检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2025年第1期35卷 30-40页

作者：侯婧涵段素琴徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华陈丽雄刘权赵远杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和PBS方式造模。监测记录15 d内临床指标、生理指标、排毒情况,并在感染后第7天(D7)选取动物进行组织病理学和病毒抗原与核酸检测。结果单独和混合感染的实验组地鼠均出现类似人类手足口病的临床症状;WBC、NEUT、LYMPH结果提示病毒感染血象特征;咽拭子、粪便、血液和组织中均能检测到两种病毒核酸;粪便样品中能分离出两种病毒;脑等组织出现病理损伤表现及CVA6和CVB1病毒抗原蛋白和核酸的阳性共定位。结论经鼻腔同时滴注CVA6和CVB1混合液能够成功感染叙利亚金黄地鼠,复制出类似人类手足口病的疱疹、造成病毒性心肌炎和脑炎病理损伤等,结果显示混合感染组相较于单独感染组病情更为严重,表现为临床症状加重、病毒复制增高以及组织病理损伤明显。本研究为开展人类肠道病毒混合感染基础和临床研究提供一定借鉴和参考。

关键词：叙利亚金黄地鼠混合感染动物模型柯萨奇病毒A组6型柯萨奇病毒B组1型手足口病

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野生恒河猴肠道病毒病原谱分析

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实验动物科学 2025年第1期42卷 12-17页

作者：侯婧涵徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢... 详细信息

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢式PCR检测,对阳性样本进行测序分析,以确认病毒种类。结果恒河猴肠道病毒携带率为11%(24/218),其中,婴猴组携带率为7.5%(4/53);青少年猴组携带率为3.5%(2/57);成年猴组携带率为16.7%(9/54);老年猴组携带率为16.7%(9/54)。结论经肠道病毒基因分型确定该肠道病毒病原谱主要为肠道病毒J组、肠道病毒sp.组和肠道病毒A组;经系统发育分析发现218只野生恒河猴肠道病毒病原谱与EVJ、EVA92、EVA119、SV19和SV46等亲缘关系较近。

关键词：肠道病毒野生恒河猴年龄性别系统发育

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柯萨奇病毒B组4型TaqMan探针一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2025年第2期38卷 167-171页

作者：郭伟陈俊薇刘煜菡张名冯昌增马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南大学生命科学学院云南昆明650500

目的建立柯萨奇病毒B组4型(Ccoxsackievirus B4,CVB4)Taq Man探针一步法实时荧光定量PCR(real-time fluo-rescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测方法,并进行验证,以期为CVB4的快速定量检测提供可靠方法。方法选择CVB4的VP1序列中较保守部分,设计引物和探针;经体外转录获得阳性RNA标准品,绘制标准曲线,建立CVB4的Taq Man探针一步法RT-q PCR法。验证方法的灵敏度、线性范围、重复性、特异性。应用建立的方法检测16份临床样本。结果方法的检测灵敏度为10~3copies/μL;阳性RNA标准品在10^(3)~10^(10)copies/μL范围内,与荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.742 x+48.651,R^(2)为0.998;重复性验证CV<2%;与柯萨奇病毒B组其他血清型CVB2、CVB3、CVB5、CVB6,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71),柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A,CVA)8、10、12型(CVA8、CVA10、CVA12),埃可病毒11型(Echovirus 11,E11)均无交叉反应。16份临床样本中12份为CVB4阳性。结论建立的Taq Man探针一步法RT-q PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,可用于CVB4临床样品的检测。

关键词：柯萨奇病毒B组4型 TaqMan探针实时荧光定量PCR

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云南省6株柯萨奇A组16型病毒的全基因组分析

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热带医学杂志 2025年第3期 337-342+437页

作者：楚昭阳陈俊薇冯昌增刘煜菡张名李丽马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南大学生命科学学院昆明市妇幼保健院检验科

目的分析2022年云南省6株柯萨奇A组16型病毒（CVA16）分离株的全基因组特征，为CVA16的分子流行病学研究及相关疾病的防控提供参考数据。方法 2022年从昆明市妇幼保健院的200份手足口病患儿临床粪便样品中共分离到22株CVA16毒株，将22... 详细信息

目的分析2022年云南省6株柯萨奇A组16型病毒（CVA16）分离株的全基因组特征，为CVA16的分子流行病学研究及相关疾病的防控提供参考数据。方法 2022年从昆明市妇幼保健院的200份手足口病患儿临床粪便样品中共分离到22株CVA16毒株，将22株CVA16的病毒蛋白1(VP1)区域进行扩增及测序，发现该22株CVA16的VP1基因的同源性很高，均达到95%以上，随机选择6株进行全基因组扩增和测序。通过MEGA7.0、DNAStar7.1和SimPlot3.5.1等软件对全基因组序列进行分析。结果 6株分离株分别命名为167/YN/CHN/2022、174/YN/CHN/2022、183/YN/CHN/2022、217/YN/CHN/2022、218/YN/CHN/2022和231/YN/CHN/2022，经对扩增的部分VP1进行鉴定，均为CVA16。6条CVA16基因序列已上传至GenBank数据库，基因登录号为PP532683-PP532688。6株CVA16分离株的全基因组长为7 358～7 405 nt,5’UTR区均为741 nt,3’UTR区长为35～82 nt,5’UTR区和3’UTR区之间是一个长为6 582 nt的开放阅读框，与其他CVA16相比未见核苷酸插入与缺失，编码区编码一个含有2 194个氨基酸残基的多聚蛋白。根据VP1系统进化分析，6株CVA16分离株均位于B1a进化分支。该6株分离株之间的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%～98.6%和97.9%～99.3%，与中国大陆其他流行株的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为86.5%～97.8%和97.5%～99.5%。与其原型株相比，6株毒株共发生44处氨基酸变异，且在BC环和EF环发生氨基酸置换。重组分析显示，该6株CVA16分离株重组信号较弱，可能未发生新的重组。结论从2022年云南省手足口病患儿临床样本中分离到的6株CVA16均属于B1基因亚型的B1a分支。

关键词：柯萨奇A组16型病毒全基因组序列分析

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4种人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

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中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 89-95页

作者：赵永美孟明耀李金美宋泽鑫周艳杨武李鸿钧中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500 昆明医科大学附属延安医院云南省肿瘤免疫防治重点实验室云南昆明650051

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilica... 详细信息

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs),镜下观察细胞形态,并检测细胞增殖能力、特异性表面抗原表达水平及多向分化潜能。分别采用超速离心法、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀法、蔗糖沉淀法和Total Exosome Isolation试剂盒法(简称试剂盒法)4种方法提取HUC-MSCs培养上清液中的hucMSCs-Exos,透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体浓度及颗粒大小,BCA法检测外泌体总蛋白浓度,Western blot法检测外泌体特异性标志蛋白水平。结果传代培养的HUC-MSCs于镜下观察呈长梭形,漩涡贴壁生长,且细胞增殖速度较快;高表达MSCs特异性表面抗原CD73和CD90,极低表达造血干细胞表面标记物CD34和CD45;具有向脂肪及成骨分化的潜能。4种方法均可提取获得HUCMSCs-Exos,除试剂盒法外,其他3种方法提取的外泌体均呈茶托样双层膜结构且边界清晰;试剂盒法提取外泌体的总蛋白浓度及颗粒浓度均明显高于其他3种方法(F=35.18,P均<0.01);4种方法提取的外泌体均能表达特异性标志物CD63和CD81,除蔗糖沉淀法提取外泌体不表达CD9外,其他方法提取的外泌体均表达CD9。结论4种方法均能提取获得外泌体,其中超速离心法提取外泌体质量稳定;试剂盒法提取外泌体的产量较高,且更省时、更便捷;PEG沉淀法及蔗糖沉淀法提取外泌体的纯度更高。可根据不同的生产需求,选择合适的外泌体分离技术。

关键词：外泌体提取人脐带间充质干细胞

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EV-A71和CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞诱导差异性IFN-I产生通路相关基因表达的研究

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病毒学报 2016年第6期32卷 694-701页

作者：宋杰胡雅洁李嘉祺王晶晶郭磊郑惠文宁若彤王丽春李琦涵刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒A组71型(Enterovirus group A 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CV-A16)。EV-A71感染易引发重症病例及死亡病例,而CV-A16感染所致的症状普遍较轻,且CV-A16容易引发重复感染,但目前其中的机理仍不清楚。本研究比较了EV-A71与CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞16HBE后I型干扰素(Type I interferon,IFN-Ι)产生相关基因的改变。结果发现EV-A71感染后TLR3、TLR7、RIG-I、MDA5、MAVS、MyD88、IRF3、IRF7、IFNα和IFNβ的基因表达量均发生了显著性地上调,而在CV-A16感染后仅MDA5显著性上调;TLR3和IRF3的基因表达水平显著性地下降,而其它基因表达水平均无显著性地变化。此外,病毒滴度和病毒拷贝数的检测结果显示,CV-A16在16HBE上的复制效率明显高于EV-A71。上述结果提示我们EV-A71和CV-A16感染16HBE对其IFN-I产生相关基因表达的影响完全不一样,且CV-A16更容易感染人呼吸道上皮细胞。本研究为EV-A71和CV-A16引起的临床症状差异的机理研究以及CV-A16重复感染的机理研究提供了线索。

关键词：手足口病肠道病毒A组71型(EV-A71) 柯萨奇病毒A组16型(CV-A16) 呼吸道上皮细胞干扰素

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2008年柯萨奇病毒A组16型昆明分离株KMM08全基因组序列分析

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中华流行病学杂志 2012年第2期33卷 220-225页

作者：马绍辉潘玥何春艳陈俊英施海晶孙强明李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析柯萨奇病毒A组16型（CA16）昆明分离株KMM08全基因序列，了解其遗传特性。方法设计针对CA16引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1，RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果获得KMM08全... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒A组16型（CA16）昆明分离株KMM08全基因序列，了解其遗传特性。方法设计针对CA16引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1，RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果获得KMM08全基因组核苷酸序列长度为7409bp，编码含2193个氨基酸残基的多聚蛋白；与其他CA16参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为79．0％～98．2％和94．5％～99．3％，其中SZ—HK08-3与国际标准株G10核苷酸和氨基酸同源性分别79．1％和94．8％；而与肠道病毒71型（EV71）标准株BrCr同源性分别为78．7％和89．0％。在各个区段上，KMM08与***08—3的核苷酸和氨基酸同源性分别为97．0％～99．0％和98．0％-100．0％，同源性最高；与G10的核苷酸和氨基酸同源性分别为74．2％～86．9％和90．9％～97．0％；与Ev71BrCr核苷酸和氨基酸同源性分别在65．0％～84．9％和71．0％。95．2％。进化分析发现KMM08属于B基因型的一个分支。RDP3和SimPlot3．5．1软件分析发现Tainan．5079—98序列发现重组信号，而KMM08未发现。结论KMM08分离株为B基因型；CA16与EV71在非结构区发生重组。

关键词：柯萨奇病毒A组16型全基因组序列分析

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柯萨奇病毒B3 KM06／2009株全基因组测序及其序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第4期34卷 282-288页

作者：刘建生邵聪文潘玥陈俊英吉玛朱艳菊马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析柯萨奇病毒B3（CVB3）KM06／2009全基因序列，并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B3（CVB3）KM06／2009全基因序列，并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果CVB3KM06／2009病毒株全基因组全长7401bp个核苷酸（nt），5’端和3’端分别为743nt和100nt的非编码区，5’和3’非编码区间为一个6558nt长的开放读码框，编码一个含2185个氨基酸的多聚蛋白，编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank库中CVB3Nancy原型株比较，其全基因组序列核苷酸同源性为81．4％，氨基酸同源性为95．7％；与无心肌毒力的临床分离株CVB3GA比较，其全基因组序列核苷酸同源性为80．7％，氨基酸同源性为96．4％；与历史同期国内临床分离株Beijing0811、SSM、GZ0803株比较，整个基因组的核苷酸同源性分别为98．1％、89．7％和88．4％，氨基酸同源性分别为99．4％、98．1％和98．1％。基于全基因组和全长VP1核酸序列的进化树图均显示，CVB3病毒株具有明显的时空聚簇分布特征。CVB3心肌毒力相关区域5’非编码区颈环结构1／RNA二级折叠结构分析结果表明，CVB3KM06／2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。结论基于基因分子生物信息学分析，与CVB3临床分离株比较，KM06／2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。

关键词：柯萨奇病毒B3 全基因组序列分析进化树图

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F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)SP-A株工作种子批的建立与检定

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中国新药杂志 2021年第15期30卷 1381-1385页

作者：邱恒田文志王微郑俊杰任芳芳段颖融李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infe... 详细信息

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infection, MOI)的比例接种病毒,逐日检测病毒滴度,绘制病毒增殖动力曲线以确定最适MOI和最佳收获时间。制备工作种子批,测定其病毒滴度及热稳定性,同时进行鉴别实验、无菌检查、分枝杆菌检查、支原体检查、病毒外源因子检查和小疏水蛋白(small hydrophobic protein, SH)核酸序列检查。利用该工作种子制备3批病毒收获液和疫苗原液并进行相关质量检定。结果:根据病毒增殖动力曲线,确定工作种子批的最适MOI为0.020,接种后d 7为病毒最佳收获时间,按此条件制备了工作种子批并完成检定,结果符合《中华人民共和国药典》2020年版三部腮腺炎减毒活疫苗毒种制造及检定质量要求。利用该工作种子批制备了3批病毒收获液和疫苗原液,经检定均符合《中华人民共和国药典》2020年版三部病毒收获液和原液的制造及检定规程要求。结论:建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SF-A株工作种子批,为后续F基因型腮腺炎减毒活疫苗的产业化提供了支持。

关键词：腮腺炎疫苗工作种子生产工艺检定

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狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析

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生物工程学报 2017年第11期33卷 1840-1849页

作者：严丽蔚巩蔚朱文兵张雪梅徐婧雯吴忠香卢孔杰孙明董少忠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,... 详细信息

表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白抗原特异性记忆性B细胞流式细胞术

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