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绒毛膜癌耐药细胞系的建立及人白细胞介素2基因转染后对其多药耐药性的逆转作用

中华妇产科杂志 2001年第9期36卷 549-553页

作者：崔竹梅向阳杨秀玉刘芝华中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肿瘤研究所分子肿瘤国家重点实验室 100730

目的　建立绒毛膜癌 (绒癌 )的耐药细胞系 ,应用基因工程技术将人白细胞介素 2 (hIL 2 )基因导入绒癌耐药细胞系 ,观察hIL 2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法　采用间歇诱导的方法 ,用鬼臼乙叉甙 (VP 16)诱导绒癌细胞系J... 详细信息

目的　建立绒毛膜癌 (绒癌 )的耐药细胞系 ,应用基因工程技术将人白细胞介素 2 (hIL 2 )基因导入绒癌耐药细胞系 ,观察hIL 2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法　采用间歇诱导的方法 ,用鬼臼乙叉甙 (VP 16)诱导绒癌细胞系JEG 3 ,建立耐药细胞系 ,四甲基偶氮唑蓝比色法检测该耐药细胞系对多种化学治疗药物的耐药指数 ,及多种耐药基因包括肺耐药蛋白、多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽转移酶、二氢叶酸还原酶和多药耐药基因 (MDR1)的mRNA表达情况。用逆转录聚合酶链反应技术 ,克隆hIL 2基因 ,将hIL 2基因插入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,提取质粒 ,通过阳离子脂质体将hIL 2基因转染绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hIL 2DNA片段的单个细胞克隆 ,检测转染hIL 2基因后该细胞耐药指数的变化 ,测定转染后细胞hIL 2和多种耐药基因mRNA的表达。结果　用VP 16采用间歇诱导法 ,成功建立绒癌的VP 16耐药细胞系JEG 3 /VP 16,并检测出MDR1mRNA表达。转染hIL 2基因后 ,绒癌细胞中检测出hIL 2mRNA表达 ,转染hIL 2基因的细胞的耐药指数降低 ,JEG 3 /VP 16细胞转染pcDNA3 1( + ) hIL 2后 ,对VP 16的耐药指数由 3 8 7降至 6 0～6 1,对甲氨蝶呤的耐药指数由 14 5降至 2 6～ 2 5 ,对更生霉素的耐药指数由

关键词：绒毛膜癌转染白细胞介素2 多药抗药性

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IL-2基因转染逆转绒癌耐药细胞系多药耐药性

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基础医学与临床 2001年第6期21卷 523-526页

作者：崔竹梅杨秀玉向阳刘芝华中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所分子肿瘤国家重点实验室北京100021

用RT PCR的方法克隆人的IL 2基因 ,将IL 2基因插入真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,通过阳离子脂质体将IL 2基因转染用足叶乙甙 (VP 16 )诱导建立的绒癌耐药细胞系JEG 3/VP16 ,用G418筛选含IL 2DNA片段的单个细胞克隆 ,检测转染前后细胞对 ... 详细信息

用RT PCR的方法克隆人的IL 2基因 ,将IL 2基因插入真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,通过阳离子脂质体将IL 2基因转染用足叶乙甙 (VP 16 )诱导建立的绒癌耐药细胞系JEG 3/VP16 ,用G418筛选含IL 2DNA片段的单个细胞克隆 ,检测转染前后细胞对 5 氟尿嘧啶 (5 Fu) ,氨甲蝶呤 (MTX) ,VP 16 ,更生霉素 (KSM) ,紫杉醇 (TAXOL)耐药指数的变化 ,用RT PCR的方法测定转染前后细胞IL 2和多种耐药基因包括肺耐药蛋白 (LRP) ,多药耐药相关蛋白 (MRP) ,谷胱甘肽转移酶 (GST π) ,二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达情况。结果表明转染IL 2的细胞中用RT PCR的方法检测到IL 2mRNA表达 ,转染IL 2基因的细胞耐药指数降低 ,MDR 1mRNA表达转阴 ,而其它耐药基因的表达无明显改变。

关键词： IL-2基因转染绒癌耐药细胞系

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利用微阵列技术初步分析肺鳞癌组织中的基因表达谱

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中国肿瘤临床 2001年第3期28卷 172-175页

作者：张恒刘芝华李泽坚周津王秀琴吴旻中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院胸外科北京市100730 中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室

目的：初步了解肺鳞癌及癌旁组织的基因表达谱的改变并探讨ｃＤＮＡ微阵列表达分析滤膜在肿瘤研究中的应用价值。方法：提取肺鳞癌及癌旁组织总ＲＮＡ，逆转录成ａ－３２Ｐ－ｄＡＴＰ，标记的ｃＤＮＡ探针，与含有５８８个肿瘤相关基... 详细信息

目的：初步了解肺鳞癌及癌旁组织的基因表达谱的改变并探讨ｃＤＮＡ微阵列表达分析滤膜在肿瘤研究中的应用价值。方法：提取肺鳞癌及癌旁组织总ＲＮＡ，逆转录成ａ－３２Ｐ－ｄＡＴＰ，标记的ｃＤＮＡ探针，与含有５８８个肿瘤相关基因的ＡｔｌａｓＴＭ　Ｈｕｍａｎ　Ｃａｎｃｅｒ　ｃＤＮＡ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｒｒａｙ杂交。放射自显影后利用扫描杂交信号灰度的强弱在专用的ＡｔｌａｓＩｍａｇｅＴＭ软件分析后得出结果。结果：肺鳞癌组织中，肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）等１６个基因表达上调，白介素－１３前体等８个基因表达下调。结论：肺鳞癌恶性表型是由其发生过程中多个基因表达的复杂变化决定的。Ａｔｌａｓ微阵列表达分析滤膜是研究基因表达谱的较好方法。

关键词： Atlas^TM 微点阵膜肺鳞癌基因表达谱

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高剂量表阿霉素在肿瘤患者中的药物动力学和药效学研究

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癌症 2000年第4期19卷 374-377页

作者：董梅冯奉仪付强朱珠中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院内科北京100021 北京协和医院药剂科临床药理研究室北京100730

目的 :研究高剂量表阿霉素 (EPI)在肿瘤化疗患者体内的药物动力学过程 ,并初步探讨药效学特点。方法 :11例肿瘤患者接受了包含 10 0mg/m2 高剂量EPI的联合化疗 ,高效液相色谱法 (HPLC)测定血药浓度 ;PCNONLIN程序进行药动学房室模型数... 详细信息

目的 :研究高剂量表阿霉素 (EPI)在肿瘤化疗患者体内的药物动力学过程 ,并初步探讨药效学特点。方法 :11例肿瘤患者接受了包含 10 0mg/m2 高剂量EPI的联合化疗 ,高效液相色谱法 (HPLC)测定血药浓度 ;PCNONLIN程序进行药动学房室模型数据拟合和参数计算 ;血液学毒性指标作为药效学参数 ,进行药动学和药效学相关性及剂量调整因素的研究。结果 :高剂量EPI的消除具有典型的三室特征 ,患者对EPI的代谢存在较大的个体差异 ;药效学和药动学参数之间未见到明显相关性 ,年龄与血浆清除率之间呈负相关。结论 :经与低剂量表阿霉素相比较 ,并未发现药物动力学参数的差异 ;年龄是影响清除率的一个重要因素 ,对高龄患者应适当减少药物剂量 ;应用 10 0mg/m2 EPI患者的耐受性良好。

关键词：表阿霉素药物动力学药效学肿瘤药物疗法

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喉癌组织及手术切缘P53和P16蛋白表达与局部复发的关系

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中华耳鼻咽喉科杂志 2000年第6期35卷 461-463页

作者：魏伯俊唐平章屠规益吕宁梁克北京中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科 100730 中国医学科学院肿瘤医院头颈外科中国医学科学院肿瘤医院病理科中国医学科学院肿瘤医院放射生物室

目的　用免疫组织化学方法监测P16和P5 3蛋白在喉癌手术切缘中的表达情况及其与肿瘤局部复发的关系。方法　选择HE染色病理学检查手术切缘为阴性但术后肿瘤局部复发的 5 2例喉癌作为复发组 ,并按照患者的年龄、性别、临床分型、TNM分期... 详细信息

目的　用免疫组织化学方法监测P16和P5 3蛋白在喉癌手术切缘中的表达情况及其与肿瘤局部复发的关系。方法　选择HE染色病理学检查手术切缘为阴性但术后肿瘤局部复发的 5 2例喉癌作为复发组 ,并按照患者的年龄、性别、临床分型、TNM分期、病理分级、术前放疗剂量等可能影响因素选择 48例随访 5年以上无肿瘤局部复发者为无复发组。对 2组手术切缘和肿瘤标本同时行P16和P5 3蛋白免疫组织化学检查。结果　在 10 0例喉癌组织中P5 3蛋白的表达率和P16蛋白的丢失率分别为 5 4%和 40 % ,喉癌组织中P16和P5 3蛋白表达同时异常的喉癌患者当其手术切缘粘膜中P16和P5 3蛋白表达也同时异常时 ,其术后肿瘤局部复发率为 85 %。P16和P5 3蛋白表达与喉癌的临床分型和T分期无关。结论　采用免疫组化方法联合检测P16和P5 3蛋白在喉癌组织和手术切缘中的表达情况可为筛选术后肿瘤局部复发的高危病例提供依据。

关键词：喉肿瘤蛋白质P53 蛋白质P16 肿瘤复发,局部

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癌症患者外周血Th(CD_(4)^(+))淋巴细胞rDNA转录活性的图像分析

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中国肿瘤临床与康复 2000年第4期7卷 6-8页

作者：陈立奇段丽朱慧萍万远廉丁丽华林其燧刘广贤李金翰陈家薇北京医科大学基础医学院北京100083 北京联合大学信息学院北京医科大学第一临床学院外科北京医科大学第三临床学院职业病中心中国医学科学院北京协和医院检验科中国人民解放军307医院低温肿瘤实验室第一军医大学南方医院肿瘤科哈尔滨医科大学第二临床学院病理科

目的　用核仁银染强度探讨肿瘤患者外周血Th淋巴细胞rDNA转录活性与机体免疫状况的关系。方法　应用计算机图象分析系统对癌症、炎症、非肿瘤非炎性疾病患者及正常人外周血Th(CD+ 4)淋巴细胞中的核仁银染强度进行比较。结果　与炎症、... 详细信息

目的　用核仁银染强度探讨肿瘤患者外周血Th淋巴细胞rDNA转录活性与机体免疫状况的关系。方法　应用计算机图象分析系统对癌症、炎症、非肿瘤非炎性疾病患者及正常人外周血Th(CD+ 4)淋巴细胞中的核仁银染强度进行比较。结果　与炎症、非肿瘤非炎症疾病患者及正常人相比 ,癌症患者Th淋巴细胞核仁银染强度显著下降。结论　癌症患者淋巴细胞rDNA转录活性的大小可以灵敏地反映体内癌变进展程度与机体免疫状况的相互关系。提示这一结果有可能为临床诊断癌症提供一个新的、简便可行的方法。

关键词：癌症图像分析 Th(CD_(4)^(+)) 淋巴细胞 rDNA转录活性核仁银染强度

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抗Pgp抗体PHMA02在肿瘤临床中的应用研究及预后分析

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中国肿瘤临床 1999年第9期26卷 645-649页

作者：许元富杨纯正熊冬生邵晓枫王珊孙云晖薛艳萍李维廉中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020 重庆医科大学北京协和医院天津市第二中心医院肿瘤研究室

目的：应用单抗ＰＨＭＡ０２对１４８例肿瘤患者Ｐ－糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达进行检测，并对该单抗的特异性、检测结果与临床符合率以及预后的准确性进行评估。方法：应用免疫组化法检测了４７例实体瘤标本，应用药敏实验检测１５ ... 详细信息

目的：应用单抗ＰＨＭＡ０２对１４８例肿瘤患者Ｐ－糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达进行检测，并对该单抗的特异性、检测结果与临床符合率以及预后的准确性进行评估。方法：应用免疫组化法检测了４７例实体瘤标本，应用药敏实验检测１５例儿童恶性肿瘤；应用间接免疫荧光法、ＲＴ－ＰＣＲ法和药敏实验检测了１０１例急性白血病（ＡＬ）患者；用医学统计软件分析数据。结果：１）在４７例实体瘤标本中，儿童恶性肿瘤中多药耐药阳性（ＭＤＲ＋）表达率较高（８６７％），乳腺癌淋巴结转移灶中ＭＤＲ＋表达率为６６７％，显著高于乳腺癌原发灶的３００％（Ｐ＜００１）。２）在１０１例急性白血病（ＡＬ）患者中，难治和复发组的ＭＤＲ＋表达率（５２９％）显著高于初诊组（１９２％）（Ｐ＜００１）。３）单抗ＰＨＭＡ０２的检测结果与国外同型单抗ＪＳＢ－１的平行检测结果呈正的直线相关（Ｐ＜００５），与ＲＴ－ＰＣＲ的检测结果具有相关性（Ｐ＜００１）；部分标本的药敏实验结果与单抗ＰＨＭＡ０２的检测结果基本一致。结论：１）单抗ＰＨＭＡ０２的检测结果与临床有较好的符合率，可在临床上应用。２）Ｐｇｐ在成人肺癌和乳腺癌中均有一?

关键词：单克隆抗体 P-糖蛋白多药耐药肿瘤治疗

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双重原位杂交法同时检测单细胞内两个基因的表达

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中华病理学杂志 1997年第6期26卷 372-374页

作者：丁大成董怡李申德甘晓丹崔慧云杨晓杰中国医学科学院协和医科大学北京协和医院风湿免疫科北京同仁医院内科中国医学科学院协和医科大学肿瘤研究所细胞生物室

双重原位杂交法同时检测单细胞内两个基因的表达丁大成董怡李申德甘晓丹崔慧云杨晓杰细胞内一个基因的表达常与其它基因之间存在着多层次、多方面的相互影响，构成了一个复杂的四维系统。因此，目前在分子生物学的研究中迫切需要一种研... 详细信息

双重原位杂交法同时检测单细胞内两个基因的表达丁大成董怡李申德甘晓丹崔慧云杨晓杰细胞内一个基因的表达常与其它基因之间存在着多层次、多方面的相互影响，构成了一个复杂的四维系统。因此，目前在分子生物学的研究中迫切需要一种研究一个细胞中多种基因同时表达的方法...

关键词：双重原位杂交单细胞基因表达检测

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干燥综合征病人小涎腺中细胞因子的表达

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中华医学杂志 1996年第6期76卷 427-430页

作者：丁大成董怡李申德李小春杨晓洁甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科北京同仁医院内科中国医学科学院肿瘤研究所细胞生物室北京协和医院口腔科

探讨５种细胞因子在干燥综合征（ＳＳ）病人自身免疫性小涎腺炎的发生和破坏过程中的作用。方法取２４例唇腺活检标本，常规石蜡包埋保存、切片，用酶标记双重原位杂交方法对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ＩＬ－１β）... 详细信息

探讨５种细胞因子在干燥综合征（ＳＳ）病人自身免疫性小涎腺炎的发生和破坏过程中的作用。方法取２４例唇腺活检标本，常规石蜡包埋保存、切片，用酶标记双重原位杂交方法对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ＩＬ－１β）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、血小板衍化生长因子α（ＰＤＧＦα）和ＰＤＧＦβ等５种细胞因子的ｍＲＮＡ表达进行检测。结果ＳＳ病人唇腺中所有细胞因子的表达均高于对照组。原发ＳＳ组唇腺的ＴＮＦα的表达强度明显高于继发ＳＳ组。炎症不同时期细胞因子表达的种类不同。同时表达两种细胞因子的细胞仅见于唇腺中浸润的单个核细胞。腺泡上皮细胞中表达ＴＮＦα发生在间质淋巴细胞浸润之前。病人唇腺中ＩＬ－６阳性者血清中的ＡＮＡ阳性率显著高于阴性者。结论原发ＳＳ的发病过程可能是某些始动因子活化了易感人群的腺泡上皮细胞，使之分泌ＴＮＦα。ＴＮＦα又引起ＩＬ－１等细胞因子的表达，导致小涎腺的炎症和破坏。

关键词：干燥综合征肿瘤坏死因子涎腺

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雌激素水平对应激引起的大鼠心血管前列腺素代谢的影响

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基础医学与临床 1996年第6期16卷 454-457页

作者：左萍萍林守清张颖段金虹胡韶毅林孟珍北京协和医院妇科内分泌组中国医学科学院中国协和医科大学基础医学院药理室

本文观察了去除卵巢（ＯＶＸ）大鼠在水浸拘束条件下，心肌和主动脉血栓素及前列环素（测其代谢产物ＴＸＢ＿２和６－ｋｅｔｏＰＧＦ＿（１ａ））含量的变化，并观察补充雌激素后的影响。结果：在实施应激后，ＯＶＸ鼠血管ＴＸＢ＿２和... 详细信息

本文观察了去除卵巢（ＯＶＸ）大鼠在水浸拘束条件下，心肌和主动脉血栓素及前列环素（测其代谢产物ＴＸＢ＿２和６－ｋｅｔｏＰＧＦ＿（１ａ））含量的变化，并观察补充雌激素后的影响。结果：在实施应激后，ＯＶＸ鼠血管ＴＸＢ＿２和６－ｋｅｔｏＰＧＦ＿（１ａ）比值（Ｔ／Ｋ）明显高于假手术应激组（Ｐ＜０．０１），补充雌激素后恢复正常（Ｐ＜０．０５）。提示：雌激素对维持正常心血管舒缩功能，提高机体对外界刺激的适应性方面具有重要作用。

关键词：绝经期应激妇女心血管疾病前列腺素雌二醇

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