检索结果-内蒙古大学图书馆

人源基因载体pHrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究(英文)

生物化学与生物物理进展 2007年第5期34卷 465-470页

作者：薛志刚李剑尹彪张雅坤刘雄昊潘乾龙志高戴和平夏昆邬玲仟梁德生夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动... 详细信息

利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动子hTERTp组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53,构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro;脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402;24h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达;利用Hoechst33258、Annexin V/PI染色,检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达;Hoechst33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达,并能形成外源性p53蛋白,但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与p53对hTERT的负调控作用有关.

关键词：人源基因载体人端粒酶逆转录酶(hTERT) p53

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结肠腺瘤性息肉病蛋白通过与SMAP/KAP3 相互作用与微管结合

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 885-890页

作者：王成郑多钟向阳夏昆黄亮群戴和平陈玉祥夏家辉中南大学湘雅医学院中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polytosis coli,APC)的突变导致家族性结肠息肉腺瘤病和散发性结肠癌,APC基因编码一个具有多个结构域、多种磷酸化状态的大分子蛋白质.APC蛋白可通过C段直接或间接与微管结合,同时还可以通过中段与微... 详细信息

结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polytosis coli,APC)的突变导致家族性结肠息肉腺瘤病和散发性结肠癌,APC基因编码一个具有多个结构域、多种磷酸化状态的大分子蛋白质.APC蛋白可通过C段直接或间接与微管结合,同时还可以通过中段与微管结合,但其结合的机制目前还不清楚.为进一步研究APC与其他蛋白质的相作用,利用酵母双杂交技术运用APC中段(1 500 bp～4 800bp)构建诱饵质粒,筛选人胎脑cDNA文库,得到一个与APC相互作用的蛋白SMAP/KAP3,SMAP/KAP3是驱动蛋白KIF3A/3B的相关蛋白.通过免疫共沉淀和双色免疫荧光共定化的方法,证实了APC与SMAP/KAP3在体内的相互作用,提示APC可能通过SMAP/KAP3 KIF3A/B参与沿微管的运动.

关键词：结肠腺瘤性息肉病基因(APC),SMAP/KAP3,酵母双杂交,相互作用,微管

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应用聚合酶链式反应-酶切法进行脊髓性肌萎缩的基因诊断及产前诊断

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中华医学杂志 2001年第23期81卷 1447-1449页

作者：李崎马燕琳潘乾夏家辉戴和平中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的　建立一种高效、快速的脊髓性肌萎缩 (SMA)的基因诊断与产前诊断的方法。方法　基于运动神经元生存基因 (SMN基因 )的两个同源拷贝碱基上的差异 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 酶切的方法 ,选择特异的酶切位点对 1 1例SMA患儿进行SMN... 详细信息

目的　建立一种高效、快速的脊髓性肌萎缩 (SMA)的基因诊断与产前诊断的方法。方法　基于运动神经元生存基因 (SMN基因 )的两个同源拷贝碱基上的差异 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 酶切的方法 ,选择特异的酶切位点对 1 1例SMA患儿进行SMN基因检测。同时采用SMN基因内部及旁侧的C1 61、C1 71、C2 1 2、C2 72等 4对 (CA)n对 4个家系进行连锁分析。结果　 1 1例SMA患儿中 1 0例患儿缺失SMNt7、8号外显子 ,1例患儿仅缺失 7号外显子。 4个SMA家系中有 3个胎儿未发现与先证者完全相同的SMN基因片段 ,1个胎儿检测到与先证者完全相同的SMN基因片段。结论　该方法快速、简便 ,适合临床推广。

关键词：脊髓性肌萎缩基因诊断聚合酶链反应产前诊断 SMA

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一个中国耳聋家系的SLC26A4基因分析(英文)

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中华医学遗传学杂志 2005年第4期22卷 376-379页

作者：胡浩梁德生邬玲仟冯永蔡芳夏昆潘乾龙志高戴和平夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的确定一个非综合征型耳聋家系的致病基因。方法应用聚合酶链反应直接测序方法,对溶质转运蛋白家族26,成员4(solutecarrierfamily26,member4;SLC26A4)基因的所有外显子及其与内含子交界处进行测序寻找突变。结果在该家系先证者发现SLC... 详细信息

目的确定一个非综合征型耳聋家系的致病基因。方法应用聚合酶链反应直接测序方法,对溶质转运蛋白家族26,成员4(solutecarrierfamily26,member4;SLC26A4)基因的所有外显子及其与内含子交界处进行测序寻找突变。结果在该家系先证者发现SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变,其父亲为S448X的杂合突变,其母亲为N392Y的杂合突变。结论SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变是导致该先证者耳聋发生的原因。

关键词：中国耳聋家系疾病 SLC26A4基因基因突变

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人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文)

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中华医学遗传学杂志 2005年第5期22卷 493-496页

作者：梁羽梁德生薛志刚龙志高邬玲仟潘乾胡艺俏戴和平夏昆夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆... 详细信息

目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。

关键词：人源载体融合基因 Cos-7细胞基因表达微小肌营养不良蛋白增强绿色荧光蛋白杜氏肌营养不良

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逆转录病毒载体介导的RNAi技术稳定抑制前列腺癌细胞株β-catenin的表达

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中南大学学报（医学版） 2005年第3期30卷 253-257页

作者：胡政蔡芳程莉娟夏昆夏家辉张灼华中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERret... 详细信息

目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERretro,转染包装细胞PA317,收集含病毒颗粒的培养上清感染DU145细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到克隆,继续培养2个月形成稳定克隆。免疫印迹检测癌细胞内βcatenin及受其调控的靶基因cmyc和cyclinD1的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测βcatenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:免疫印迹和RTPCR结果显示,筛选得到的2个克隆中细胞内βcatenin表达水平下降;且克隆内cmyc,cyclinD1基因的表达下调;MTT检测显示,βcatenin表达抑制的细胞克隆吸光度值下降,这表明克隆内细胞数量减少,细胞增殖受到了抑制。结论:成功建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株。

关键词： Wnt/β—catenin RNAi 前列腺癌逆转录病毒载体稳定抑制

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14例非缺失型假性肥大型肌营养不良患者的分子鉴定

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中华医学遗传学杂志 2008年第6期25卷 633-636页

作者：薛晋杰朱海燕邬玲仟梁德生潘乾龙志高戴和平夏昆夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410018

目的对非缺失型假性肥大型肌营养不良（Duchenne／Becker muscular dystrophy，DMD／BMD）患者及其家族成员进行基因诊断，以提供准确的遗传咨询和产前诊断。方法应用变性高效液相色谱技术（denaturing high performance liquid chromat... 详细信息

目的对非缺失型假性肥大型肌营养不良（Duchenne／Becker muscular dystrophy，DMD／BMD）患者及其家族成员进行基因诊断，以提供准确的遗传咨询和产前诊断。方法应用变性高效液相色谱技术（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）对14例DMD患者的DMD基因79个外显子及5’一非翻译区和3＇-非翻译区部分片段（共86个片段）进行检测，对检测到异源双峰的PCR产物进行测序。结果14例患者中共检出7种致病点突变（其中2种未见报道），14种已报道的多态改变和7种未报道的序列变异；其中5例患者的母亲为致病基因携带者。结论DHPLC技术可以对非缺失型DMD患者进行有效的基因诊断，并对家族女性成员进行携带者检测。

关键词：假性肥大型肌营养不良点突变变性高效液相色谱携带者检测

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人类TECTB基因的电子克隆

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Acta Genetica Sinica 2003年第4期30卷 317-320页

作者：张华莉邓昊张瑞芳夏昆夏家辉中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

用小鼠和鸡的 β tectorin基因 (Tectb)的编码区序列对NCBI数据库进行Blastn比较 ,得到一个相似性很高的人的gDNA序列 (GenBank :AL15 7786 ) ,用GENSCAN、MZEF程序和Blast2sequence程序分析AL15 7786 ,推测AL15 7786中包含一个编码区由... 详细信息

用小鼠和鸡的 β tectorin基因 (Tectb)的编码区序列对NCBI数据库进行Blastn比较 ,得到一个相似性很高的人的gDNA序列 (GenBank :AL15 7786 ) ,用GENSCAN、MZEF程序和Blast2sequence程序分析AL15 7786 ,推测AL15 7786中包含一个编码区由 10个外显子构成的基因———TECTB基因。人TECTB基因的开放阅读框为 990bp ,推测编码32 9个氨基酸。人TECTB基因与小鼠的Tectb基因在 990bp有 88 1%的一致性 ,在 32 9个氨基酸有 94 2 %的一致性。用Electronic PCR将人TECTB基因定位于 10q2 5。

关键词： TECTB 盖膜生物信息学电子克隆 Electronic-PCR

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生物信息学技术克隆人类神经髓鞘蛋白零家族基因

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第4期32卷 364-368页

作者：唐冬生禹宽平张华莉潘乾戴和平夏家辉湖南医科大学中国医学遗传学国家重点实验室!长沙410078

为克隆新的髓鞘蛋白相关基因 ,将MPZ基因编码区cDNA序列与EST数据库进行同源性比较 ,得到与MPZ显著相似的 2个EST ,构建成 80 1bp的重叠群。此重叠群与定位在 1q2 4的 12 8kbgDNA的相似性为 10 0 %。计算机分析表明 80 1bp的重叠群可能... 详细信息

为克隆新的髓鞘蛋白相关基因 ,将MPZ基因编码区cDNA序列与EST数据库进行同源性比较 ,得到与MPZ显著相似的 2个EST ,构建成 80 1bp的重叠群。此重叠群与定位在 1q2 4的 12 8kbgDNA的相似性为 10 0 %。计算机分析表明 80 1bp的重叠群可能存在一个 435bp的阅读框架。在重叠群上设计两个引物与文库载体臂上的引物配对 ,扩增各种cDNA文库DNA作巢式PCR。在所得cDNA上再设计引物进行巢式PCR ,最终克隆了人髓鞘蛋白零样基因I型和II型 (MPZL1a、MPZL1b ,GenBank :AF0 95 72 7、AF0 92 42 4)。对MPZL与MPZ的基因结构和推导的蛋白质一级结构进行分析与比较 ,证明MPZL1是MPZ家族的第二个成员。对 2 4个腓骨肌萎缩症家系和 2 6个非综合征型耳聋家系进行了MPZL1基因的突变检测 ,没有发现突变

关键词：髓鞘蛋白零样基因计算机分析基因克隆腓骨肌萎缩症

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缺失型Duchenne／Becker肌营养不良家系女性携带者及新发突变的确认(英文)

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Acta Genetica Sinica 2006年第3期33卷 206-212页

作者：朱海燕邬玲仟梁德生潘乾夏家辉中南大学湘雅医院中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078

应用多重PCR(multiple polymerase reaction／mPCR)技术,联合DMD基因内部及附近11个短串连重复序列(short tandem repeats,STRs)位点连锁分析,对缺失型Duchenne／Becker肌营养不良(Duchenne／Becker Muscular Dystrophy, DMD／BMD)家系成员进行DMD基因分型,确定家系中女性成员是否携带者,并进行产前诊断。3个家系中的4名缺失型患者,其中2例为新发突变;4位女性成员中,1名为携带者。应用mPCR和11个STRs的连锁分析,能快速、准确、客观判断家系中女性成员是否携带者身份,适于DMD／BMD临床研究机构遗传咨询、基因诊断和产前诊断常规应用。但在 mPCR分析过程中,发现45号外显子扩增产物在不同凝胶中电泳迁移率不同。聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gels Electrophoresis／PAGE)对mPCR产物分析快速、清晰,但需要注意片段迁移率,以防止分析错误。

关键词：假性肥大型进行性肌营养不良携带者诊断连锁分析

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