检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Genetica Sinica 2003年第7期30卷 687-692页

作者：罗阳姜莉敖雪吕志刘恒丹徐岩敖杨任群鲁翀徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

氨基肽酶N是人类冠状病毒HCoV 2 2 9E的细胞受体 ,可能为SARS冠状病毒 (SARS CoV)S蛋白的受体。应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查了正常无关个体中氨基肽酶N编码基因ANPEP的全部外显子及其两侧部分内含子序列。对筛查中DHPLC峰型... 详细信息

氨基肽酶N是人类冠状病毒HCoV 2 2 9E的细胞受体 ,可能为SARS冠状病毒 (SARS CoV)S蛋白的受体。应用变性高效液相色谱 (DHPLC)技术筛查了正常无关个体中氨基肽酶N编码基因ANPEP的全部外显子及其两侧部分内含子序列。对筛查中DHPLC峰型提示有基因变异存在的DNA片段行PCR产物直接测序 ,共发现 9种单核苷酸多态 (SNP) ,其中 4种为非同义SNP ,分别为T32 1M(96 2C >T)、S6 5 1L(195 2C >T)、S75 2N(2 2 5 5G >A)和G76 4R(2 2 90G >A) ;其余 5种SNP为T795T(2 385C >T)、IVS7+17G >A、IVS14 16A >G、IVS17+12C >G和IVS17+44C >T。这些SNP的发现 ,为SARS CoV的宿主遗传因素研究 ,特别是发现SARS CoV感染和SARS发病的易感基因或抗病基因 ,提供了遗传标记。

关键词： SARS冠状病毒氨基肽酶N 变性高效液相色谱单核苷酸多态

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一种从人血凝块中提取基因组DNA的方法

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细胞生物学杂志 2004年第5期26卷 548-549页

作者：陈立姜莉罗阳张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

介绍了一种新的从人血凝块中提取基因组DNA的方法,用该方法提取的DNA成功地应用于PCR和限制性酶切等后续实验中。基本过程为首先机械粉碎,然后高盐高EDTA溶液处理,含蛋白酶K和SDS的消化液变换温度消化,苯酚氯仿抽提。

关键词：血凝块人基因组DNA 聚合酶链反应

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应用DHPLC技术检测非缺失型DMD致病基因的新突变

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中华儿科杂志 2007年第6期45卷 413-416页

作者：陈亚男周鑫金春莲徐岩林长坤曹丽华李宁张学罗阳中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因... 详细信息

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因组 DNA 为模板,通过 PCR反应,分别扩增 dystrophin 基因外显子及侧翼序列,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行突变筛查,对 DHPLC 峰形变异的外显子片段行 PCR 产物直接测序,确定突变的具体位点和类型。结果筛查了包括2个缺失热点区 dystrophin 基因的68个外显子和3′UTR 部分片段,分别在4例患儿中检测出该基因的4种致病突变:c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA,c.8656C>T 和 c.8608C>T。前两例引起移码突变分别导致 ***2270MeffsX9和 ***1654LysfsX5,后两例为无义突变分别导致 p.R2886X 和 p.R2870X。其中 c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA 和 c.8656C>T 为文献未曾报道的新突变。结论 DHPLC 可以作为有效地筛查 DMD 微小突变的检测方法。

关键词：肌营养不良,杜氏色谱法,高效液相突变

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中国人群中STK15基因内两种非同义SNP的连锁不平衡和单体型分析

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遗传学报 2005年第4期32卷 331-336页

作者：陈立敖雪任群王振宁鲁翀徐岩姜莉罗阳徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→... 详细信息

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→T与人类肿瘤遗传易感性相关.应用PCR-RFLP技术确定了91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)两种SNP在中国人群中的基因型和单体型.采用巢式PCR方法扩增了193例正常个体的DNA样品,通过错配正向巢式内引物引入EcoRⅠ酶切位点.巢式PCR扩增产物用限制性内切酶EcoRⅠ和AccⅡ双酶切消化,其中EcoRⅠ能酶切91A,AccⅡ能切开169G,用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法鉴定双酶切结果,发现了4种可能的单体型中的3种,其单体型频率分别为:p(91A-169G)=68.65%,p(91T-169A)= 10.88%,p(91T-169G)=20.47%,p(91A-169A)=0%;它们组成的6种基因型及频率分别为: 91A-169G/91A-169G (46.11%),91A-169G/91T-169A(14.51%),91A-169G/91T-169G(30.57%),91T-169G/91T-169G(3.11%),91T-169G/91T-169A (4.15%),91T-169A/91T-169A(1.55%).等位基因及单体型数据分析结果表明,91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)之间存在连锁不平衡.

关键词： STK15基因单核苷酸多态单体型连锁不平衡

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一种原位示踪外源目的基因表达载体的构建

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中国生物工程杂志 2004年第9期24卷 89-92页

作者：刘琦罗阳姜莉张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

应用分子克隆技术 ,分别将增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)、内部核糖体进入位点 (internalribosomeentrysite,IRES)和编码H ras基因C端 2 0个氨基酸的DNA(rasc2 0 )片段插入真核表达载体pcDNA3,构建真核重组表达载体并将其命名为pZX。通过脂质体介导将该载体转染人宫颈癌细胞系HeLa ,培养过夜后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布 ,并与pEGFP C3质粒DNA转染该细胞系进行比较。结果表明 ,转染pZX载体的实验组细胞膜发出绿色荧光 ,而对照组绿色荧光则均匀弥散于整个细胞中。

关键词：转染 EGFP IRES 脂质体介导 H-ras基因对照组分子克隆技术目的基因表达载体真核

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胃癌中18号染色体的杂合性丢失研究

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世界华人消化杂志 2003年第3期11卷 310-313页

作者：任群王振宁罗阳敖杨鲁冲姜莉徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室、卫生部细胞生物学重点实验室辽宁省沈阳市110001

目的:检测原发性胃癌组织中18号染色体的杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)情况.方法:联合应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)-高可信度全基因组扩增(high fidelity-Whole genomeamplification,HF-WGA)-变性高效液相色谱(denaturedhigh pressure liquid chromatography,DHPLC)方法,检测胃癌中18号染色体上短插入/缺失多态(short insertiondeletion polymorphism,SIDP)标记的LOH.结果:在所检测的10例胃癌组织中3例呈现SIDP位点LOH(30%);9个SIDP位点中3个(MID148、MID150和MID352)发生LOH,其中MID150位点LOH见于3例胃癌组织.在1例胃癌组织中3个SIDP位点同时呈现LOH.结论:联合应用LCM和HF-WGA,经DHPLC分析SIDP标记,可进行肿瘤细胞中LOH检测.本研究为18号染色体上胃癌相关抑癌基因的研究提供一种新技术策略.

关键词：胃癌组织染色体杂合性丢失 liquid chromatography 位点联合应用检测全基因组扩增高效液相色谱肿瘤细胞抑癌基因显微切割同时呈现缺失多态技术策略激光捕获方法标记原发性可信度

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贲门癌中染色体8p21-p23杂合性丢失的研究

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遗传 2006年第6期28卷 641-645页

作者：满晓辉徐岩王振宁吕志徐米多姜莉罗阳徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤外科沈阳110001 中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学重点实验室北京100005

染色体8p21-p23区域存在与多种肿瘤相关的抑癌基因.为明确该染色体区域的抑癌基因与贲门癌的关系,我们进行了贲门癌中染色体8p21-p23区域微卫星标记的杂合性丢失研究.首先采用激光捕获显微切割技术从19例贲门癌组织中获得均质的肿瘤细... 详细信息

染色体8p21-p23区域存在与多种肿瘤相关的抑癌基因.为明确该染色体区域的抑癌基因与贲门癌的关系,我们进行了贲门癌中染色体8p21-p23区域微卫星标记的杂合性丢失研究.首先采用激光捕获显微切割技术从19例贲门癌组织中获得均质的肿瘤细胞及正常的胃粘膜细胞,然后利用多重置换扩增技术扩增捕获细胞的全基因组DNA.选择覆盖染色体8p21-p23区域的13个微卫星标记,利用PCR结合硝酸银染色方法分析了肿瘤细胞中染色体8p21-p23的杂合性丢失情况.结果显示,在贲门癌中染色体8p21-p23的总丢失频率高达63.2%(12/19),单一标记的丢失频率为25%～55.6%.根据不同肿瘤组织中杂合性丢失的情况,我们确定了一个最小缺失区域,即8p22GGAA-8p22ATCT标记间约1.2 Mb的范围.研究结果表明,染色体8p22区域抑癌基因在贲门癌发生发展中起重要作用;染色体最小重叠区域的确定对最终鉴定该区域内的抑癌基因有参考价值.

关键词：贲门癌抑癌基因染色体8p21-p23 杂合性丢失

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人类生殖相关新基因的定位和组织表达

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遗传 2003年第6期25卷 633-636页

作者：罗阳于秉治中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学基因组学研究室沈阳110001 中国医科大学生物化学教研室沈阳110001

基因定位对研究基因之间以及基因与疾病之间的相互关系具有重要意义。应用辐射杂种细胞系技术(RH)对我们克隆的人类新基因HBRP(HumanBSP RelatedProtein)进行了染色体定位,结果将该基因定位于19q13.2～13.3,同时应用生物信息学方法在人... 详细信息

基因定位对研究基因之间以及基因与疾病之间的相互关系具有重要意义。应用辐射杂种细胞系技术(RH)对我们克隆的人类新基因HBRP(HumanBSP RelatedProtein)进行了染色体定位,结果将该基因定位于19q13.2～13.3,同时应用生物信息学方法在人类基因组重叠片段数据库进行该基因的定位,结果相吻合。研究证明,RH技术具有快速、精确、简便等优点,是基因定位研究中一强有力的技术。同时通过RT PCR方法研究了HBRP基因在人体各组织中的表达分布,结果显示该基因在睾丸、肠、肾、肝、脾、胃、胰腺组织有较高的表达,而在检测的脑、肺、骨骼肌、心肌组织中表达较弱。

关键词：辐射杂种细胞系染色体定位 HBRP RT-PCR 生物信息学人类生殖基因组织表达

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一种新的精子结合蛋白HBRP在原核表达及其活性研究

引用

细胞生物学杂志 2003年第4期25卷 246-250页

作者：罗阳宗志宏于秉治中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学基因组学研究室沈阳110001 中国医科大学生物化学教研室沈阳110001

为了发现和研究牛精浆(bovine seminal plasma,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用,我们克隆了人类生殖相关新基因HBRP(Human BSP-Related Proteins),本文通过基因重组技术,构建了GST-HBRP融合蛋白表达质粒,在大肠杆... 详细信息

为了发现和研究牛精浆(bovine seminal plasma,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用,我们克隆了人类生殖相关新基因HBRP(Human BSP-Related Proteins),本文通过基因重组技术,构建了GST-HBRP融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中获得大量表达,并检测了该蛋白对PKC活性的影响。

关键词：精子结合蛋白 HBRP 原核表达活性

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多重置换扩增结合激光捕获显微切割技术在胃癌基因组学研究中的应用

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中华实验外科杂志 2007年第11期24卷 1350-1352页

作者：吕志徐岩满晓辉王振宁罗阳曹磊徐惠绵中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤外科

目的探讨多重置换扩增(MDA)与激光捕获显微切割(LCM)技术相结合,并应用到胃癌细胞杂合性丢失(LOH)分析等研究的可行性.方法利用LCM技术从胃癌组织冰冻切片中分别获取正常胃黏膜细胞和胃癌细胞,提取基因组DNA后,进行全基因组多重置换扩... 详细信息

目的探讨多重置换扩增(MDA)与激光捕获显微切割(LCM)技术相结合,并应用到胃癌细胞杂合性丢失(LOH)分析等研究的可行性.方法利用LCM技术从胃癌组织冰冻切片中分别获取正常胃黏膜细胞和胃癌细胞,提取基因组DNA后,进行全基因组多重置换扩增.进而,将MDA产物用于聚合酶链反应(PCR)扩增ACE2、TP53和ACTB基因片段,以及微卫星位点的LOH分析.结果位于不同染色体的3个基因片段均得到较好的扩增,而且MDA产物的扩增效率明显高于未经MDA的基因组DNA.另外,MDA产物的LOH分析结果与未经MDA的基因组DNA结果一致.结论 MDA与LCM技术相结合,是一种可行的全基因组扩增技术路线,可用于后续的基因组学研究.

关键词：胃癌杂合性丢失基因

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